表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分.pdf

年 月 研究论文：收稿日期：共同第一作者通讯联系人：（夏凌）；：（肖小华）；：（李攻科）基金项目：国家自然科学基金面上项目（，）；国家自然科学基金重点项目（）；广东省自然科学基金（）；广东省药品监督管理局项目（）：（，）；（）；（）；（）表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分刘惠珍，陈雅莉，夏 凌，肖小华，李攻科（中山大学化学学院，广东 广州）摘要：微芯片电泳（，）分离效率高、试剂和样品消耗量少、易实现多操作单元集成，在食品、环境和药物等领域应用广泛。环烯烃共聚物（，）等聚合物微芯片材料成本低、制作简便，但电泳过程中通道表面易发生非特异性吸附，且电渗流不稳定，限制了其应用。这些不足可通过 表面改性解决。本文采用静态涂层和动 静态涂层联合策略，研制通道表面改性 微芯片，结合激光诱导荧光（，）检测，发展了简单高效的 分离分析方法，用于保健品中功效成分检测。通过负电荷涂层微通道表面改性方法，可以提高 对阳离子氨基酸的分离效果，而通过动 静态涂层结合的微通道表面改性方法，可以提高 对阴离子氨基酸的分离效果。负电荷涂层由 微通道表面的疏水氨基酸吸附、戊二醛固定化和亲水氨基酸功能化构建，正电荷涂层由 微通道表面的缬氨酸吸附、羧基活化和乙二胺功能化构建，动态涂层通过向微通道引入含有羟丙基甲基纤维素与十二烷基硫酸钠的缓冲液自动形成。实验研究了表面改性微通道的理化性质和电泳分离的影响因素，并将所建立的方法用于儿童保健品中赖氨酸和 氨基丁酸以及运动饮料中天冬氨酸与牛磺酸 的检测，儿童保健品中赖氨酸和 氨基丁酸的加标回收率为 ，相对标准偏差（），运动饮料中天冬氨酸与牛磺酸的加标回收率为 ，。分析结果与 方法的测定结果吻合，该法在保健品中氨基酸分离分析中有应用前景。关键词：表面改性；微芯片；电泳；环烯烃共聚物；保健品中图分类号：文献标识码：，（，）：（），（），（），色谱第 卷 ，（）（），（），引用本文：刘惠珍，陈雅莉，夏凌，肖小华，李攻科 表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分 色谱，（）：，（）：；（）；微 芯 片 电 泳（，）的分析效率比普通毛细管电泳（，）高，且 系统试剂和样品消耗量少、易于高度集成、有助于现场分析，在生物医学和药物分析、环境监测、法医调查和临床诊断等方面应用广泛。微芯片表面改性方法包括静态涂层改性和动态涂层改性。动态涂层通过在缓冲液中添加聚合物或表面 活 性 剂 改 变 电 渗 流（，）来实现，操作方便且过程可逆，但涂层容易脱落。静态涂层改性是电泳微芯片最有效的表面改性方法，涂层稳定且可提高电泳重现性。常见静态涂层改性方法包括紫外接枝法、等离子处理法和多层化学沉积法。采用阴离子静态涂层对微通道进行改性，能产生阳离子，用于阳离子分析物分离。保健品中常见的阳离子氨基酸有 氨基丁酸和赖氨酸。氨基丁酸是哺乳动物中枢神经系统中主要的抑制性神经递质，它影响大脑发育，在促进神经元发育、预防失眠等方面发挥重要作用。口服赖氨酸能增加生长激素释放，有助于人体钙吸收和肾脏保护，增加骨胶原交联过程。阴离子静态涂层可提高 对阳离子氨基酸的分离效果，但不适用阴离子氨基酸分析。采用动 静态涂层结合的环烯烃共聚物（，）微通道表面改性方法，可提高 对阴离子氨基酸的分离效果。牛磺酸和天冬氨酸等阴离子氨基酸常作为有消除疲劳、提高记忆力等功效的保健品中的功效成分。牛磺酸是重要神经递质、抗氧化剂，能调节葡萄糖和脂质，影响能量代谢，常被添加到婴儿食品和运动饮料中，是合法的食品添加剂。