SN∕T 5392-2021 苹果牛眼果腐病菌检疫鉴定方法(出入境检验检疫).pdf

ICS 65.020.01 CCS B 163 中华人民共和国检验检疫行业标准SN/T 5392-2021 苹果牛眼果腐病菌检疫鉴定方法Detection and identification of N eo fbrea mlicorticis ,N eo fbreperennns， Neofabraea vagabunda ，Neofabrea kienholzii 2021-06-18发布2022-01-01实施中华人民共和国海关总署发布SN/T 5392-2021 目IJ1=1 本文件按照GB/T1. 1-2020(标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利O本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和同海关总署提出并归口O本文件起草单位:巾华人民共和国广州海关、巾华人民共和国上海海关、巾华人民共和国黄埔海关、中同检验检疫科学研究院o本文件主要起草人:王Jl芳、易建平、魏霜、林草娇、吕文刚、吴品珊。1 SN/T 5392-2021 苹果牛眼果腐病菌检疫鉴定方法1 范围本文件规定了苹果牛眼果腐病菌的检疫鉴定方法。本文件适用于进境苹果和梨等奇主果实、植株巾苹果牛眼果腐病菌的检疫鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件比不可少的条款O其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件OSN/T 2455 进出境水果检验检疫规程3 术语和定义木文件没有需要界定的术语和定义。4 苹果牛眼果腐病菌的基本信息4. 1 病菌种类4. 1. 1 腐皮明于包盘菌学名:N川、fabraeamal口。rt.icis(Cordley)日.S. Jacks. (19B);异名:Pezicula malicorlicis (日.S. J acks. ) Jannf. (1932) (苹果树炭瘟恼南);元性型川、ryptos户。no户川rVl.s户。ra(Pcck) Grcmmcn (1959)。4. 1. 2 多年生明抱盘菌学名:N eo jhraeaerenna， Kienhol.z(1939);尤性型:(、户tos户。no户1.1erenans(Zcllcr丛Childs) Wolle口w.(19:9)。4. 1. 3 白明抱盘菌学名:Neojbravaghund(Dcsm.) Rossman(2014);异名:Neofahraea alba (E. J. Guthric) Verkley (1999);尤性型:Phlyctema vap,ahunda Desm. (847)。4. 1. 4 金氏明:抱盘菌学名:Neofabra走lholzii (Seifert, Spotts &. Lve吕que)Spott吕，Lvesqu巳&.Seifert(2013);无性型:Cry户tos门。如1.1是ienhol.ziiScifcrt, Spotts &. Lvcsquc(2010)。4.2 分类地位真菌界(Fu口gi)，于囊菌门(Ascomycota)，盘菌亚门(Pezizomycotina)，悻舌菌纲(Leotiomycetes), SN/T 5392-2021 锤舌菌亚纲(Lcotiomycctidac)，柔膜菌目(Hclotialcs)，皮盘菌科(Dcrmataccac)，明f包盘菌属(Nejbraea)。上述四种苹果牛眼果腐州甫的寄主范围、地理分布、侵染传播、症状特点等信息参见附录A。5 方法原理苹果牛眼果!商病菌的为害症状、病菌的形态特征与培养性状、实时荧光PCR检测结果是制定本标准的主要依据。6 仪器和设备6. 1 仪器生物显做镜、解音IJ镜、超净T才干台、生物19养箱、电子天平(感量。.01g)、烘箱、灭菌锅、冰箱、恒温孵育仪、制冰机、纯水仪、微波炉、电礁炉、微量移液器(可说j式范罔:0.5 tlLl 000 ，!1L)、台式高速离心机、1旋涡振荡器、荧光PCR仪、核酸蛋内分析仪。