GA∕T 208-2019 法庭科学 生物检材中磷化氢检验 顶空气相色谱和顶空气相色谱-质谱法(公共安全).pdf

ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 代替GA/T 2081999 法庭科学 生物检材中磷化氢检验 顶空气相色谱和顶空气相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for phosphide in biological samplesHSGC and HSGC-MS -发布 -实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T 1 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准代替 GA/T 208-1999中毒案件检材中磷化物的定性及定量分析方法，与 GA/T 208-1999相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： 修改了标准名称（见封面，1999 年版的封面）； 修改了范围的有关内容（见第 1 章，1999 年版的第 1 章）； 修改了规范性引用文件的有关内容（见第 2 章，1999 年版的第 2 章）； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的原理 （见第 4 章， 1999 年版的第 4 章） ； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的试剂和材料（见第 5 章，1999 年版的第5 章）； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的仪器和设备（见第 6 章，1999 年版的第6 章）； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的操作方法（见第 7 章，1999 年版的第 7章）； 删除了第二篇 AgDDC 法测定磷化氢的有关内容（见 1999 年版的第 8 章第 11 章）； 删除了第三篇溴化汞试纸法测磷化氢的有关内容（见 1999 年版的第 12 章第 15 章）； 修改了附录 A 的有关内容（见附录 A，1999 年版的附录 A）； 修改了附录 B 的有关内容（见附录 A，1999 年版的附录 B）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1） 提出并归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心， 中国刑事警察学院， 陕西省公安厅， 司法鉴定科学研究院。 本标准主要起草人：侯小平、常靖、董颖、杜鸿雁、崔冠峰、朱昱、张爱东、刘伟。 GA/T 2 法庭科学 生物检材中磷化氢检验 顶空气相色谱和顶空气相色谱-质谱方法 1 范围 本标准规定了生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中磷化氢的顶空气相色谱（HSGC）定量检验、顶空气相色谱-质谱（HSGC-MS）定性定量检验方法。 本标准适用于生物检材中磷化氢的定性分析和定量分析。其他可疑样品中磷化氢的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，以平行操作的要求，采用顶空气相色谱质谱法定性定量，顶空气相色谱法定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 20%硫酸溶液：取 20mL 硫酸，缓慢溶于 80mL 水中； b) 锌粉（无砷）； c) 标准溶液： 1) 次亚磷酸钠溶液（相当于含磷化氢 1.0mg/mL）：精确称取次亚磷酸钠(NaH2PO2 H2O) 标准物质 155.90mg，用少量水溶解后，稀释至 50mL，配制成相当于含磷化氢 1.0mg/mL 的次亚磷酸钠标准溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 1 个月。 2) 次亚磷酸钠工作液（相当于含磷化氢 0.1mg/mL）：移取次亚磷酸钠溶液（相当于含磷化氢 1.0mg/mL），用水稀释至 10mL，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 7 天。实验中所用其他浓度的标准工作液均由相当于含磷化氢0.1mg/mL的次亚磷酸钠工作液用水稀释得到。 5.2 材料 GA/T 3 材料包括： a) 10mL 顶空瓶； b) 聚四氟乙烯胶垫； c) 顶空瓶金属盖； d) 封盖钳； e) 气密性进样针。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪：配有火焰光度-磷型检测器（FPD-P）或氮磷检测器(NPD)； b) 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）； c) 顶空自动进样器； d) 电子天平； e) 恒温电加热器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 样品制备 在顶空瓶中加入锌粉 40mg，使锌粉均匀分布在顶空瓶底部，加入血液等液体检材样品 1.0mL2.0mL 或铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g2.0g，依次加水 2.0mL，20%硫酸溶液 0.5mL，立即封盖，混匀。若采用顶空自动进样器，封盖后直接供仪器分析；若手动进样，则封盖后室温下静置 20min 后，将顶空瓶置于恒温电加热器中 3540下加热 10min，抽取液上气体 100L500L，供仪器分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于顶空瓶中，一份作为空白样品，一份添加相当于含磷化氢 1.0g 的次亚磷酸钠溶液，作为添加样品，与检材样品平行操作，供仪器分析。同时取水 1.0mL2.0mL，添加相当于含磷化氢 2.0 g 的次亚磷酸钠标准溶液，与检材样品平行操作，作为标准工作液，供仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 顶空自动进样器条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 加热箱温度：45； b) 定量环温度：95； c) 传输线温度：105； d) 气相循环时间：20min； e) 检材瓶加热平衡时间：10min； f) 检材瓶加压时间：0.2min； g) 定量环充满时间：0.2min； GA/T 4 h) 定量环平衡时间：0.2min； i) 进样时间：1.0min。 