达格列净通过Rffl抑制STAT1_TGF-β1信号通路改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT和纤维化.pdf

达格列净通过Rffl抑制STAT1/TGF1信号通路改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT和纤维化徐洋，王敏，张恒璐，周莉，陆卫平*南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科，江苏淮安223300摘要 目的：探讨达格列净对糖尿病肾病肾小管上皮细胞的上皮细胞间充质转化和纤维化的影响及分子机制。方法：体外培养人肾小管上皮细胞HK2，分为对照组、高糖组、低剂量达格列净+高糖组和高剂量达格列净+高糖组。用Western blot与RTPCR分别检测E3泛素连接酶Rffl的表达水平。Western blot检测各组上皮细胞钙黏蛋白（epithelial cadherin，Ecadherin）、平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin，SMA）、纤连蛋白（Fibronectin）、转化生长因子1（transforming growth factor 1，TGF1）、信号转导与转录激活因子1（signal transducer and activator of transcription 1，STAT1）的表达水平。在HK2细胞中过表达Rffl后，Western blot检测Ecadherin、SMA、Fibronectin、TGF1、STAT1的表达水平。结果：高糖组中Rffl的表达水平显著低于对照组，加入达格列净后Rffl表达升高；与对照组相比，高糖组细胞中Ecadherin表达水平降低，Fibronectin、SMA表达水平升高，过表达Rffl后Ecadherin表达水平升高，Fibronectin、SMA表达水平降低；与高糖组相比，低剂量达格列净+高糖组和高剂量达格列净+高糖组中Ecadherin表达水平均升高，Fibronectin、SMA表达水平均降低，且呈一定的剂量依赖性；与对照组相比，高糖组细胞中STAT1、TGF1的表达水平升高，而在过表达Rffl或达格列净作用后则明显降低。结论：达格列净通过上调 Rffl的表达抑制STAT1/TGF1信号通路，改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞的上皮细胞间充质转化和纤维化。关键词 达格列净；糖尿病肾病；Rffl；TGF1；EMT；纤维化中图分类号 R587.2文献标志码 A文章编号 10074368（2023）09120107doi：10.7655/NYDXBNS20230903Dapagliflozin improves renal tubular epithelial EMT and fibrosis in diabetic nephropathyby inhibiting STAT1/TGF1 signaling pathway via RfflXU Yang，WANG Min，ZHANG Henglu，ZHOU Li，LU Weiping*Department of Endocrinology and Metabolism，the Affiliated Huai an No.1 People s Hospital of Nanjing MedicalUniversity，Huai an 223300，ChinaAbstract Objective：The current study aims to investigate the effect and molecular mechanism of dapagliflozin on epithelialmesenchymal transformation and fibrosis of renal tubular epithelial cells in diabetic kidney disease.Methods：Human renal tubularepithelial cells HK2 were cultured in vitro and divided into control group，high glucose group，low dose dapagliflozin+high glucosegroup and high dose dapagliflozin+high glucose group.The expression levels of Rffl were detected by Western blot and RTPCR，respectively.The expression levels of epithelial cadherin（Ecadherin），smooth muscle actin（SMA），Fibronectin，transforminggrowth factor 1（TGF1）and signal transducer and activator of transcription 1（STAT1）were detected