6.2 设备样品袋、保鲜袋、标签、定性滤纸、放大镜、慑子、解剖刀、棉纱、脱脂棉、酒精灯、载玻片、盖破片、接种针、培养阳(直径9cm)、烧杯、二角瓶、试管、量筒、研钵及研样、离心管(0.2mL,l. 5 mL,2 mL)及Tip头(0.1L10L，5L200L，100Ll 000L)。7 试剂和材料7. 1 试剂|除另有规定外，所有试剂均为分析纯。无菌双蒸水、无水乙醇、70%乙醇、2%CTAB提取缓冲液、10%SDS 溶液、非酣、二:氯甲皖、异戊醇、异丙醇、Tris-HCl、DNA提取试剂盒、实时荧光PCR通用试剂.引物和探针。7.2 培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):每1000mLPDA 由200g去皮马铃薯、20g葡萄糖、18 g琼脂配制而成，121oc高压火菌20mino 7.3 水果果实苹果及梨果实。8 检疫鉴定方法8. 1 口岸现场查验8. 1. 1 抽样口岸现场查验时，按照S=J/T2/155进行抽样与取样。2 SN/T 5392-2021 8. l. 2 果实症状检查重点查看果实表面、果梗问部、果尊凹部是否有似牛眼形状的腐烂的斑，用放大镜观察腐烂组织表而是否有稀疏的菌丝体及奶油色胶质状于实体(分生J包子盘)症状特点参见A.4.1和图B.la)c)J。8. l. 3 枝条症状检查重点查看新梢或枝条、幼树的大枝和主干是否有变色或渍揭病斑，齿痛病斑是否脱落并外露木质部.病健交界树皮细织是否有裂纹，裂纹处是否有子实体(分牛j包子盘和子囊盘)症状特点参见A.4. 2 和|到B.l f)j)JD将可疑样品带回实验室进一步检验，记录样品品神、数量、来源国及取样地点、取样人和垠样日期等信息、o8.2 实验室检验8.2. 1 直接检验|纣眼观察或镜检病果的外观及剖面症状特点或果树的病梢病枝症状特点，记录病斑的形状、大小、质地及颜色，挑取病部子实体制成玻片，置于生物显微镜下，按8.2. 3进行病菌的分离培养，按8.2.4观察病菌的形态特征。8.2.2 保湿培养如果病果或病枝梢卜有明眼病状且未形成明恩的子实体，进行保湿培养。将口J疑病果或病枝梢置于塑料盒旦旦塑料袋巾，于20DC下保湿培养，观察症状的变化，按8.2.3进行的南分离培养。8.2.3 分离培养采用组织分离培养法，用70川酒精对发病部位及周围组织表面进行喷雾消毒，风干后用泊毒过的刀片切取病健交界处果肉组织，切成5mmX5 mm小块后放置于APDA平报中，或直接挑取病部的子实体，置于八PD八平板上在20DC、黑暗下培养。菌落长向后，挑ltz菌落边缘的菌丝体，转至PD八平板上纯化培养，纯菌株再转至PDA平板，备用。8.2.4 病菌培养性状和无性型形态特征观察从纯菌株菌落边缘取直径4mm菌丝体块，置于PDA平板中央.在20DC、黑暗条件下培养，观察记录菌落的生长速度、颜色变化、子实体的形成手11产咀情况。挑取PDA平板上的子实体制成玻片，置于生物显做镜下观察，拍摄分生抱子盘、分生抱子硬、产于包细胞和分生于包子的形态特征。每个菌株洲量:-30个分生于包子。8.2.5 有性型形态特征观察如果病枝梢上己产生病菌的有性咽，取病组织进行切片制片，置于生物显做镜下观察记录子提盘、子囊、子囊于包子的形态特征。8.2.6 致病性测定该项为首次截获时采用。采用柯赫氏法则验证病菌的致病性。将分离物接种置PDA平板上，于20 DC、24h黑暗下培养5d，用无菌刀片刮取菌落上的分生于包子，用无菌水将稀释成浓度为每毫升lX101个子包子悬浮液。采用75%酒精对供试苹果及梨果实进行表面消毒，风干备用。用无菌刀片在靠近3 SN/T 5392-2021 果梗凹部果面上划长10mm深2mm的。J口，将25L分生于包子悬浮液滴人伤口内，对照以元菌水代替自子悬浮液O每个菌株接种的每个品种果实不少于6个。每个接种果实用保鲜膜单独包装，置于20、2/1h黑暗下保温培养。每天观察接种果实的发病情况，发病后分离病菌，并元成病菌鉴定的整个程序。8.2.7 实时荧光PCR检测l8.2.7. 1 DNA提取病菌基|大l组DNA的制备占法按照附录C执行。