天冬氨酸是有酸性侧链的蛋白源性氨基酸，能刺激神经元受体，是哺乳动物大脑中主要兴奋性神经递质，它参与葡萄糖生成，可维持正常能量代谢，对瞬时脑力劳动负荷后能量修复有积极作用。氨基丁酸和赖氨酸常用检测方式包括高效液相色谱法（）、比色法、荧光传感器检测、电化学检测、等。而牛磺酸和天冬氨酸检测方法有色谱法、电化学法、第 期刘惠珍，等：表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分核磁共振法等。本研究采用光学性能好、惰性且低成本的 作为 芯片基底材料，在 微芯片通道表面通过疏水氨基酸吸附、戊二醛（，）固定化和亲水氨基酸功能化构建静态涂层，提高阳离子分析物的 分离效果，结合激光诱导荧光（，）检测，用于儿童保健品中赖氨酸与 氨基丁酸 分离分析；采用动 静态涂层结合微芯片通道表面改性方法，通过缬氨酸吸附、羧基活化和乙二胺（，）功能化在 微通道构建静态涂层，向 微 通 道 引 入 含 有 羟 丙 基 甲 基 纤 维 素（，）与十二烷基硫酸钠（，）的缓冲液形成动态涂层，提高阴离子分析物 分离性能，结合 检测，用于运动饮料中天冬氨酸与牛磺酸的分离分析。实验部分 仪器与试剂 高压电源（美国 公司）；摄像机和 倒置荧光显微镜（日本尼康株式会社）；电子天平（上海天平仪器厂）；数控雕刻机（深圳市捷丰泰科技有限公司）；自制 检测器（由 激光二极管、二色镜、长通滤波器和 雪崩光电二极管构成）；多 功 能 数 据 采 集 卡（，）；高效液相色谱仪（日本岛津株式会社）；高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；射 线 光 电 子 能 谱 仪（，赛 默 飞，美 国）；接触角测量仪（克吕士，德国）；冷场发射扫描电镜（，日本电子株式会社，日本）丙氨酸（，（纯度，下同）、缬氨酸（，）、亮氨酸（，）、异亮氨酸（，）、甲硫氨酸（，）、脯氨酸（，）、色氨酸（，）、苯丙氨酸（，）、天冬氨酸（，）、氨 基 丁 酸（，）、赖氨酸（，）、精氨酸（，）和 牛 磺 酸（，）购于百灵威科技有限公司（北京）。乙基（二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（），）、羟 基 琥 珀 酰 亚 胺（，）、硼砂（）和（）、磷酸二氢钠（）、氢氧化钠（）与乙腈（色谱级）购于阿拉丁试剂有限公司（上海）。氟硝基，苯并恶二唑（，）、（，）购于上海麦克林生化有限公司（上海）。（）购于 生命科学有限公司（上海）。磷酸盐缓冲液（，（）购于赛国生物科技有限公司（广州）。碳酸氢钠（）、（）、三水合乙酸钠和甲醇（色谱级）购于广州化学试剂厂，实验用水均为由 纯化系统得到的超纯水（）。色谱柱（，北京 科技有限公司）。儿童保健品（压片糖果）和运动饮料购于零售店。微芯片制作 微芯片通过数控铣床机械雕刻法建立微通道，使用打孔器打孔，通过热压技术封装构建，详细制作过程参考文献。微芯片通道网络设计如图，包括 个通道段，所有通道均宽 ，深 ；分离通道长 ，其他 个通道长 。微通道雕刻完成后在 个通道端处打孔，乙醇超声洗净后于 烘干。然后将其置于 烘箱中热压 封装构建微芯片。将 离心管盖打孔后作为储液池，使用由 溶解到甲苯中制作成的胶水将储液池连接到 个孔处，放置过夜。表面改性和表征 负电荷涂层 微通道表面负电荷涂层通过疏水氨基酸吸附、固定化、亲水氨基酸功能化构建，如图。首先，将 （质量分数）疏水氨基酸 溶液充满通道，室温静置 后用蒸馏水冲洗所有通道，烘干；其次，将 （）水溶液充满通道，室温静置 后用蒸馏水冲洗所有通道，烘干；最后，将 （质量分数）亲水氨基酸 溶液充满通道，室温静置 后用蒸馏水冲洗所有通道，烘干制得微芯片，保存备用。色谱第 卷图 （）芯片电泳、（）负电荷涂层及（）正电荷涂层 表面改性过程的示意图 （），（）（）：；：；：（）；：；：通过 表征改性 芯片表面基团。