异常白细胞检查.doc

ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书
文件编号：ABCD-3-LJ-43
版本/修订号：A/0
主题内容
异常白细胞检查
生效日期：20060808
第 4 页 共5 页

异常白细胞检查（显微镜检查法）

1. 实验原理
用瑞氏染色法，对制备好的血涂片进行染色，然后在显微镜下进行形态检查。
2. 标本采集：
2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。
2.2 标本要求：
2.2.1 抗凝剂采用EDTA K2抗凝。
2.2.2 用手指末梢血作白细胞检验时，如手指有冻疮，则主张采用耳垂血。
3. 标本储存：取材后应立即推制成血涂片，并尽快送检。
4. 标本运输：保持干燥，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染，凝固标本不能作测定。
6. 实验材料：
瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。
7. 实验仪器：
7.1 仪器名称：OLYMPUS 显微镜
7.2 仪器厂家：OLYMPUS
7.3 仪器型号：OLYMPUS CH30
8. 操作步骤
8.1 采血后推制厚薄适宜的的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。
8.2 瑞氏染色：将制好的干燥血涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A液3-5滴使其迅速盖满血膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，轻轻摇动玻片或用洗耳球吹气使A、B染液充分混匀，染色1-2分钟（气温低或涂片较厚时可适当延长染色时间），用自来水冲去染液，待干。
8.3 高倍镜（必要时油镜）观察白细胞形态。
8. 结果判断与分析
9.1 核象变化。
(1) 核左移：说明外周血中幼稚或杆状核粒细胞增多，见于急性白血病，急性化脓性细菌感染，急性中毒，急性溶血。正常妊娠、缺氧及低血压也可出现细胞核左移现象。
(2) 核右移：说明中性粒细胞核分叶过多，见于巨幼细胞性贫血，恶性贫血，化疗及炎症恢复期，遗传性中性粒细胞分叶过多，尿毒症等。巨多核中性粒细胞：成熟中性细胞胞体增大，核分叶过多，常为5-9叶，甚至12-15叶。各叶大小差别很大，常见于巨幼细胞性贫血。此外，在疾病进行期突然出现核右移，表示预后不良。
(3) 分叶过少：乳酸缺乏症，假性pelger-huet异常等。
9.2 其他核异常
环形或面包圈型核：见于慢粒，慢性粒细胞白血病，骨髓异常增生综合征等。中性粒细胞形态变化
9.3 中性粒细胞的毒性变化：
1） 细胞大小不均：为骨髓内幼稚粒细胞发生不规则的分裂增殖所致。
2） 中毒颗粒：比正常中性颗粒粗大，大小不等，分布不均匀，染色较深，呈黑色或紫黑色。有时颗粒很粗大，与嗜碱粒细胞易混淆；有时小而稀少，散杂在正常中性颗粒之中。
含中毒颗粒的中性粒细胞应与嗜碱粒细胞区别，其要点：嗜碱粒细胞核较少分叶、染色较浅、颗粒较大、大小不均、着色更深、细胞边缘处常分布较多，可分布于核上，胞浆中常见小空泡。在血片染色偏碱或染色时间过长时，易将中性颗粒误认为中毒颗粒。但只要注意全片各种细胞的染色情况，则不难区别。
含中毒颗粒细胞在中性细胞中所占比值称为毒性指数。毒性指数愈大，提示中毒变性结果。
3） 空泡：可为单个，但常为多个。大小不等，亦可在核中出现。被认为是细胞脂肪变性的结果。
4） Dohle体：是中性粒细胞胞浆内因毒性变而保留的嗜碱性区域。呈圆形、梨形或云雾状。界限不清，染成灰蓝色，直径为1-2μm，是胞质局部不成熟，即核与胞质发育不平衡的表现。Dohle小体亦可见于单核细胞中，其意义相同。