8.2.7.2 实时荧光PCR反应体系和反应程序实时荧光PCR反应体系和反应程序按照附录D执行o9 鉴定特征9. 1 菌落1f eo fabraea mliortlis ，if.户erennans,jf. .I叭在PD八平板卜，菌落圆形，边缘规则或不规则.气生菌丝稀少。病菌生长缓慢，菌落初期呈白色至乳白包、浅肉包.后期颜色逐渐加深.呈浅咖啡包、黄褐色至黑褐色，色素不扩散。菌落中有时有浅咖啡色液滴，后期形成深洗褐色相间同心轮纹及奶油色胶质状分牛J包子盘菌落特征参见图B.2日)Jo9.2 无性型形态在病果组织上及PDA上，可见分生于包子盘，初在寄主表皮下着生，后突山表皮生，枕状.奶油色至发黄，胶质状，常合生.直径。.2 mm1 mm，分生于包子柜尤色、瓶梗状.有分枝，产由细胞尤色，ClO15X3)m;分生于包子有大小2种类型。大分生于包子元色透明，单细胞，培养时倘有2胞3胞.长椭圆形，一端稍小，成熟后有数个细小油1求，有时中部有一明日的大油1求，f.maLicorLicis的大分生于包子较弯曲呈镰刀状至U形，而N.perenns，N. vagbunda和N.kienholzii的分生于包子多数直或稍弯;小分生子包子元色透明.单细胞，长椭罔形，分生子包子两端各有一个较大的油球种问分子J包子形态差异参见图I3.2b)h)，附录EJ。9.3 有性型形态有性型非常少见.故该项为参考特征。在发病的技梢枝干等自然基质卜形成，一般在旧分生于包子盘的子座中产生。子囊盘。.5 mm1 mm，直接附着于分生于包子座基部，颜色为灰色到肉色，无柄(偶有短柄);子囊棒状、无盖、基部肉茎很短o子囊子包子8个，无色透明，壁薄，单细胞句椭同形。随着于包子老熟，子囊于包子变为1隔5隔，于囊于包子壁逐惭增厚，颜色变为淡揭色。l除综N.走i陀er刀11山f1比(比C;0旷)r门ti川C川IS，N.erenna川，N. vagal】unda均已发现有性型种|同子囊和|子囊于包子形态差异参见图B.2i)j)，附录EJ0 9.4 致病性测定该项为首次截获时采用O接种果实产生与苹果牛H果腐病一致的症状，接种5d后，在供试的苹果不日鸭梨的接种部位均出现较小的浅褐色病斑，果肉组织软化变褐腐烂;接种后10d，果肉组织腐烂面积扩大，在腐烂组织表面可见少量乳白色胶质状分生于包子盘接种后发病的症状参见图B.2d)c)Jo从发病果实再次分离到的菌株与供试菌株的培养特性及形态特征一致。SN/T 5392-2021 9.5 实时荧光PCR检测实时荧光PCR检测间值确定、质控标准及与结果分析按照D.6执行。10 结果判定如果病部有明显的病状和病征.经直接检验.病菌的形态特征与鉴定指标9.2或9.29. 3吻合;或如果病部有病状但尤病枉，经保湿培养和l或分离培养所产生的病菌培养性状及形态特征与鉴定指标9. 1 9. 2或9.19.3吻合.判定为苹果牛眼果腐病菌;结合实时荧光PCR检测结果.判定苹果牛眼果腐病菌的具体种类为Neofabraeamalicorticis, N.erenna川，N.vagab川巾和N.k ienh ol.zii的其中之一(判断指标按照D.6执行)。门菌种保藏病菌分离物要标注菌株来源、奇主、分离时间、鉴定人，在含20%计泊的冻存管中于-80C保存.或将菌株转接在PDA斜面上培养.置于4C下保存.并定期转管。保存期满后.需经灭菌处理O12 资料保存妥善保存检验资料，以备复验、谈判和仲裁。检验报告应注明检验日期、方法、结果等，)f.有检验人签名。检验图片包括症状、病菌1;养性状和形态特征图片歧实时荧光PCR扩增曲线图等。飞JSN/T 5392-2021 附录A(资料性)苹果牛眼果腐病菌的寄主范围、地理分布、信染传播、症状特点A.1 寄主范围A. 1. 1 Neofabraea malicorticis和Neofabraeaperennans 苹果属CMalus)、梨属CJ)JrUS)、植梓CC.ydoniblo)、桃CJruUSerS1(川、再CJ.armenia)、日本木瓜CChaenmeles j户onu川、山植CCrataegus spp.)、花揪CSorbus spp.)、唐操CAmel川chierspp. )、玫瑰CRosaspp. )等蔷辙科植物。