培养基1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成PPT幻灯片课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,课题,1,微生物的实验室培养,专题,2,微生物的培养与应用,1,2,思考：,1,、什么叫培养基？,2,、培养基的基本成分有哪些？由什么物质提供？,3,、培养基种类有哪些？,1,、培养基的概念,人们按照微生物对,营养物质,的不同需求，配置出供其,生长繁殖,的营养基质称,培养基,。,2,、培养基的基本成分,一般的培养基均需要,碳源,、,氮源,、,无机盐,和,水,等。,碳源：,CO,2,、碳酸盐等无机物，糖类（主要）、蛋白质、脂肪酸等有机物,氮源,：,氮气、氨气、氨盐、硝酸盐等无机物，蛋白胨、牛肉膏等有机物,一、基础知识（一）培养基,3,1000mL,牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成（天然培养基）,5g,10g,5g,定容至,1000mL,培养基组分,提供的主要营养,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,H,2,O,碳源、磷酸盐和维生素,氮源和维生素,无机盐,氢元素、氧元素,一、基础知识（一）培养基,4,思考：,培养基内所需的其他条件有哪些？,3,、培养基内所需的其他条件,（,1,）,pH,值,如：培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性,（,2,）特殊营养物质,生长因子,（即细菌生长必需，而自身不能合成的化,合物，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶）,如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素,（,3,）氧气的含量,如：培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件,一、基础知识（一）培养基,5,微生物所需的有机营养物质及其功能：,优,P16,碳源,氮源,生长因子,概念,凡能为微生物提供所需碳元素的营养物质,凡能为微生物提供所需氮元素的营养物质,微生物生长不可缺少的微量有机物,来源,无机碳源：,CO,2,、,NaHCO,3,等；,有机碳源：,糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等,无机氮源：,N,2,、氨、铵盐、硝酸盐等；,有机氮源：,尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等,酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液,最常用来源,糖类，尤其是葡萄糖,铵盐、硝酸盐,维生素、氨基酸、碱基,作用,主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物；异养微生物的主要能源物质,主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物,酶和核酸的组成成分,一、基础知识（一）培养基,6,液体培养基：,4,、培养基的种类,（,1,）按,物理状态,分,固体培养基：,（,2,）按,成分,分,合成培养基,天然培养基,半天然培养基,（,3,）按,用途,分,选择培养基,鉴别培养基,基础培养基,在液体培养基的基础上再添加琼脂。,半固体培养基：,增菌,纯化，增菌,动力检测，保种,一、基础知识（一）培养基,7,4,、培养基的种类,（,1,）按,物理状态,分：,液体培养基、固体培养基、半固体培养基,（原因：培养基中,凝固剂的有无及含量的多少）,种类,特点,用途,液体,培养基,液体培养基中,未加任何凝固剂,。在用液体培养基培养微生物时，通过振荡或搅拌可以增加培养基的通气量，同时使营养物质分布均匀。,常用于大规模工业生产,，以及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究。,固体,培养基,在液体培养基中,加入一定量凝固剂,，使其成为固体状态即为固体培养基。在实验室中，固体培养基一般是加入培养皿或试管中，制成培养微生物的,平板或斜面,。,固体培养基为微生物提供一个营养表面，单个微生物细胞在这个营养表面进行生长繁殖，可以形成单个菌落。固体培养基,常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏等。,半固体,培养基,培养基中,凝固剂的含量比固体培养基少,，培养基中琼脂含量一般为,0.2,0.7,。,常用来观察微生物的运动特征、分类鉴定等,一、基础知识（一）培养基,8,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,9,固体培养基：菌落,10,半固体培养基：,无动力 有动力,(,弥散,),(,是否运动,),11,4,、培养基的种类,（,2,）按,成分,来分：,天然培养基,和,合成培养基,。,合成培养基,天然培养基,定义,根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。,这类培养基含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物,成分,合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。,天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。,优点,标准化生产，组分和含量相对固定；成本低。,营养成分丰富，培养效果好。,缺点,缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。,来源受限；成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析；易发生支原体污染。