高效液相色谱法及其应用.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,高效液相色谱法及其应用,(High Performance Liquid Chromatography,，,HPLC),王小云,2021-04-22,高效液相色谱简介,高效液相色谱特点,高效液相色谱分类,高效液相色谱应用,高效液相色谱发展,高效液相色谱,简介,20,世纪初：,俄国植物学家茨维特提出,经典液相色谱法,。经典液相色谱法包括柱色谱、薄层色谱、纸色谱。,20,世纪,60,年代末：,随着,色谱理论,的发展、,高效细微固定相,的开发、,高压恒流泵,及,高灵敏度检测器,的应用，高效液相色谱法得到了突破性的发展。,高效液相色谱的特点,高压：流动相流经色谱柱时，受阻力较大，为了迅速通过色谱柱，必须对流动相加高压。,高效：分离效能高，柱效达,210,3,-510,4,块,/m,。,高灵敏度：最低可检测,10,-9,g,（,ppb,），痕量分析时可达,10,-12,g(ppt),。,应用范围广：约,80%,的有机物，特别是高沸点、大分子、热稳定性差的有机化合物。,分析速度快：通常分析一个样品在,15-30,分钟，甚至有的样品在,5,分钟内即可完成，一般小于,1,小时。,（,三高一广一快,）,高效液相色谱法局限性,成本高,易污染环境,缺少通用型检测器,不能代替气相色谱，无法完成柱效高达,10,万块理论塔板数的分析,不能代替中低压柱色谱法,高效液相色谱分类,吸附色谱法,分配色谱法,离子交换色谱法,体积排阻色谱法,按分离原理分类：,正相色谱,反相色谱,高效液相分析方法的建立,收集样品信息，明确分析目的和要求,选择样品制备方法,确定分析模式，选择相应色谱柱,确定检测方法和条件,优化分离条件,方法验证,定量分析,样品前处理技术,高速离心,过滤、超滤,选择性沉淀,萃取,索氏抽提,衍生化反应,样品浓缩,旋蒸等,新技术,加速溶剂萃取（,ASE,）,高效液相色谱的应用,食品工业中的应用,在制药工业中的应用,在环境监测中的应用,在生物工程和生物化学中的应用,在精细化工分析中的应用,营养成份分析,氨基酸、碳水化合物、维生素等,食品添加剂,防腐剂、香料、保鲜剂等,有害成分,兽药残留、农药残留等,无机成份,各种无机盐,食品工业中的应用,在制药工业中的应用,药物鉴别,如：青霉素中有效成份可用反相色谱法分离,杂质检测（原料、中间体、副产物等）,含量测定,手性分离,药物代谢动力学研究、临床血药浓度等检测中应用非常广泛,在环境监测中的应用,多环芳烃的检测（有机燃料未完全燃烧产生）,多氯联苯（,PCB,）的检测,农药残留的检测（有机磷、氯、除草剂等）,酚类和胺类的检测（化工、燃料、制药等产生的工业废水）,在生物工程和生物化学中的应用,氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究,核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究,生物胺的分析研究,变性高效液相色谱检测法（,DHPLC,）是近年来发展起来的一项相对较新的技术，主要应用于基因突变分析中，能够满足大规模的基因变异检测筛查。,在精细化工分析中的应用,醇、醛和酮、醚的分离分析,酸和酯的分离分析,表面活性剂的分析,聚合物的分析研究,高效液相色谱的发展,超高效液相色谱（,UPLC,）,联用技术（,LC-MS,，,LC-MS-MS),超高效液相色谱（,UPLC,）,waters,从上世纪,60,年代首推第一台液相色谱，到,70,年代液相色谱商业化，至,2004,年,UPLC,系统推出，一直是行业领导者。,UPLC,的特点,超强分离能力（,1.7um,颗粒）,超高速度（压力可达,105MPa,）,超高灵敏度,简便方便的方法转换,快速自动进样（采用针内针）,最佳的质谱接入口,UPLC,的特点及应用,UPLC,的速度、灵敏度及分离度分别是,HPLC,的,9,倍、,3,倍及,1.7,倍,UPLC,主要应用于代谢组织学分析、环境监测及其他一些生化领域，包括天然产物的分析。特别是中药研究领域的发展是一个极大的促进。,UPLC,是,HPLC,的未来,高效液相,-,质谱联用（,LC-MS,）,色谱的优势在于分离，质谱能够提供物质的分子量及结构信息。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与,MS,具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来。,LC-MS,特点,分析范围广,分离能力强。通过,MS,的特征离子质量色谱图能分别给出各组分的色谱图来进行定性定量；,定性分析结果可靠。可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息；,MS,具备高灵敏度。检测能力提高一个数量级以上；,分析时间快。,LC-MS,使用的液相色谱柱为窄径柱，缩短了分析时间，提高了分离效果；,自动化程度高，,LC-MS,具有高度的自动化,。,液质联用应用领域,生化方面的分析研究,天然产物分析研究,药物和保健食品的分析研究,环境检测的分析研究,化工行业分析研究,谢谢,