蚕豆病PPT素材课件1.ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2010级本科分子生物学实验设计,案例：,患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。,体格检查：体温38，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞 1.9810,12,/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5mol/L，结合胆红素13.7mol/L，未结合胆红素71.8mol/L，尿蛋白（+），潜血(+)，尿胆红素()，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。,阅读下列案例，根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。,一、根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初步判断患儿是何种疾病,蚕豆病,恶心、呕吐、面色苍白,皮肤及巩膜黄染,红细胞 1.9810,12,/L,血红蛋白53g/L,血清总胆红素85.5mol/L,尿蛋白（+）,尿胆红素(),尿胆素原(+),尿液镜下未见红细胞,黄疸,红细胞膜不完整，已破裂,红细胞含量少,含量明显增加,血红蛋白量减少,排尿呈酱油样色,游离胆红素增加,溶血性黄疸,蚕豆病,肠肝循环增多,蚕豆病简介,蚕豆病是一种6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6-PD）缺乏所导致的疾病，表现为在遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺陷的情况下，食用新鲜蚕豆后突然发生的急性血管内溶血。,易发人群,多见于儿童，男性患者约占90%以上。,临床表现,早期有恶寒、微热、头昏、倦怠无力、食欲缺乏、腹痛，继之出现黄疸、贫血、血红蛋白尿，尿呈酱油色，此后体温升高，倦怠乏力加重，可持续3日左右。与溶血性贫血出现的同时，出现呕吐、腹泻和腹痛加剧，肝脏肿大，肝功能异常，约50%患者脾大。严重病例可见昏迷、惊厥和急性肾衰竭，若急救不及时常于12日内死亡。,二、设计实验进一步明确诊断,红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定（紫外法）,（一）实验器材和试剂,1.实验器材,恒温水循环紫外分光光度计，可见分光光度计，离心机。,2.试剂,（1）0.5mol/L Tris-HCl MgCl,2,缓冲溶液（pH8.0）：称取Tris12.1g,MgCl,2,6H,2,O 4.06g,加入160mL蒸馏水溶解，用HCl调pH至8.0，然后加入蒸馏水至200mL。,（2）2 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP,)：称取NADP,21.3mg，溶于10mL蒸馏水中。4 可保存20天左右。,（3）6mmol/L葡萄糖,6,磷酸二钠,(G6PNa,2,),：称取21.5mg,G6PNa,2,2H,2,O,，溶于10mL蒸馏水中。4 可保存20天左右。,（4）溶血剂：取巯基乙醇0.1mL，10%EDTA 2.0mL，6mmol/L NADP,0.4mL，加蒸馏水至总体积200mL。,（5）血红蛋白氧化剂（Drabkin试剂）：称取K,3,Fe(CN),6,0.2g，KCN 0.052g，NaHCO,3,1.0g，加蒸馏水至1000mL，置棕色瓶内避光保存，可保存20天。,（6）0.9%NaCl，ACD抗凝剂。,（二）实验操作流程,1、洗涤红细胞 取静脉血2.0mL，放入含0.4mLACD抗凝剂的试管中，混匀。吸取0.2mL抗凝血放入试管中，加入4mL预冷的生理盐水，轻轻摇匀，2500r/min离心5min,倾去上清，重复三次。,2、溶血液的制备 向红细胞沉淀中加入溶血剂2.0mL，震荡1min，4放置10min以上。