通过接触角测量仪测量接触角研究 表面亲水性。在具有负电荷涂层 微通道内充满含有 标记氨基酸混合物的 硼砂缓冲液（）并静置 ，用去离子水冲洗 后检测，用倒置荧光显微镜拍摄 微通道照片，使用 处理图片得到荧光强度图，通过荧光强度研究 表面吸附情况。通过 表征改性前后微通道表面平整度。正电荷涂层 微通道表面正电荷涂层通过 吸附、羧基活化、功能化构建，如图。首先，将 （质量分数）溶液充满通道，室温静置 后用蒸馏水冲洗所有通道，烘干；其次，将含有 （质量分数）的 溶液充满通道，室温静置过夜后用蒸馏水冲洗所有通道，烘干；最后，将 （质量分数）溶液充满通道，室温静置 后用蒸馏水冲洗所有通道，烘干制得微芯片，储存备用。动态涂层通过将含有 （质量分数）和 （质量分数）的 硼砂缓冲液引入 通道自动形成。通过 表征改性 芯片表面基团，通过接触角测量仪测量接触角研究 表面亲水性。在 微通道内充满含有 标记 与 的 硼砂缓冲液（），静置 ，用去离子水冲洗 后检测，研究吸附性能。实验方法 依次用水和缓冲液冲洗微芯片通道 。将样品溶液置于储液池，将缓冲液先填充到其余储液池中，采用门控进样模式将样品进样到分离通道中。然后在储液池 和 处施加高电压形成稳定样品流；随后，将储液池 处高电压切换到接地，实现样品进样，进样时间为 ；进样完成后马上在储液池 和 处施加电压（），为分离通道提供合适电场，实现电泳分离。或在储液池 和 处施加高电压形成稳定样品流；随后把储液池 处高电压切换到接地，实现样品进样，进样时间 ；进样完成后马上在储液池 和 处施加高电压，实现电泳分离。通过 检测器检测样品，通过 和 数据分析工具分析得到的电泳图。样品制备 儿童保健品：精确称量 研磨后的儿童保健品，溶解在 纯水中，涡旋混合 ，超声波辅助萃取 ，萃取液以 转速离 第 期刘惠珍，等：表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分心 ，上清液用 膜过滤后，滤液待测。运动饮料：取 样品用 膜过滤后，滤液待测。标准品衍生化：将 甲醇溶液分别加入 不同质量浓度的（）、（）、（）及（）溶液中，水浴反应 ，冷却至室温后，储存在 备用。样品衍生化：将 甲醇溶液加到 待测液中，衍生化方法同上。图 （）静态涂层改性 表面 光谱图，（）、（）、（）峰拟合图，（）负电荷涂层 板上接触角，（）微通道中空气水界面轮廓图以及静态涂层（）涂覆前和（）涂覆后 通道表面对氨基酸的吸附 （）（），（），（），（）（），（）（）：液相色谱方法保健品中 和 采用 标准方法，做对比实验。流动相为 乙酸钠水溶液乙腈（，）。采用 色谱柱作为分析柱，进样体积 ，柱温为 ，流速为 ，紫外检测波长为 。和 采用 法做对比实验。流动相为 磷酸二氢钠水溶液（质量分数为的氢氧化钠溶液调节 至 ）乙腈（，）。采用 色谱柱作为分析柱，进样体积 ，柱温为 。流速为 ，紫外检测波长为 。结果与讨论 静态表面改性微芯片 改性微芯片的性能表征 通过疏水氨基酸（以 为例）吸附、固定化、亲水氨基酸（以 为例）功能化在 通道表面构建 层静态涂层。通过 表征确定其是否成功涂覆在 表面，并考察了静态涂层改性微芯片表面亲水性和抗吸附性能。涂层表征 为确定 静态涂层改性 微芯片表面的元素组成，进行了 表征。如图，、和 的特征峰分别出现在 、和 处。根据其化学结构，峰被拟合为 个成分。如图，、和 处主要成分分别来自碳碳单键（）、碳氮单键（）以及羧基（）中的碳，峰被拟合为 色谱第 卷个成分。如图，处主要成分来自 中的氮。如图，峰被拟合为 个成分。其中 和 处主要成分分别来自羧基中碳氧单键（）和碳氧双键（）中的氧。除了 微芯片上有的 键外，其余化学键均来自 涂层，表征结果证明负电荷涂层成功涂覆在 芯片上。亲水性和抗吸附性能表征 采用接触角测量仪测量负电荷涂层涂覆前后 板的水接触角，研究了 表面亲水性。