A. 1.2 Neofabraea vagabunda 苹果属CMalus)、梨届CPyru川、油橄榄COleeuro户时川、白蜡树届CFraxin)、卫矛届CEuonymus)、悬钩子属CRubus)、接骨;牛二属(Snbucus)、乌头属CAconit川z)、飞蓬属CErigero川以及绒毛草(日olcuslanatus)。A. l. 3 Neofabraea Kienholzii 苹果属(Malus)、梨CPyruscomz unis )。A.2 :t也理分布A. 2. 1 Neofabraea mlicorticis 北美西部、欧洲(丹麦，荷兰，葡萄牙等人新西兰oA. 2. 2 Neofabraea perennns 北美西部、欧洲(荷兰、德国、英国、丹麦和捷克等人澳洲。A. 2. 3 Neofabraea vagabunda 欧洲大陆(英国、塞尔维亚、波兰、瑞寸丁、丹麦、捷克、瑞典、挪威、德国、意大利、立陶宛、法国)、澳洲、新西兰、智利、南非、北美东部。A. 2. 4 Neofabraea kienholzii 葡萄牙、加拿大、美同俄勒冈州南部、华盛顿州中北部和澳大利亚。A.3 侵染传播苹果牛眼果腐病菌为害果实、枝条和树干，导致果实腐烂，造成树皮由病、枝条枯死，甚至幼树死亡。苹果、梨采收后，病菌在果实中潜伏，一般在水果低温冷藏3个月/l个月发病，发病较重的年份，在北美苹果和梨产区的采后果实腐烂率注40%。果园中，病菌主要通过雨水和灌溉水的泼溅传播，远距离传播则通过水果贸易和种苗移植。6 SN/T 5392-2021 A.4 症状特点A. 4.1 果实症状N eo fabraea mlicorticis ，N.户erenans, N. VagabulIda和N.走ienholzii在果实上为害症状基本相似，可发生在果梗凹部、果等凹部和果实表面。病斑圆形，扁平至轻微下陷，中央部位色浅，呈浅褐色、黄褐色至棕褐色，边缘明显呈棕黑色，形似牛H状，直径1cm2. 5 cm，甚至巨大O病斑表面可见稀疏的白色菌丝体、奶油色胶质状分生于包子盘O病斑组织腐烂，较坚硬，与健康组织相连OA. 4. 2 枝条症状苹果树、梨树的幼枝、大枝，甚至幼树的主干被侵染后，初期呈现浅红褐色、紫红色的小罔点句逐渐发展形成情红色或情褐色椭圆形凹陷病斑，形成小溃痛，后期病、健康组织之间山现裂纹。夏季在裂纹处呈现大量裂开的、奶油色的分生T包子盘o溃痛病斑最终裂开甚至脱落，露而木质部或纵向切皮纤维，呈现提琴弦状的外观。多个病斑愈合常导致树干巧、割致使幼树、枝条死亡。病菌可在树皮死组织中存活2年3年并产生大量的分生于包子，而有性却!较少见oN.eren川川侵染形成多年生提房，发病特征是环绕伤口形成重叠的同心环状愈伤组织，称为苹果树多年生愤痛病，而N.wlicrtl Cls在树皮上形成的溃痛没有愈行J组织的同心同，称为苹果树炭症病。N.Vagbund在苹果和梨造成叶片炭瘟和细枝愤踊症状，在白蜡树树皮上导致硬币状愤畅病斑。N.是leholzii对枝条的为害尚不清楚，但人工接种时可使枝条发生愤痛o7 SN/T 5392-2021 见罔B.I罔B.20 附录B(资料性)苹果牛眼果腐病菌的为害症状、形态特征及培养性状图a) 苹果牛眼果腐病病果1b) 苹果牛眼果腐病病果2c) 苹果牛眼果腐病病果3d) 富士苹果接种Neo fabraea perennans 10 d 后的症状(左:发病果.右:对照果)e) 鸭梨接种Neo fabraea perennans 10 d 后的症状(左:发病果.右:对照果)f) N. malicorticis g) N. malicorticis h) N. malicorticis j) N. perellllallS .i) N. perellllallS 引起的枝条症状引起的枝条症状引起的枝条症状一一引起的枝条症状引起的枝条症状一一初期症状一一树皮组织坏死溃殇部位的提琴弦状外观一一树皮坏死一一溃痛注:图片a)e) ，寻|白干卫芳寺，2016;圈。j)，寻|白Jones，A. L. and H. S. A.ldwinkle, 1990。