by Western blot.After Rfflwas overexpressed in HK2 cells，the expression levels of Ecadherin，SMA，Fibronectin，TGF1 and STAT1 were detected byWestern blot.Results：The expression level of Rffl was significantly lower in the high glucose group than in the control group，and theexpression of Rffl was increased after adding dapagliflozin.Compared with the control group，the expression level of ECadherin in thehigh glucose group was decreased，while the expression level of Fibronectin and SMA was increased.After Rffl was overexpressed incells，the expression level of ECadherin was increased，while the expression levels of Fibronectin and SMA were decreased.Compared with high glucose group，the expression levels of ECadherin in lowdose dapagliflozin+high glucose group and highdose基金项目国家自然科学基金（81800644）；淮安市“533英才”工程科研项目资助计划（HAA201744）通信作者（Correspondingauthor），Email：基础研究南京医科大学学报（自然科学版）Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences）第43卷第9期2023年9月1201南京医科大学学报第43卷第9期2023年9月糖尿病肾病（diabetic kidney disease，DKD）是糖尿病最常见的微血管并发症之一，是终末期肾病（endstage renal disease，ESRD）发生的主要原因 1。DKD的病理特征是肾小球硬化、细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）合成增加、肾小管萎缩和肾小管间质纤维化 2。越来越多的研究表明肾小管上皮细胞的上皮细胞间充质转化（epithelialmesenchymal transition，EMT）及纤维化在 DKD 的进展中起重要作用，然而目前DKD的治疗仍以控制血糖、血压、调节血脂为主要治疗原则，在抗纤维化方面效果并不明显3。达格列净是一种钠葡萄糖协同转运蛋白2（sodiumglucose transporter 2，SGLT2）抑制剂，可以抑制葡萄糖的重吸收，促进尿糖排出，降低血糖。近年来研究发现，达格列净还具有肾脏保护作用4，然而其具体机制尚未明确。转化生长因子1（transforming growth factor 1，TGF1）是作用最强的致纤维化细胞因子，通过介导多种信号参与肾纤维化的发生发展5。信号转导与转录激活因子 1（signaltransducer and activator of transcription 1，STAT1）是STAT转录因子家族成员，与高糖诱导的氧化应激、TGF1的表达以及ECM蛋白型胶原蛋白和纤连蛋白（Fibronectin）的产生有关6。泛素蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径，可以严格调控TGF超家族信号转导。Rffl是一种能抑制内体再循环的E3泛素连接酶，可通过调控PRR5L降解促进mTORC2介导的PKC磷酸化从而延缓肺纤维化进展7。然而 Rffl 在肾纤维化中的作用还未见报道。设想达格列净的肾保护机制可能与上调Rffl的表达抑制STAT1/TGF1通路相关。本研究通过高糖培养肾小管上皮细胞模拟糖尿病肾病环境，探讨达格列净是否通过上调 Rffl的表达抑制STAT1/TGF1信号通路从而改善DKD肾小管上皮细胞的EMT和纤维化，为DKD的治疗提供理论基础。1材料和方法1.1材料人肾小管上皮细胞 HK2 细胞（上海中乔新舟公司）；胎牛血清、DMEM高糖培养基（含有4.5 g/LD葡萄糖）、DMEM低糖培养基（含有1 g/L D葡萄糖）、0.25%胰蛋白酶、链霉素、青霉素（Gibco 公司，美国）；达格列净（Med Chem Express公司，美国）；鼠抗上皮细胞钙黏蛋白（epithelial cadherin，Ecadherin）、纤连蛋白（Fibronectin）、STAT1、Tubulin单克隆抗体，兔抗平滑肌肌动蛋白（smooth muscleactin，SMA）、TGF1、Rffl多克隆抗体、山羊抗兔二抗、山羊抗鼠二抗（Proteintech公司，美国）；Trizol、质粒转染试剂LipofectamineTM2000脂质体（Invitrogen公司，美国），RTPCR试剂（南京诺唯赞公司），RTPCR引物（南京金斯瑞公司）；大肠杆菌DH5（北京擎科生物科技有限公司）；空载质粒PCDH和重组PCDHRffl 质粒（广州易锦生物技术有限公司）；PCR 仪（Eppendorf公司，德国）。