如图，负电荷涂层改性后，表面亲水性提高，水在 表面上接触角从 变为 。如图，除了 板上接触角减小，负电荷涂层改性后 微通道中空气水界面轮廓从直线变为曲线，也证明了其亲水性增强。图 疏水氨基酸种类对（）峰形及（）的影响，亲水氨基酸种类对（）峰形及（）的影响 （）（）（），（）（）：为研究负电荷涂层改性后 通道表面抗氨基酸吸附能力，以 硼砂缓冲液作为背景电解质（，），将 标记氨基酸混合物充满负电荷涂层改性 微通道，去离子水冲洗后检测，荧光强度与通道内吸附量成正比，如图，未改性 通道对于氨基酸有较强吸附，通道照片呈现强荧光。如图，负电荷涂层可有效避免通道对氨基酸非特异性吸附，改性 通道内外荧光强度相同。芯片改性用氨基酸的选择 由于氨基酸侧链基团不同，负电荷涂层中第 层涂覆的疏水氨基酸涂层与第 层涂覆的亲水氨基酸涂层可能影响分析物柱效，选用带有最多正电荷的 作为模型分析物，研究了不同氨基酸涂层对其柱效的影响。疏水氨基酸种类可能影响涂覆均匀性，从而影响抗吸附效果和电泳性能。将、和 种疏水氨基酸分别吸附在 表面作为静态涂层第 层，通过 固定化和 功能化构建负电荷涂层。以 硼砂缓冲液作为，将 标记 进样，以 为分离电压，得到不同涂层下的 电泳与理论塔板高度（）图。结果表明，以 为第 层涂层时，的峰形最好，峰宽最窄（如图），的 值有最小值（如图），即其涂层均匀性和电泳性能最好，因此选择 为第 层疏水氨基酸涂层用于后续实验。第 期刘惠珍，等：表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分 为得到好的分离效果，考察了第 层亲水氨基酸种类对 峰形与柱效的影响。通过 吸附、固定化后，采用不同的亲水氨基酸作为第 层构建负电荷涂层。以 硼砂缓冲液作为，将 标记 进样，以 为分离电压，得到不同涂层下 电泳与 图。结果表明，在侧链基团含羧基的 作为改性第 层涂层时，获得最好的峰形，峰宽最窄（如图），最低（如图），柱效好。因此选择 为第 层亲水氨基酸涂层用于后续实验。电泳分离条件考察 样品移动速度（）考察了不同分离电压对 涂层改性通道的 微芯片中 和 移动速度的影响。将 标记 和 标记 分别进样，在进样口下游 处检测。如图，和 的 均随分离电压线性增加。在同一分离电压下，的 比 大，且 随着电压增大而增大，表明负电荷涂层改性微芯片同步 分离分析 与 有可能性。图 分离电压 对（）以及（）的影响，（）不同分离距离和（）不同分离电压下 和 的分离度（）（）（）（）（），（）（）（）（）柱效 用 和 的 与 的关系表征 的分离性能。图 为 对 通道中 和 迁移的影响。随着 增大，和 的 值先降低后增加，在 处取得了最小值。这符合电泳规律，能通过调节 达到最佳柱效。分离度（）将 和 的混合物进样，在分离通道中检测并计算电泳图中的峰分离度，研究改性芯片的 分离性能及分离距离（）对分离性能的影响。以 硼砂缓冲液作为，将 标记 和 标记 混合物进样，分离电压为 ，在分离通道不同分离距离处检测，获得一系列电泳图。如图，和 的 与 成正比，在 时获得 最大值 。分离电压对分离性能的影响如图，和 在 时获得最大 值 。因此，选择 与 用于后续实验。在此条件下，每次分离只需 即可完成。分析 和 的方法学考察 在 分离电压下，以 硼砂缓冲液作为，将 标记 和 进样，并在分离通道距离进样口 处检测，建立了 和 的分析方法。结果表明，在 （对应样品中含量为 ）范围内，标记 的峰面积（）线性增加，与分析物含量（，下同）之间的线性方程为 ，相关系数（）为 ；线性方程在 （对应样品中含量为 ）范围内为 ，为 。和 的检出限（）分别为 和 （）；测得含量的相对标准偏差（）均小于 （）。将静态涂层改性 微芯片的 方法用于儿童保健品中 和 的分析。加标前后儿童保健品的电泳图如图，和 的测得含量和回收率列于表 中。