,一、基础知识（一）培养基,12,几种选择培养基举例：,加入青霉素的培养基：,不加氮源的无氮培养基：,不加含碳有机物的无碳培养基：,唯一碳源为纤维素的培养基：,加入,氨苄青霉素,的培养基：,加入,氨基嘌呤,的培养基,：,分离酵母菌、霉菌等真菌,分离固氮菌,分离自养型微生物,分解纤维素的细菌,分离导入了目的基因的受体细胞,分离杂交瘤细胞,4,、培养基的种类,（,3,）按,用途,来分：,选择培养基,：加入某种化学物质，从众多微生物,中分离出所需微生物,鉴别培养基,：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物,一、基础知识（一）培养基,13,一、基础知识（二）无菌技术,思考：,获得纯净培养物的关键是什么？,防止杂菌污染的操作技术叫什么？,1,、获得纯净培养物的关键：,防止外来杂菌的入侵,2,、无菌技术的概念：,无菌技术,泛指在培养微生物的操作中，,所有防止杂菌污染的方法技术,。,3,、,无菌技术包括的四个方面：,P15,P15,旁栏思考：,无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,14,一、基础知识（二）无菌技术,超净工作台,15,消毒：,4,、,消毒和灭菌,（,1,）概念,灭菌：,使用,较为温和,的物理或化学方法仅杀死物体表,面或内部,部分,微生物（不包括,芽孢,和,孢子,）。,将,培养器皿,、,接种用具,和,培养基,进行灭菌；,使用,强烈,的理化因素杀死物体内外的,所有,的微生物，包括,芽孢,和,孢子,）。,对实验操作的,空间,、操作者的,衣着,和,手,进行清洁和消毒；,接种的过程要在,酒精灯火焰,附近进行。,避免,已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触。,一、基础知识（二）无菌技术,16,17,类型,适用范围,操作方法,消,毒,方,法,煮沸消毒法,日常生活,100,煮沸,5,6 min,巴氏消毒法,不耐高温的液体，,如牛奶的消毒,70,75,煮,30 min,或,80,煮,15 min,化学药剂消毒,生物活体、水源等,擦拭等，如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源,紫外线消毒,房间、仪器设备,紫外线照射,30 min,灭,菌,方法,灼烧灭菌,接种工具、接种时用的试管口或瓶口等,直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,干热灭菌,耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等,物品放入干热灭菌箱，,160,170,加热,1,2 h,高压蒸汽灭菌,培养基、培养皿等，生产和实验室常用,高压蒸汽灭菌锅内，,100 kPa,，温度,121,，,15,30 min,一、基础知识（二）无菌技术,（,2,）几种消毒和灭菌方法及其适用范围：,18,理化因素的作用强度,消灭微生物的范围,芽孢和孢子能否被消灭,消毒,较为温和,物体表面或内部一部分微生物,不能,灭菌,强烈,物体内外所有的微生物,能,一、基础知识（二）无菌技术,4,、消毒和灭菌,（,3,）消毒与灭菌的比较：,优,P16,19,（,1,）计算：,物质,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,水,重量,5g,10g,5g,20g,定溶至,1000mL,（,2,）称量,准确称取各种成分。注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。,二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,思考：,（,1,）用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培,养，可分为哪两个阶段进行？,制备培养基、纯化大肠杆菌,（,2,）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤有哪些？,1,、步骤：计算,称量,溶化,灭菌,倒平板,20,（,3,）溶化：,先将,牛肉膏连同称量纸,一起放入烧杯，加少量水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待完全溶解后，加自来水定溶至,100mL,。,（,4,）灭菌：,将配制好的培养基放到,锥形瓶,中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），放入,高压灭菌锅,，,。,培养皿（,5,8,套，用几层报纸包好）放入,干热灭菌箱,内，,。,（,5,）倒平板：,待培养基冷却到,50,左右,时，在,酒精灯火焰,附近倒平板。,二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1,、步骤：计算,称量,溶化,灭菌,倒平板,21,二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1,、步骤：计算,称量,溶化,灭菌,倒平板,22,23,1,、培养基灭菌后要冷却到,50,时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？,用手触摸锥形瓶，温度下降到,刚刚不烫手,时即可开始倒平板。,2,、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3,、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,4,、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,2,、注意的问题：,课本,P17,：倒平板操作的讨论题,24,常见的有：,平板划线法,和,稀释涂布平板法,。,（,1,）平板划线法,通过,接种环,在琼脂固体培养基表面,连续划线,的操作，将聚集的菌种,逐步稀释分散,到培养基的表面。,在数次划线后可以分离到由,一个细胞,繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称,菌落,。