B.1 苹果牛眼果腐病菌所致的症状图8 SN/T 5392-2021 a) 1可eof abraea perennans b) Neofabraea perennans c)可eof abraea perennans 菌落、分子于包子盘分生于包子梗产于包细胞d) N. perennns e) N. kienholzii 大、小分生于包子大、小分生于包子f) 1可vagabunda 大、小分生于包子国因八门门八川门川川HU八门VUU门门V八川门八川U门vg)可malicorticis hl N. perennans i) N. perellllalls .i) N. perennans 大分生袍子手绘图大分生袍子手绘图子囊袍子子囊注:图il)e)iJl8王卫芳，2016;圈f)寻18罗家风，2012;图g)h)iJl8 J. R. Kiellholz, 1川9;图i)j)号18G. J. M. Vcrklcy, 19990标尺:1冬Ib):20/Lm，1刽c)f)及i):IOfLm，阳片j): 25 /川口。B.2 草果牛眼果腐菌形态特征图9 SN/T 5392-2021 附录C(规范性)DNA制备C.1 样品前处理分离物转接到PDA平板上，于20oC黑暗下培养7d.从菌落上刮取菌丝体;或从可疑病果、苗木、枝条枝干切取发病的组织块。液氮研磨成粉末后装入1.;)mL离心管中备用。C.2 CTAB 1去提取DNA称取100mg经研磨的粉末样品，加入570,uL2 % CTAB DNA提取液.30liLlO% SDS济液.65oC 水浴:-30min，加入600L酣三氧甲皖液(酣:三氯甲皖:异戊醇为2;): 24 : 1)抽提2次，11000 g常温离心5min，取上沽，加入1/10体积3mol/L醋酸饷溶液和2倍体积无水乙醇或加入等体积的异丙醇混匀，11000 g4 oC离心10min，弃上清.沿离心管壁加入1mL70%乙醇清洗DNA沉淀，11000 g40C 离心;)mln，弃上清.加入40liLTr甘EDTA缓冲液j容解，作为扩增梗板件检。C.3 试剂盒提取DNA选用适合真菌基因组DNA提取的商业化试剂盒，按照试剂盒说明书操作提取DJA。nu D.1 寻|物和探针引物和探针见表D.1 0 引物/探针Neo F Nco R M八L-PPER-P 八Ul-PKTE-P 注N.= N eofabraea D.2 加样附录D(规范性)实时荧光PCR检测表D.1引物和探针序列及其检测目标序列(5少3)C巳ctcggl日gggcaaagccaactcggcggcttcc F 八M-aaca ttaaca ttttca tca tca tt-M G R CY5-cgcgta tcgcaaca tcatcattttcatca t-BH Q2 NED-aaga tgttcaacccctccctcgcgta-RH Q 1 HEX -tgaccacttgatga tctc-MGR SN/T 5392-2021 检测口标N. malicorticis N.户erennsN. oagahu7Ida 飞1.kienhLzii N.川LrllClSN.户F阿nnansN. vagaunda N. kienhuLzii 制备实时荧光PCR反应液，反应体系为20u见表D.2)。每个反应体系设立阳性对照、阴性和空白对照，阳性对照模根为拟检测目标相对应种(N.malicorticis, N.eren削川，N. vagabund手QN. k i enh () 1 zi i )阳性菌株的DNA，阴性对照为不含苹果牛眼病菌的DNA，空白对照为无DNA酶的双蒸水。如果采用单重探针检测，在反应液中加入拟检测目标相对应种的探钊。如果采用4种探钊泪合检测，则在在反应液中同时加入4种探针。表D.2实时荧光PCR反应体系(20L)体积IVL反liV:成分单一探针混合探针2 X Thunderbird Prohe qPCI岛1ix10 1 0 10 f，mol/L上游71物10mol/L上游引物I I 5mol/L探针1 1 待检样品DNA(l O日glOOng) 1 每种探辛|各1无际i水自L2L 几给出这信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的强制使用。