5） 退行性变：常见者有胞体肿大、结构模糊、边缘不清晰、核固缩、核肿胀和核溶解（染色质模糊、疏松）等等。如胞质破裂后消失，只剩胞膜，则成裸核或蓝状细胞，退行性变亦可见于衰老细胞，在正常情况下为数极少。
这些毒性变化可单独出现，亦可同时出现。观察中性粒细胞的毒性的变化，对估计疾病的预后有一定帮助。
9.4 其它异常白细胞：
1） Pelger-Huet畸形：表现为成熟中性粒细胞核分叶能力减弱。常为杆状和分两叶（其间难成细丝）。呈肾形或哑铃形。染色质聚集成小块或条索网状，其间有空折间隙。为常染色体显性遗传异常，一般无临床症状。但也可继发于某些严重感染、白血病、骨髓增生异常综合征、肿瘤转移和某些药物（如水仙胺、磺基二甲基异恶唑）治疗后。
2） Chediak-Higashi畸形：在Chediak-Higashi综合征患者骨髓和血液各期粒细胞中，含数个至数十个直径2-5μm的包涵体，即异常巨大的紫蓝或紫红色颗粒。电镜观察和细胞化学显示，巨大颗粒为异常溶酶体。患者容易感染，常伴白化病。为常染色体显性遗传，此异常颗粒也偶见于单核细胞、淋巴细胞中。
3） Alder-Reilly畸形：其特点是在中性粒细胞中含巨大深染的嗜天青颗粒，染深紫色。此异常颗粒与中毒颗粒的区别是颗粒较大，不伴有白细胞数增高、核象左移和空泡等其它毒性变化。患者常伴有脂肪软骨营养不良或的遗传性粘多糖代谢障碍。类似颗粒亦可见于其它白细胞中。
4） May-Hegglin畸形：患者粒细胞终身含有淡蓝色包涵体。实验证明这种包涵体与前述常见于严重感染、中毒等所见Dohle体相同，但常较大而圆。除中性粒细胞外，其他粒细胞甚至巨核细胞内亦可见到。
9.5 淋巴细胞形态学变化
（1） 异型淋巴细胞：在传染性单核增多症、病毒性肺肝炎、流行性出血热等病毒感染或过敏原刺激下，可使淋巴细胞增生，并出现某些形态学变化，称为异型淋巴细胞。Downey将其按形态特征分为三型：
I型（空泡型）：最多见。胞体比正常淋巴细胞稍大，多为圆形、椭圆形或不规则形。核圆形、肾形或分叶状、常偏位。染色质粗糙，呈粗网状或小块状，排列不规则。胞质丰富，染深蓝色，含空泡或呈泡沫状。
Ⅱ型（幼稚型）：胞体较大，核圆形或卵圆形。染色质细致呈网状排列，可见1-2个发生母细胞化的结果。
Ⅲ型（不规则型）：胞体较大，外形常不规则，可有多数伪足。核形状及结构与I型相同或不同，染色质较粗糙致密。胞质量丰富，染色淡蓝或灰蓝色，有透明感，边缘处着色较深蓝色。可有少数空泡。
（2） 受放射线损伤后淋巴细胞形态变化：通过放射生物学的研究以及对射线损伤病人观察，证实淋巴细胞是白细胞中对电离辐射最敏感的细胞。人体遭受较小剂量的电离辐射之后，虽未出现明显临床症状，但血中淋巴细胞的数量却已显著减少。若经较大剂量照射后，淋巴细胞迅速减少，剂量越大，减少得越严重以致衰竭，与此同时受损伤的淋巴细胞还出现形态学改变，如核固缩、核破坏、双核的淋巴细胞以及含有卫星核的淋巴细胞。后者是指胞质中主核之旁出现小核也称微核，是射线损伤后较为特殊的所见。
（3） 淋巴细胞性白血病时形态学变化：在急、慢性淋巴细胞白血病时，不但出现各阶段的原幼细胞，且处于各分阶段的白血病的细胞都有特殊的形态变化。
10. 质量控制：每30份样本，抽两份样本进行室内工作人员比对分析，要求差异在10％以内。
11. 变异的潜在来源
11.1 取材不当。
11.2 涂片过厚或过薄，影响形态观察。
12. 操作注意事项：
12.1 取材后，必须立即涂片。
12.1 推好的血膜片应在空气中摇动，使其尽快干燥，以免细胞变形。天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。
12.3 根据血膜厚薄，细胞量多少及室内温度等把握好染色时间，使染色效果满意。
12.4 镜检时循序检查，必要时用油镜确认；并注意整体情况。
13. 参考文献：
中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）5-7页。