NY∕T 3140-2017 饲料中苯乙醇胺A的测定 高效液相色谱法(农业).pdf

ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准饲料中苯乙醇肢A的测定高效液相色谱法NY/T 3140一2017Determination of phenylethanolamine A in feeds一High performance Iiquid chromatography 2017-12-22发布2018 -06 -01实施、餐费中华人民共和国农业部发布目。吕本标准按照GBjT1. 1-2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全同饲料工业标准化技术委员会(SACjTC76)归口。本标准起草单位:农业部饲料质量监督检验测试中心(成都)。本标准主要起草人:张静、赵立军、程传民、陈红、高庆军、王宇萍、李云。NY/T 3140一2017I NY/T 3140-2017 饲料中苯乙醇肢A的测定高效液相色谱法范围本标准规定了饲料中苯乙醇胶A的高效液相色谱测定法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充担起盗却剂预混合饲料中苯乙醇胶A的测定。本标准方法的检出限为1.0 mg/ 2 规范性引用文件下列文件对于本文句件。凡是不注日期的寻GB/ T 6682 GB/ T 14699. GB/ T 2019 农业部1483 下列术语3.1 苯乙醇肢化学名称量为344.17，phenyl) ethano 4 原理4 试样中的苯乙醇胶A经甲法定量。液相色谱仪进行测定，外标5 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中一级水的规定。5. 1 乙睛:色谱纯。5. 2 甲醇。5. 3 甲酸:优级纯。5. 4 苯乙醇胶A对照品:纯度二?:95%。5.5 0.1%甲酸溶液:取甲酸1.0 mL加水定容至1000mL，摇匀即得。l NY/T 3140-2017 5.6 甲酸甲醇溶液:取甲酸0.1mL，加人甲醇定容至100mL，摇匀即得。5. 7 稀释液:取0.1%甲酸溶液(5.6)80mL，力1乙脯至100mL，摇匀即得。5. 8 氨化甲醇榕液:取氨水5mL，加入甲醇至100mL，摇匀即得。5. 9 标准储备榕液:100g/mL，准确称取苯乙醇胶A50 mg(精确到0.1mg)，用甲醇配制成100g/mL的标准储备溶液，一180C避光保存备用，有效期为6个月。5.10 标准工作溶液:用稀释液(5.7)稀释标准储备溶液(5.9)，配制成浓度范罔为1.00g/mL、2.00 g/mL、5.00g/mL、10.0g/mL、25.0g/mL、50.0g/mL的标准工作溶液，40C避光保存，有效期1个月。5.门混合型阳离子同相萃取柱:3mL,60 mg;或相当的分析柱。5. 12 微孔滤膜:0.45m，有机相。6 仪器和设备6. 1 高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器。6. 2 天平:感量1mg。6. 3 分析天平:感茧0.1mg。6.4 离心机:转速为5000r/min及以上。6.5 超声水浴。6.6 涡旋混合器。6. 7 罔相萃取装置。6.8 氮吹装置。7 试样制备按照GB/T14699. 1的规定，抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定制备样品，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光常温保存，备用。8 测定步骤8. 1 提取称取饲料试样2g(精确到O.001剖，置于50mL离心管中，准确加入甲酸甲醇、溶液(5.6)20.0mL, 涡旋混合30s，超声提取20min，期间摇动2次;取出后，于离心机上5000r/min离心5min，取上清液，备用。8.2 净化同相萃取柱(5.11)分别用甲醇3mL,Jj( 3 mL活化，准确移取上清液(8.1)5.0mL过柱，分别用水3mL、甲醇3mL淋洗，近干后用氨化甲醇榕液(5.8)3mL洗脱。收集洗脱液，在氮吹装置上500C下用氮气吹干。准确加人稀释液(5.7)1.0 mL榕解，过0.45m微孔滤膜，供高效液相色谱仪测定。8. 3 测定8. 3. 1 高效液相色谱条件2 色谱柱:C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5m;或性能相当的分析柱;柱温:300C;流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腊，梯度洗脱，梯度见表1; 流速:1.0 mL/ min; 进样量:20L;NY/ T 3140-2017 检测波长:276nm。表1流动相梯度洗脱条件时间，mln流动相A.%流动相13.% o. 00 80 20 0.00 60 40 10. 10 80 20 8.00 80 20 8.3.2 定性测定在仪器最佳工作条件下，样品中待测物的保留时间与苯乙醇胶A标准工作榕液中对应的保留时间相对偏差在+2.5%之内，则可判定样品中存在对应的待测物。如需进一步确认，可按农业部1486号公告一1-2010的规定检测。8.3.3 定量测定按照上述液相色谱条件测定样品榕液和标准工作榕液，以色谱峰面积进行单点或多点校正定茧，样品溶液中待测物的响应值应在仪器测定的线性范罔内。苯乙醇胶A标准工作榕液色谱罔参见附录A。9 结果计算试样中苯乙醇胶A的含量X，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg)，单点校正按式(1)计算。x=fi X C, X V X?!: . . . . (1) F,X m 乱中:X 试样中苯乙醇胶A的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); Fi 试样溶液峰面积值;c, 标准工作榕液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); F，一一标准工作榕液峰面积值;m 称取试样的质量，单位为克(g);V一-J二机前定容体积，单位为毫升(mL);n一一稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。多点校正按式(2)计算。x=: x X V X?!: . . . . . . . (2) m 式中:Cx 标准曲线上查得的试样中苯乙醇胶A的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。10 重复性在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的20%。3 NY/T 3140-2017 附录A(资料性附录)苯乙醇肢A标准工作溶液的高效液相色谱图苯乙醇胶A标准工作溶液色谱罔见罔A.l。4 mAU 40 30 20 AU l 。n a hFON|O寸gHFZ中华人民共和国农业行业标准饲料中苯乙醇肢A的测定高效液相色谱法Y/ T 3140- 2017 争导中同农业出版社出版(北京市朝阳区发子店街18号楼)(邮政编码100125网址.ccap. COn1. cn) 北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行轩地新华书店经销争导* 关印张O.75 字数15千字2018年5月北京第1次印刷* 开本880rnrnX1230rnrn 1/16 2018年5月第1版书号16109 4346 定价18.00元* . 版权专有侵权必究举报电话[phone]