GA∕T 1606-2019 法庭科学 生物检材中毒死蜱等五种有机磷农药检验 快速溶剂萃取气相色谱和气相色谱-质谱法(公共安全).pdf

ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中毒死蜱等五种有机磷农药检验 快速溶剂萃取气相色谱和气相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for five organophosphorus pesticides including chlorpyrifos in biological samplesAccelerated solvent extraction GC and GC-MS -发布 -实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1） 提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、上海市公安局、司法鉴定科学研究院、黑龙江省公安厅。 本标准主要起草人：杜鸿雁、栾玉静、张蕾萍、董颖、王瑞花、于忠山、何毅、王芳琳、张玉荣、刘伟、沈敏、张吉林。GA/T 1 法庭科学 生物检材中毒死蜱等五种有机磷农药检验 快速溶剂萃取气相色谱和气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果的快速溶剂萃取气相色谱（GC）定量检验方法和气相色谱-质谱（GC-MS）定性定量检验方法。 本标准适用于法庭科学生物检材中毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷、乐果的快速溶剂萃取气相色谱（GC）法定量分析和快速溶剂萃取气相色谱气相色谱-质谱（GC-MS）法定性定量分析。其他可疑样品中毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷、乐果的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，用快速溶剂萃取仪（ASE）对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱-质谱法定性定量，气相色谱法定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和离子丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合GB/T 6682 中规定的三级水。在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 乙酸乙酯； b) 丙酮； c) 二氯甲烷； d) 甲醇； e) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液:根据毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果标准物质的纯度，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果标准物质溶液，置于冰箱中冷冻保存。有效期 12 个月。或采用市售标准溶液； GA/T 2 2） 0.1mg/mL 混合标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷和乐果标准物质溶液各 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 6 个月。实验中所用其它浓度的混合标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 颗粒状硅藻土； d) 中性三氧化二铝（100m200m） ：市售试剂在 350下加热 15h，冷却后备用。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）； b) 气相色谱仪：配有火焰光度检测器（FPD）； c) 快速溶剂萃取仪：配有 10mL 萃取池； d) 电子天平； e) 浓缩器； f) 离心机。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 快速溶剂萃取 移取血液等液体检材样品1.0mL3.0mL， 或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g3.0g于具盖离心管中，加2g硅藻土搅拌均匀，转移至底部装有2g中性三氧化二铝的萃取池中，按照7.1.2.1.1条件进行操作。萃取完毕后，转移萃取液至试管中，8000r/min离心5min，取有机相，置于浓缩器上40浓缩至干，残留物用甲醇100L溶解，作为检材样品提取液供仪器分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份，一份作为空白样品，一份添加毒死蜱、 甲基对硫磷、 对硫磷、 甲拌磷和乐果标准物质， 作为添加样品 （添加样品浓度为0.5g/mL） ，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 快速溶剂萃取条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际情况进行调整: GA/T 3 a) 系统压力：1500psi； b) 萃取池温度：100； c) 静态萃取时间：5min； d) 静态萃取次数：2 次； e) 溶剂冲洗体积：萃取池体积的 60%； f) 氮气吹扫时间：90s； g) 萃取溶剂体积比：乙酸乙酯/丙酮混合溶剂(体积比 1:1)或二氯甲烷/丙酮混合溶剂(体积比 1:1)。 7.1.2.1.2 气相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际情况进行调整： a) 色谱柱：DB-5MS 柱（30mm0.25mm0.25m）或等效色谱柱； 注：DB-5MS 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程：80保持 2min，以 30/min 速率升至 280，保持 15min； c) 进样口温度：280； d) 载气：高纯氦； e) 柱流速：1.0mL/min； f) 进样方式：分流进样，分流比：10:1； g) 离子源温度：200； h) 扫描方式：全扫描（SCAN），质量扫描范围 40amu550amu； i) 溶剂延迟：3min。 j) 质谱特征离子碎片峰见表 1。 表 1 检测目标物的质谱特征离子碎片峰 检测目标物名称 质谱特征离子碎片峰 甲拌磷 m/z 75*、m/z 260、m/z 121 乐果 m/z 87*、m/z 125、m/z 229 甲基对硫磷 m/z 109*、m/z 263、m/z 125 毒死蜱 m/z 351*、m/z 314、m/z 286 对硫磷 m/z 291*、m/z 263、m/z 139 注：*为定量离子。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL3.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g3.0g两份，按7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加毒死蜱、甲基对硫磷、对硫磷、甲拌磷、乐果标准物质作为添加样品（添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(10050)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 GA/T 4 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 快速溶剂萃取条件 按7.1.2.1.1规定的条件分析。 7.2.2.1.2 气相色谱-质谱条件 按7.1.2.1.2规定的条件分析。 