1.2方法1.2.1细胞培养人肾小管上皮细胞HK2在37、5%CO2的培养箱中用含有10%胎牛血清、1%青霉素（100 U/mL）和链霉素（100 g/mL）的DMEM培养基培养。细胞生长融合至80%时，用0.25%的胰酶消化细胞，细胞收缩变圆后加入完全培养基终止消化，传代。传代后的细胞在37、5%CO2的培养箱中培养24 h后换液1次，以去除死亡的细胞，以后每2 d换液1次。取对数生长期的细胞用于实验研究。1.2.2分组收集对数期HK2细胞，使用含4.5 g/L葡萄糖的DMEM高糖培养基培养48 h，记作高糖组（HG组）；使用含有 1 g/L 葡萄糖的 DMEM 低糖培养基培养48 h，记作对照组（NC组）。收集对数期HK2细胞接种于6孔板，分为低剂量达格列净+高糖组（DapLdapagliflozin+high glucose group were increased，but the expression levels of Fibronectin and SMA were decreased in a dosedependent manner.Compared with the control group，the expression levels of STAT1 and TGF1 were increased in the high glucosegroup，but significantly decreased after overexpression of Rffl or addition of dapagliflozin.Conclusion：Dapagliflozin inhibits STAT1/TGF1 signaling pathway by upregulating Rffl expression，and improves epithelialmesenchymal transformation and fibrosis of renaltubular epithelial cells in diabetic kidney disease.Key words dapagliflozin；diabetic kidney disease；Rffl；TGF1；EMT；fibrosisJ Nanjing Med Univ，2023，43（09）：120112071202NC组 HG组Rffl mRNA相对表达量1.51.00.50*NC组 HG组Rffl蛋白相对表达量1.00.80.60.40.20*RfflTubulin50 kDa37 kDaNC组HG组ABA：qRTPCR检测Rffl mRNA的相对表达量；B：Western blot检测Rffl蛋白的相对表达量；与NC组比较，*P 0.05，n=3。图1不同浓度葡萄糖培养的HK2中Rffl的表达水平Figure 1Rffl expression level in HK2 cultured at different glucose concentrations组，使用含有5 mol/L达格列净的DMEM高糖培养基培养48 h），高剂量达格列净+高糖组（DapH组，使用含有10 mol/L达格列净的DMEM高糖培养基培养48 h），PCDH 组（PCDH 转至 HK2 细胞，使用DMEM高糖培养基培养48 h），PCDHRffl组（PCDHRffl转至HK2细胞，DMEM高糖培养基培养48 h）。1.2.3Western blot检测取按照上述分组培养48 h的各组细胞，加入适量的RIPA细胞裂解液提取细胞中的蛋白，BCA试剂盒对蛋白进行定量，蛋白样品与上样缓冲液按照1 5的比例充分混匀，100 煮沸变性10 min，每个样品取50 g进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分离，90 V低温电转移2 h，5%的脱脂奶粉37 封闭1 h，分别加入Ecadherin、SMA、Fibronectin、Rffl、TGF1、Tubulin抗体，所有抗体均按照说明书稀释，4 过夜，TBST洗涤，分别加入1 5 000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG、羊抗兔IgG，室温孵育1 h，暗室内曝光显影，应用Image J软件分析各条带灰度值。1.2.4RTPCR检测采用TRIzol法提取细胞中总RNA，参照反转录试剂盒合成cDNA。以cDNA为模板进行qRTPCR反应，PCR循环条件：95 30 s 预变性；95 10 s，60 30 s共40个循环；95 15 s，60 60 s，95 15 s 采集熔解曲线。以肌动蛋白（actin）为内参，采用2-Ct法计算Rffl mRNA的相对表达量。