在儿童保健品中，检测到 和 ，和 的回收率分别为 和 ，（）。作为参考，儿童保健品也通过 标准法进行了分析，在 范围内，的线性方程为 ，为 ；的线性方程在 范围内为 ，为 （）。由表 可以看出，方法测定结果与 方法测定结果的相对误差分别为 和 。说明该方法对保健品中 和 的分离分析准确可靠。色谱第 卷表 儿童保健品中 和 的分析（）（）（）（）（）（）图 儿童保健品及 加标样品的电泳图 ：；：；：；动 静态结合表面改性微芯片 改性微芯片的性能表征 根据 节表面改性方法，通过 吸附、羧基活化、功能化在 通道表面构建 静态涂层。通过 表征确定静态涂层是否成功涂覆在 微芯片表面，并考察了改性微芯片的亲水性和抗吸附性能。涂层表征为确定 静态涂层改性 微芯片表面的元素组成与表面化学特性，进行 表征，如图，、和 特征峰分别出现在 、和 处。根据其化学结构，峰被拟合为 个成分，如图，和 处主要成分分别来自碳碳单键（）和碳氮单键（）中的碳。峰被拟合为 个成分，如图，和 处主要成分分别来自氨基（）和碳氮单键（）中的氮。如图，峰被拟合为 个成分，在 处主要成分来自碳氧双键（）中的氧，。除了 微芯片上有的 键外，其余化学键均来自 涂层，证明正电荷涂层成功涂覆在 芯片上。亲水性和抗吸附性能表征 如图，正电荷涂层改性后，表面亲水性提高，水在 表面上接触角从 降到 。如图，除了 板上接触角减小，正电荷涂层改性后 微通道中空气水界面轮廓从直线变为曲线，也证明了其亲水性增强。为研究正电荷涂层改性 微芯片通道表面抗吸附能力，以 硼砂缓冲液作为，将 标记 和 混合物充满正电荷涂层改性 微通道，荧光强度与通道内目标物吸附量成正比，如图，未改性 通道由于对 和 有较强吸附，通道照片呈现强荧光。如图，正电荷涂层可有效避免通道对 和 非特异性吸附，改性 通道内外荧光强度相同。电泳分离条件考察 动态涂层改性剂浓度影响 为提高 和 的分离度，使用不带电荷的 与带负电荷的 混合体系作为动态涂层，考察了 与 质量分数对 和 的峰展宽（）的平方（）与 的影响。以含有不同质量分数 与 的 硼砂缓冲液作为，将 标记 和 标记 混合物进样并检测。的质量分数为 ，的质量分数为 ，硼砂浓度固定为 。如图，的 随着 与 的质量分数增加而降低，如图，的 随着 质量分数增加先降低后增加，在 处取得最小值。当 质量分数固定为 时，的 随 质量分数增加无明显变化。如图 与，当 的质量分数固定为 时，与 的 随 质量分数增加先减小后增大，在 处取得最小值。当 的质量分数固定为 第 期刘惠珍，等：表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分图 静态涂层改性 表面（）光谱图和（）、（）、（）峰拟合图，（）正电荷涂层 板上接触角和（）微通道中空气水界面轮廓，静电涂层（）涂覆前和（）涂覆后 通道表面对 和 的吸附 （）（），（）（），（）（），（）（）时，的 随着 的质量分数增加而增加，而 的 随 含量增加先增加后降低，在 处取得最小值。在 和 混合体系处有最小的。为得到最优分离度，将 以及 混合体系用于后续实验。样品移动速度以含有 与 混合体系的 硼砂缓冲液作为，将 标记 和 标记 分别进样到仅动态涂层、仅静态涂层以及动 静态涂层结合的分离通道中，采用 检测。如图，在涂覆有各种表面涂层的分离通道中，与 的 均随分离电压线性增加。在同一分离电压下，仅正电荷静态涂层通道中 的 最大，仅动态涂层 通道中 的 最小，具有动 静态涂层结合的通道中 的 居中。如图，的 受各种通道表面涂层模式的影响与 趋势类似。在相同条件下，的 比 的大，表明改性微芯片对 和 进行 分离分析有可能性。柱效 静态涂层与动态涂层对柱效的影响会显著影响 分离性能。用 和 的 与 的关系表征 性能。