7.2.2.1.3 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 检测器：火焰光度检测器（FPD）； b) 色谱柱：DB-5柱（30mm0.25mm0.25m）或等效色谱柱； 注： DB-5柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程：80保持1min，以8/min速率升至280，保持1min； d) 进样口温度：280； e) 检测器温度：300； f) 载气：高纯氮； g) 柱流速：1.0mL/min； h) 进样方式：分流进样，分流比：10:1。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按7.1.2.1的分析条件每个样品进样分析23次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于6次。 7.2.2.3 计算 7.2.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值（用定量离子的峰面积进行计算），按公式（1）计算含量： 添样添样添样VMAVMAW= . (1) 式中： W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（ g/g）或微克每毫升（g/mL） ； A样检材样品提取液中目标物峰面积平均值； M添添加样品中目标物添加量，单位为微克（g） ； V样检材样品的定容体积，单位为毫升（mL） ； A添添加样品提取液中目标物峰面积平均值； M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL） ； V添添加样品的定容体积，单位为毫升（mL） 。 7.2.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差： GA/T 5 %10021=XXXRD . (2) 式中： RD相对相差，用百分比（%）表示； X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值； X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。 8.1 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时， 检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致 （相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液一致， 特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比， 相对偏差不超过表 2 规定的范围， 空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。相关实验数据和谱图参见附录 A。 表 2 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 2050 1020 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰， 且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.1 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。 GA/T 6 附 录 A （资料性附录） 相关实验数据和图谱 A.1 五种有机磷农药血液中回收率和检出限 五种有机磷农药在血液中的回收率见表A.1，本方法检出限为100ng/ mL（g）。 表A.1 5 种有机磷农药在血液中的回收率 有机磷农药名称 操作方法 回收率 毒死蜱 1mL 血液添加 1 g，乙酸乙酯丙酮11 提取 1mL 血液添加 1 g，二氯甲烷丙酮11 提取 95.7% 88.7% 甲基对硫磷 1mL 血液添加 1 g，乙酸乙酯丙酮11 提取 1mL 血液添加 1 g，二氯甲烷丙酮11 提取 82.8% 79.7% 对硫磷 1mL 血液添加 1 g，乙酸乙酯丙酮11 提取 1mL 血液添加 1 g，二氯甲烷丙酮11 提取 79.4% 76.3% 甲拌磷 1mL 血液添加 1 g，乙酸乙酯丙酮11 提取 1mL 血液添加 1 g，二氯甲烷丙酮11 提取 87.3% 85.7% 乐果 1mL 血液添加 1 g，乙酸乙酯丙酮11 提取 1mL 血液添加 1 g，二氯甲烷丙酮11 提取 78.0% 74.2% A.2 五种有机磷农药总离子流图。 五种有机磷农药的总离子流图见图A.1。 图A.1 五种有机磷农药的总离子流图 A.3 五种有机磷农药的质谱图 五种有机磷农药质谱图见图A.2A.6。 50.050.075.075.0100.0100.0125.0125.0150.0150.0175.0175.0200.0200.0225.0225.0250.0250.0275.0275.0300.0300.0325.0325.0350.0350.0375.0375.0400.0400.0425.0425.0450.0450.00.000.000.250.250.500.500.750.751.001.00(x10,000)757547471211219797260260231231129129153153203203175175 图A.2 甲拌磷质谱图 GA/T 7 50.050.075.075.0100.0100.0125.0125.0150.0150.0175.0175.0200.0200.0225.0225.0250.0250.0275.0275.0300.0300.0325.0325.0350.0350.0375.0375.0400.0400.0425.0425.0450.0450.00.000.000.250.250.500.500.750.751.001.00(x10,000)878747476363125125104104229229157157 图A.3 乐果质谱图 50.050.075.075.0100.0100.0125.0125.0150.0150.0175.0175.0200.0200.0225.0225.0250.0250.0275.0275.0300.0300.0325.0325.0350.0350.0375.0375.0400.0400.0425.0425.0450.0450.00.000.000.250.250.500.500.750.751.001.00(x10,000)109109125125797947472632639393200200246246155155216216172172 图A.4 甲基对硫磷质谱图 50.050.075.075.0100.0100.0125.0125.0150.0150.0175.0175.0200.0200.0225.0225.0250.0250.0275.0275.0300.0300.0325.0325.0350.0350.0375.0375.0400.0400.0425.0425.00.000.000.250.250.500.500.750.751.001.00(x10,000)979719719731431425825865652082082862861251251091094747169169244244 图A.5 毒死蜱质谱图 50.050.075.075.0100.0100.0125.0125.0150.0150.0175.0175.0200.0200.0225.0225.0250.0250.0275.0275.0300.0300.0325.0325.0350.0350.0375.0375.0400.0400.0425.0425.0450.0450.00.000.000.250.250.500.500.750.751.001.00(x10,000)979710910913913929129165651551554545186186235235263263172172 图A.6 对硫磷质谱图 _