1.3统计学方法所有实验数据采用SPSS 21.0软件进行分析，符合正态分布的计量资料用均数标准差（x s）表示，两组比较采用t检验，多组间差异比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSDt检验，P 0.05为差异有统计学意义。2结果2.1Rffl在高糖培养的HK2细胞中低表达qRTPCR检测了低糖和高糖培养的HK2细胞Rffl的表达水平，结果显示HG组细胞中Rffl mRNA水平较NC组明显降低。Western blot检测结果证明HG组细胞中Rffl蛋白表达较NC组明显下调，差异有统计学意义（P 0.05，图1）。2.2在高糖培养的HK2细胞中过表达RfflqRTPCR结果显示，转染重组质粒PCDHRffl后，HK2中Rffl的表达水平与PCDH组相比明显上升。Western blot结果与qPCR结果一致，表明成功构建过表达Rffl的HK2细胞（P 0.05，图2）。2.3过表达Rffl抑制高糖环境中HK2细胞的EMT和纤维化与NC组相比，HG组细胞中Ecadherin蛋白表达水平降低，Fibronectin、SMA蛋白表达水平升高（P 0.05，n=3）；与PCDH组相比，PCDHRffl组细胞中 Ecadherin 蛋白表达水平升高，Fibronectin、SMA蛋白表达水平降低（P 0.05，n=3，图3），提示过表达Rffl抑制高糖环境中HK2的EMT和纤维化。2.4达格列净抑制高糖处理的HK2细胞的EMT和纤维化与NC组相比，HG组细胞中Ecadherin蛋白表达水平降低，Fibronectin、SMA蛋白表达水平升高（P 0.05，n=3）；与HG组相比，DapL组及DapH组细胞中Ecadherin表达水平均升高，Fibronectin、SMA表达均降低（P 0.05，n=3）；与DapL组相比，PCDH组 PCDHRffl组Rffl mRNA相对表达量200.0150.0100.0*2.01.51.00.50ABRfflTubulin50 kDa37 kDaPCDH组 PCDHRffl组PCDH组 PCDHRffl组Rffl蛋白相对表达量1.51.00.50*A：qRTPCR检测Rffl mRNA的相对表达量；B：Western blot检测Rffl蛋白的相对表达量；与PCDH组比较，*P 0.05，n=3。图2重组质粒PCDHRffl 转染后Rffl 在HK2中的表达水平Figure 2Expression level of Rffl in HK2 after transfectedwith recombinant plasmid PCDHRffl第43卷第9期2023年9月徐洋，王敏，张恒璐，等.达格列净通过Rffl抑制STAT1/TGF1信号通路改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT和纤维化 J.南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（9）：1201-12071203南京医科大学学报第43卷第9期2023年9月#*PCDH组PCDHRffl组HG组NC组0.60.40.20Ecadherin蛋白相对表达量EcadherinFibronectinSMATubulin50 kDa42 kDa263 kDa97 kDaPCDH组PCDHRffl组HG组NC组#*1.51.00.50Fibronectin蛋白相对表达量ABCDA：Western blot检测各组Ecadherin、Fibronectin、SMA蛋白表达；B：各组Ecadherin蛋白表达的定量分析；C：各组Fibronectin蛋白表达的定量分析；D：各组SMA蛋白表达的定量分析。与NC组比较，*P 0.05；与PCDH组比较，#P 0.05，n=3。图3Western blot检测过表达Rffl对HK2中Ecadherin、Fibronectin、SMA表达的影响Figure 3The effects of Rffl overexpression on the expression of Ecadherin，Fibronectin and SMA in HK2 detected byWestern blotPCDH组PCDHRffl组HG组NC组#*1.00.80.60.40.20SMA蛋白相对表达量PCDH组PCDHRffl组HG组NC组DapH组细胞中Ecadherin表达水平升高，Fibronectin、SMA表达均降低（P 0.05，n=3，图4），提示达格列净抑制高糖处理的HK2的EMT和纤维化，且达格列净的浓度越高，抑制作用越强。2.5达格列净促进高糖培养的HK2细胞中Rffl的表达与NC组相比，HG组细胞中Rffl蛋白表达水平降低（P 0.05，n=3）；DapL组及DapH组细胞中Rffl表达EcadherinFibronectinSMATubulin50 kDa42 kDa263 kDa97 kDaDapL组DapH组HG组NC组ABCD#*2.01.51.00.50SMA蛋白相对表达量#DapL组DapH组HG组NC组A：Western blot检测各组Ecadherin、Fibronectin、SMA蛋白表达；B：各组Ecadherin蛋白表达的定量分析；C：各组Fibronectin蛋白表达的定量分析；D：各组SMA蛋白表达的定量分析。