,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法,1,、微生物接种方法：,25,26,平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法,27,平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法,28,29,课本,P18,平板划线法的讨论题,1,、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,第一步灼烧接种环是为了,避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,；,每次划线前灼烧接种环是为了,杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种,，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,划线结束后仍然要灼烧接种环，能,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者,。,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法,30,课本,P18,平板划线法的讨论题,2,、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,3,、在做第二次以及其后的划线操作时，,为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，,每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着,划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌,繁殖而来的菌落。,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法,31,（,2,）稀释涂布平板法,概念：,将菌液,进行一系列的梯度,稀释，然后将,不同稀释度的菌液,分别,涂布,到琼脂固体培养基的表面进行培养。,在,稀释度足够高,的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成,单个细胞,，从而能在培养基表面形成,单个的菌落,。,步骤：,操作过程分,两个步骤,，即,系列稀释操作,和,涂布平板操作,1,、微生物接种方法：,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌,稀释涂布平板法,32,步骤,1,：系列稀释操作,10,1,10,2,10,3,10,4,10,5,10,6,（,1,）将分别盛有,9mL,水的试管灭菌并编号。,（,2,）用移液管吸取,1mL,培养的菌液，注入第二支试管中，,轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。,（,3,）从,10,1,倍稀释的试管中吸取,1mL,稀释液，注入第三支,试管中，重复步骤,2,，直至到第六支试管。,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌,稀释涂布平板法,33,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌,稀释涂布平板法,步骤,2,：涂布平板操作,应从操作的各个细节保证,“,无菌,”,。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,34,稀释涂布平板法获取的菌落,二、实验操作（二）纯化大肠杆菌,稀释涂布平板法,注意：将,接种后,和,未接种,（作为对照组）的培养基均放到,37,的恒温箱中，培养,12,24h,后进行观察并记录结果。,35,1,、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？,未接种的培养基在恒温箱中保温,1,2 d,后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,2,、在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？,如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。,3,、培养,12h,和,24h,后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？,培养,12 h,与,24 h,后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。,4,、如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。,无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。,三、结果分析与评价,36,（一）试管低温临时保藏,将菌种接种到试管的,固体斜面培养基,上，培养成菌落后，置于,4,的冰箱中保存（每隔,3,6,个月要重新接种培养后再保存）。,（二）,甘油管长期保藏,在,3mL,的甘油瓶中加入,1mL,的甘油，高压灭菌,。将,1mL,培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于,20,的冷冻箱中保存。,四、课题延伸菌种的保藏,37,请你总结：微生物实验室培养的基本操作程序,1,、器具的灭菌,2,、培养基的配制,3,、培养基的灭菌,4,、倒平板,5,、微生物接种,6,、恒温箱中培养,7,、菌种的保存,38,39,菌种的保存,1,、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于,4,冰箱保存。,2,、长期保存：甘油冷冻管藏法,40,（三）培养基的种类,1,、按,物理状态,分：,液体培养基,（一般用锥形瓶盛装）,固体培养基,（一般用试管或培养皿盛装，在液,体培养基的基础上再添加琼脂。）,半固体培养基,其中固体培养基用于,菌种分离,、,鉴定菌落,等。,2,、按,成分,来分：,天然培养基,和,合成培养基,。,3,、按,功能,来分：,选择培养基,：加入某种化学物质，从众多微生物,中分离出所需微生物,鉴别培养基,：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物,一、培养基的作用和种类,41,