7.1.2.1.2 气相色谱质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱：HP-PLOT-Q（30m0.32mm0.25m）或等效色谱柱； 注： HP-PLOT-Q柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程：50保持5min，以50/min速率升温至200，保持2min； c) 进样口温度：200； d) 传输线温度：200； e) 载气：氦气； f) 进样方式：不分流进样或分流进样，分流比5:1； g) 电子轰击能量：70eV； h) 离子源温度：200； i) 倍增器电压：自动调谐值； j) 柱流量：1.0mL/min ； k) 质量扫描范围：19amu80amu ； l) 扫描方式：全扫描（Scan）。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品液上气体和标准溶液液上气体，按7.1.2.1的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品制备 准确移取血液等液体检材样品1.0mL2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g2.0g两份，按7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份， 其中两份添加次亚磷酸钠溶液 （添加样品中产生磷化氢的含量应为检材样品中产生磷化氢含量的（100 50）%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品和添加样品供仪器分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 顶空自动进样器条件 按 7.1.2.1.1 规定的条件分析。 7.2.2.1.2 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱：HP-PLOT-Q（30m0.32mm0.25m）或等效色谱柱； 注： HP-PLOT-Q柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程：50保持5min，以40/min速率升温至260，保持5min； c) 进样口温度：250； GA/T 5 d) 检测器温度：270； e) 载气：氮气； f) 进样方式：分流进样： g) 分流比：5:110:1； h) 柱流量：1mL/min2mL/min。 7.2.2.1.3 气相色谱-质谱条件 按 7.1.2.1.2 规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品液上气体和标准溶液液上气体，按7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析1次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品液上气体进样后的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量： 添样添样添样VMAVMAW= . (1) 式中： W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL） ； A样检材样品液上气体中目标物峰面积平均值； M添添加样品中标准物质（以磷化氢计）添加量，单位为微克（g） ； V样检材样品液上气体的进样体积，单位为毫升（mL） ； A添添加样品液上气体中目标物峰面积平均值； M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL） ； V添添加样品液上气体的进样体积，单位为毫升（mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差： %100XXXRD21= . (2) 式中： RD相对相差，用百分比（%）表示； X1、X2两份检材样品平行定量测定的含量数值； X两份检材样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 GA/T 6 在相同条件下进行样品测定时， 检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致 （相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 2050 1020 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴性样品评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。方法的检出限参见附录 A。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%， 定量数据可靠， 其含量按两份检材的平均值计算。 如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。 磷化氢检验的相关谱图和原理补充说明分别参见附录A和附录B。 GA/T 7 附 录 A （资料性附录） 磷化氢的相关谱图 A.1 磷化氢色谱图 磷化氢色谱图见图A.1。 图A.1 磷化氢色谱图(FPD-P检测器) A.2 磷化氢质谱图 磷化氢质谱图见图A.2。 图A.2 磷化氢质谱图 A.3 方法检出限 GC-MS分析磷化氢检出限为500ng/ mL（g）。 20.025.030.035.040.045.050.055.060.065.070.075.080.00.000.250.500.751.00(x10,000)3435302321HPHHGA/T 8 附 录 B （资料性附录） 磷化氢检验原理补充说明 磷化锌、磷化铝、含磷的矿砂及硅铁等磷化物遇酸、水或潮湿空气后可产生剧毒的磷化氢，故磷化物中毒实为磷化氢中毒。 磷化氢是气体， 经生物机体吸收引起中毒或中毒死亡的生物检材放置一定时间常因挥发而难以检出。磷化氢在生物体内代谢为亚磷酸，因此，在磷化氢检验不出的情况下可检验生物检材中的代谢物亚磷酸。亚磷酸在酸及锌粉反应生成的氢气作用下还原为磷化氢，其反应式如下： H3PO33Zn3H2SO4 3ZnSO43H2OPH3 实验室采用次亚磷酸钠作为标准物质， 次亚磷酸钠在锌与硫酸的作用下定量地还原为磷化氢， 其反应式如下： 2NaH2PO24Zn5H2SO4 4ZnSO4Na2SO44H2O2PH3 _