与NC组比较，*P 0.05；与HG组比较，#P 0.05；与DapL组比较，P 0.05，n=3。图4Western blot检测达格列净对HK2中Ecadherin、Fibronectin、SMA表达的影响Figure 4The effects of dapagliflozin on the expression of Ecadherin，Fibronectin and SMA in HK2 detected byWestern blot#*1.51.00.50Ecadherin蛋白相对表达量#DapL组DapH组HG组NC组#*1.51.00.50Fibronectin蛋白相对表达量#DapL组DapH组HG组NC组均高于HG组（P 0.05，n=3）；与DapL组相比，DapH组细胞中Rffl表达水平升高（P 0.05，n=3，图5），提示达格列净促进高糖培养的HK2中Rffl的表达，且达格列净的浓度越高，促Rffl表达的作用越明显。2.6过表达 Rffl 抑制高糖培养的 HK2 细胞中STAT1、TGF1的表达相对于NC组，HG组细胞中STAT1、TGF1的表达水平升高（P 0.05，n=3）；与 PCDH 组相比，PCDHRffl组细胞中STAT1、TGF1蛋白表达水平均降低（P 0.05，n=3，图6），提示过表达Rffl抑制高糖培养的HK2中STAT1、TGF1的表达。2.7达格列净抑制高糖培养的 HK2 细 胞 中STAT1、TGF1的表达与NC组相比，HG组细胞中STAT1、TGF1的表达水平升高（P 0.05，n=3）；相比HG组，DapL组及DapH组细胞中STAT1、TGF1表达均降低（P 0.05，n=3）；与 DapL 组相比，DapH 组细胞中STAT1、TGF1表达均降低（P 0.05，n=3，图7），提示达格列净抑制高糖培养的HK2中STAT1、TGF1的表达，达格列净的浓度越高，抑制作用越显著。3讨论糖尿病是世界范围内日益严重的公共卫生疾病，在全球普通人群中的患病率约为10%。根据国际糖尿病联合会的数据，到2035年，全球糖尿病患者的数量将从2013年的3.82亿增加到5.92亿，其中大约40%的糖尿病患者会发展为DKD8。DKD是糖尿病最严重的微血管并发症之一，是导致ESRD1204的主要因素，显著增加了糖尿病患者的病死率。肾小管上皮细胞 EMT 及肾纤维化是 DKD 进展到ESRD的主要病理基础和共同途径，然而目前针对DKD的治疗方式在抑制EMT、抗纤维化方面效果有限。如何有效抑制肾小管上皮细胞EMT及肾纤维化，从而阻止和延缓DKD向终末期肾病发展，是目前亟待解决的难题。肾小管上皮细胞EMT在肾脏纤维化中发挥重要作用9-10，而抑制EMT可以在一定程度上延缓肾纤维化进展。在EMT过程中，上皮细胞的迁移、侵袭、抗凋亡能力增强，促进细胞外基质沉积，加剧肾间质细胞纤维化，严重危害肾脏功能11。Ecadherin作为细胞黏附连接的中心成分，是维持上皮细胞完整性所必需的。SMA是肌纤维成熟细胞表达的一个特征蛋白，在肾组织中可直接反映纤维化程度12。Fibronectin是肾纤维化中一种主要的ECM成分，其合成增加会促进ECM积聚，加快肾间质纤维化的进展13。肾EMT常以Ecadherin表达量降低，SMA、Fibronectin 等间质标志物表达量升高等为主要特征14-16。泛素化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰，它是泛素分子在一系列酶的作用下，与靶蛋白质共价结合的修饰过程。E3 泛素连接酶MARCH7能够调控Ecadherin和catenin的表达。在卵巢癌Tubulin50 kDaPCDH组PCDHRffl组HG组NC组TGF1STAT144 kDa83 kDa#*0.80.60.40.20STAT1蛋白相对表达量ABCPCDH组PCDHRffl组HG组NC组#*2.01.51.00.50TGF1蛋白相对表达量PCDH组PCDHRffl组HG组NC组A：Western blot检测各组STAT1、TGF1蛋白表达；B：各组STAT1蛋白表达的定量分析；C：各组TGF1蛋白表达的定量分析；与NC组比较，*P 0.05；与PCDH组比较，#P 0.05，n=3。图6Western blot检测过表达Rffl对HK2中STAT1、TGF1表达的影响Figure 6The effects of Rffl overexpression on the expression of STAT1 and TGF1 in HK2 detected by Western blotTubulin50 kDaDapL组DapH组HG组NC组TGF1STAT144 kDa83 kDa#*2.01.51.00.50STAT1蛋白相对表达量#ABCDapL组DapH组HG组NC组#*2.01.51.00.50TGF1蛋白相对表达量#DapL组DapH组HG组NC组A：Western blot检测各组STAT1、TGF1蛋白表达；B：各组STAT1蛋白表达的定量分析；C：各组TGF1蛋白表达的定量分析；与NC组比较，*P 0.05；与HG组比较，#P 0.05；与DapL组比较，P 0.05，n=3。