对具有不同表面涂层 通道中 的影响如图，在所有分离电压下，随 增大，的 值先降低后增加，仅动态涂层中 的 值最大，而动 静态涂层中 值最小。如图，的 受各种通道表面涂层模式的影响与 类似。动态涂层与静态涂层均对 柱效提高有影响，动 静态涂层结合改性通道的 微芯片有最佳柱效。分离度将 中 标记 和 标记 混合物引入具有不同涂层模式的 微通道中，以 为分离电压，考察不同涂层模式对 和 分离度的影响。如图，仅动态涂层的芯片中 和 的流速较慢但峰展宽较大，有一定的分离效果。在仅静态涂层的芯片中 和 的流速较快，有一定的分离现象。在相同条件下，动 静态涂层结合芯片加快了 和 的移动速度，减小了峰展宽，实现了 和 的完全分离，有最好的分离性色谱第 卷图 与 的质量分数对（）与（）的影响，与 的质量分数对（）与（）的影响（）（）（），（）（）（）图 对（）和（）的影响及 对（）和（）的影响（）（）（），（）（）（），；，；能。将动 静态涂层结合改性微芯片用于后续分析，将 和 混合物进样，研究分离距离与电场强度对 和 分离度的影响。以含有 （质量分数）以及 （质量分数）的 硼 砂 缓 冲 液 作 为，将 标记 和 标记 混合物进样，分离电压设置为 ，在不同分离距离处检测。随着分离距离增加，和 的 先增加后降低，在 处取得 最大值（如图）。研究了电场强度对 的影响。如图，和 在 分离电压下获得了最大 值 。将 分离距离与 分离电压用于后续分析，在此优化条件下，每次分离只需 即可完成。第 期刘惠珍，等：表面改性微芯片电泳分离分析保健品中的功效成分图 （）涂层类型对 和 分离的影响和（）不同分离距离、（）不同分离电压下测得的 和 的分离度 （），（）（）：；表 运动饮料中 和 的分析（）（）（）（）（）（）分析 和 的方法学考察 在 分离电压下，以含有 （质量分数）和 （质 量 分 数）的 硼砂缓冲液作为，将 标记 和 进样，建立 和 分析方法。结果表明，在 （对应样品中含量为 ）范围内，标记 的峰面积线性增加，线性方程为 ，为 ；的线性方程在 范围内为 ，为 ；在 （对应样品中含量 ）范围为 ，为 。和 的 分别为 和 ，测得含量的 均小于 （）。将具有动 静态涂层结合改性通道的 方法用于运动饮料中 和 的分析。加标前后运动饮料电泳图如图。和 测得含量和回收率列于表 中。在运动饮料中，检测到（）和（），和 的回收率分别为 和，（）。作为参考，通过 方法分析运动饮料，在 范围内，的线性方程为 ，为 ；的线性方程在 图 运动饮料及 加标样品的电泳图 ：（）（）；：；：；范围内为 ，为 。表 中，方法与 方法测定结果的相对误差分别为 和 。表明该方法在保健品天冬色谱第 卷氨酸和牛磺酸分离分析中准确可靠。结论 本文建立了表面改性微芯片电泳分离检测保健品中功效成分的方法，采用负电荷涂层的 通道实现了 和 的分离，为 ，正电荷涂层的 通道实现了 与 的分离，为。将该方法用于保健品中氨基酸的测定，回收率为 ，。分析结果与 方法测定结果一致，该方法具有良好的应用前景，适用于儿童保健品中 和 以及运动饮料中 和 的检测。参考文献：，（）：，（）：，（）：韩俊萍，赵蕾，王庆国，等 生物化学与生物物理进展，（）：，（）：钟洁，赵书林，分析测试学报，（）：，（）：曲树璋，王伟 石油化工，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：，：，（，），（）：，（）：，（）：，（）：万蓝婷，李暄妍，程建峰，等 植物生理学报，（）：，（）：，：，（）：闻静，李薇，杨涓 轻工科技，（）：，（）：周欣蕊，王婷，林楠，等 食品安全质量检测学报，（）：，（）：王丙然，任德财，李星，等 食品与发酵工业，（）：，：，（）：，（）：，（）：黄丽丹，邢亚东，王玲玲，等 药物分析杂志，（）：，：，（）：，：，（）：