如果其他同类产品具有相同的效果，也可选抨使用等效产品。11 SN/T 5392-2021 D.3 扩增反应程序设置扩增反应程序为:95 oc预变性10min;95 oC 15 s,60 oC 1 min，40个循环。读取Ct值o以Ct豆35作为阳性标准阔值。D.4 阁值确定以荧光PCR反应的前3个15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，以本底信号标准差的10倍作为荧光阔值，以样品扩增产生的荧光信号达到荧光|竭值时所产生的循环数为循环间值(Ct值)。应根据实际情况调整基线范围，以基线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。D.5 质控标准阴性对照及空白对照应无扩增向线。阳性对照的。值应1728以内.并有明恩的扩增由线。D.6 结果判定在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正常的情况下，则:12 a) FAM通道荧光信号的增加早典型的S形扩增曲线，且G值豆35，判定苹果牛眼果腐病菌种类为i.malicorliis (腐皮明白盘菌)荧光PCR阳性;检测Ct值:i640，再次测试，如Ct值仍为3640句判定检测结果为N.rnalicorticis阴性。b) CY5通道荧光信号的增加呈典型的S形扩增曲线，且Ct伯:i5，判定苹果牛眼果腐病菌种类为N.户凹enna川(多年生明于包盘菌)荧光PCR阳性;检测Ct自:i640，再次测试，如Ct值仍为3640，判定检测结果N.户erennans阴性。c) NED通道荧光信号的增加呈典型的S形扩增曲线，且Ct伯35，判定苹果牛眼果腐病菌种类为N.vagabunda (白明子包盘曲)荧YC;PCR阳性;检测Ct值3640，再次测试，如Ct值仍为3640，判定检测结果N.vagabunda阴性。d) HEX通道荧光信号的增加呈典型的S形扩增内线，且cd盲，35，判定苹果牛眼果腐病菌种类为N.kienholzii (金氏明血盘菌)荧YC;PCR阳性;检测Ct值3640，再次测试，如Ct值仍为3640，判定检测结果N.kienholzii阴性。形态比较见表E.Ic 附录E(资料性)苹果牛眼果腐病菌种间的形态差异表E.1苹果牛眼果腐病菌种间的形态比较中义名!商皮明白和:菌多年生明也布菌内明白布:菌有性型Nlali正ortzclSN.旷阴阳阳N. ua ga1mnd a 无性型c.正urtI!S()ra(二erennnsIhl)吃telna7)agabund 镰刀形至U形啕长椭l员|形，长椭恨|形，较瘦长，大分1:1包子较弯曲多数直或稍弯曲直全略弯(1535) X (36) (1ZZ5) X (3-6)且(1730) X (2. 53. 5) 小分生于包子长椭圆形长椭圆形长椭圆形5-8(-13)X 1-1.5 (6 10)(1. 53) (15 18)(0.5l)且子囊(75150) X (1020) (86170)(8-14)队(125150)(1324) 子囊子包子(12. 526) X (59)且(11. 522. 5)(48. 5) (2030) X (710) 几Verkley，199!J; 1, Spottsct al. 2009;N.二Nfbraea，C.二(、r)!卢tos户。rLO户口。SN/T 5392-2021 单位为微米金氏明于包括菌N. henllOlzii C. kienhlzii 长椭恨|形，多数1:(，个别稍弯曲(1217. 5)(2. 53. 5) 长椭圆形(2. 56. 5) X (1. 52. 5) 尚未发现b尚未发现b13 -NON-N白的白同军巾华人民共和国出入境检验检疫行业标准苹果牛眼果腐病菌检疫鉴定方法SN/T 5392-2021 中国海关:r1I版社有限公司11版发行北京市朝阳区东四环南路叩1号(l00023)编辑部(川。)6S 194242-7S31 网址 2021年7片第一次印刷争斗书号，155175 677 k价20.00兀开本880X 12:,0 1/16 2021年7月第一版印数1-500SN/T 5392-2021