图7Western blot检测达格列净对HK2中STAT1、TGF1表达的影响Figure 7The effects of dapagliflozin on STAT1 and TGF1 expression in HK2 detected by Western blot#*NC组HG组 DapL组 DapH组1.00.80.60.40.20Rffl蛋白相对表达量TubulinRffl50 kDa37 kDaABA：Western blot检测各组Rffl蛋白表达；B：各组Rffl蛋白表达的定量分析；与NC组比较，*P 0.05；与HG组比较，#P 0.05；与DapL组比较，P 0.05，n=3。图5Western blot检测达格列净对HK2中Rffl表达的影响Figure 5The effect of dapagliflozin on Rffl expression inHK2 detected by Western blotNC组HG组 DapL组 DapH组第43卷第9期2023年9月徐洋，王敏，张恒璐，等.达格列净通过Rffl抑制STAT1/TGF1信号通路改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT和纤维化 J.南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（9）：1201-12071205南京医科大学学报第43卷第9期2023年9月中，USP7通过逆转MARCH7自身的泛素化，并稳定MARCH7，从而介导 Ecadherin 和catenin 的表达17。TGF可以诱导EMT发生，在乳腺上皮细胞中，野生型p53可以调控TGF信号产生的EMT18，而E3泛素连接酶Rffl可通过使MDM2变得稳定来促进p53的降解19。Rffl还可通过PRR5L降解促进mTORC2介导的PKC磷酸化从而影响肺纤维化进展7。本研究结果显示，高糖处理后肾小管上皮细胞中Ecadherin表达水平降低，Fibronectin、SMA表达水平升高，而Rffl过表达可逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT，提示Rffl高表达具有一定的抑制高糖处理的肾小管上皮细胞HK2发生纤维化的作用。SGLT2抑制剂是一种不依赖胰岛素水平的新型降糖药，除降糖作用外，它还具备降低血压、改善肾小球高滤过、减少蛋白尿、改善氧化应激、抑制炎症等肾脏保护作用 20-21。对18周的单侧肾切除db/db小鼠进行4周达格列净治疗，肾脏TGF1、纤溶酶原激活物抑制物1、型胶原以及Fibronectin的表达均显著降低22。研究表明，达格列净可以通过抑制高糖毒性，进而降低OGlcNAc糖基化修饰和减少肾小管缺氧 23 或抑制STAT1/TGF1通路激活 24，从而改善肾小管间质纤维化。本研究结果显示，与高糖组相比，低剂量达格列净+高糖组及高剂量达格列净+高糖组中Ecadherin表达水平均升高，Fibronectin、SMA表达水平均降低，并呈现出一定的剂量依赖性，提示达格列净具有抑制高糖处理的肾小管上皮细胞HK2发生纤维化的作用。TGF1在EMT和组织纤维化中起重要调节作用，可以正向调控EMT，是肾间质纤维化及肾小球硬化的重要细胞因子25。高血糖会诱导激活DKD中STAT1和TGF1，并参与肾小管间质纤维化的过程24。抑制STAT1可以抑制肝纤维化的进展26，此外，STAT信号通路在肾纤维化中起着至关重要的作用，激活STAT可诱导EMT并导致肾损害缓解27。本研究表明，高糖处理后肾小管上皮细胞中STAT1、TGF1的表达水平升高，过表达Rffl后STAT1、TGF1表达水平降低，这表明在肾小管上皮细胞HK2中E3泛素连接酶Rffl对STAT1/TGF1通路具有一定的抑制作用。此外，本研究发现达格列净同样可逆转STAT1、TGF1的表达水平，并呈现出一定的剂量依赖性，这表明达格列净改善EMT的作用可能与抑制高血糖诱导的STAT1/TGF1通路相关。本研究发现，达格列净可缓解高血糖条件下肾小管上皮细胞EMT和纤维化，并抑制了促纤维化因子STAT1和TGF1的表达。本研究初步探索达格列净对DKD肾小管上皮细胞EMT和纤维化的改善作用及其可能机制，但详细作用机制有待进一步深入探究。参考文献1 ZOJA C，ZANCHI C，BENIGNI A.Key pathways in renaldisease progression of experimental diabetes J.NephrolDial Transplant，2015，30：54-592 JIANG Z H，TANG Y Z，SONG H N，et al.miRNA342suppresses renal interstitial fibrosis in diabetic nephropathy by targeting SOX6 J.Int J Mol Med，2020，45（1）：45-523 ZANCHI C，MACCONI D，TRIONFINI P，et al.MicroRNA184 is a downstream effector of 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