,3、NADPH的测定 取石英比色杯两只，标为“测定”及“空白”，按下表操作：,试剂,体积,蒸馏水（uL）,0.5mol/L Tris-HCl MgCl,2,缓冲溶液（uL）,6mmol/L G6P-Na,2,(uL),2mmol/L NADP,+,(uL),2040,300,300,300,混匀后放入带恒温水循环（25）的紫外分光 光度计中，预热10min,然后在“测定”中加入溶血液60uL,“空白”中加入溶血剂60uL，混匀,以“空白”调“0”,1min后开始测340nm吸光度（A340），每2min纪录吸光度一次，至10min止，比较每2minA值的变化情况，若相近则表明酶促反应平稳。以10minA值的变化（A340）计算NADPH的产量。,4.溶血液中血红蛋白含量的测定 取试管一支，按下表操作：,试剂,体积,Drabkin(mL),溶血液(mL),0.3,3.0,混匀，室温放置15min，以Drabkin试剂调零，读取540nm的吸光度（A540）。,（三）注意事项,1.洗涤红细胞时禁止剧烈震荡，避免溶血。,2.测定NADPH时读取吸光度的时间要准确。,（四）结果分析,1.NADPH产量的计算 NADPH在340nm处，其每微摩尔的吸光系数（）为6.220，故10min内NADPH的产量计算公式为：,NADPH产量（mol）=,2.血红蛋白含量的计算 血红蛋白氧化为高铁血红蛋白以后，在540nm处，其毫摩尔吸光细数（）为44，故溶血液中血红蛋白的含量计算公式为：,血红蛋白含量（mmol）=,3.G6PD比活性（U/g Hb）的计算,G6PD比活性单位（U/g Hb）,=,=,【参考范围】正常值：大于2.8U/gHb,三、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果,红细胞膜的破坏,胆色素代谢异常,红细胞膜的破坏,葡萄糖磷酸戊糖途径,葡萄糖,6 磷酸葡萄糖,5 磷酸核糖,NADPH+H,+,磷酸化,5 磷酸核糖,磷酸,戊糖途径,NADPH+H,+,5 磷酸核糖,NADPH+H,+,5 磷酸核糖,NADPH+H,+,5 磷酸核糖,NADPH+H,+,NADPH维持GSH(谷胱甘肽）的正常含量和还原状态,G6PD(6 磷酸葡萄糖脱氢酶）起关键作用,还原型,谷胱甘肽,体内重要的抗氧化剂,保护红细胞膜蛋白的完整性,红细胞膜的破坏,单核吞噬细胞识别吞噬,血红蛋白,珠蛋白,氧化破坏,红细胞,氧化破坏,红细胞,单核吞噬细胞识别吞噬,氧化破坏,红细胞,血红蛋白,单核吞噬细胞识别吞噬,氧化破坏,红细胞,珠蛋白,血红蛋白,单核吞噬细胞识别吞噬,氧化破坏,红细胞,血红素,珠蛋白,血红蛋白,单核吞噬细胞识别吞噬,氧化破坏,红细胞,单核吞噬细胞识别吞噬,血红蛋白,珠蛋白,氧化破坏,红细胞,氧化破坏,红细胞,单核吞噬细胞识别吞噬,红细胞,血红蛋白,单核吞噬细胞识别吞噬,红细胞,珠蛋白,血红蛋白,单核吞噬细胞识别吞噬,红细胞,血红素,珠蛋白,血红蛋白,单核吞噬细胞识别吞噬,红细胞,胆色素代谢异常,血红素,运送到肝,与血清蛋白结合,游离胆红素,结合胆红素,排出体外,进入肠道,胆素原,胆素,肠肝循环,胆红素,扩散进入组织 组织黄染 黄疸,排尿呈酱油样色,溶血性贫血 面色苍白,说明,1720为一个版本,2231为另一个版本,参考一下看哪个你比较容易理解然后就用哪个,实验室检查,检查项目,检查值,正常值,红细胞,1.9810,12,/L,4.05.010,12,/L,血红蛋白,53g/L,120160g/L,血清总胆红素,85.5mol/L,3.417.1mol/L,结合胆红素,13.7mol/L,总量的20%,未结合胆红素,71.8mol/L,总量的80%,G6PD,磷酸戊糖途径,NADPH,磷酸戊糖,维持谷胱甘肽的还原性,核酸生物合成原料,红细胞,90%95%糖酵解通路 2.3二磷酸甘油酸旁路,5%10%磷酸戊糖途径,NADPH,唯一,谷胱甘肽阻止氧化血红蛋白，从而保护红细胞膜的完整性，如若缺乏，此时的红细胞易于破裂,Hb 具有携氧能力,MHb 高铁血红蛋白 Fe,3+,不具有携氧能力,NADPH高铁血红蛋白还原酶,GSH,MHb,Hb,胆红素,铁卟啉类化合物的降解产物,80%以上来自衰老红细胞破坏所释放的血红蛋白的分解,自由通过生物膜产生毒性作用,血红蛋白,珠蛋白,AA再利用,血红素,胆红素,胆红素分类,项目,游离胆红素,结合胆红素,别名,间接胆红素,血胆红素,直接胆红素,肝胆红素,与葡萄糖醛酸结合,未结合,结合,与重氮试剂反应,慢或间接反应,迅速直接反应,水中溶解度,小,大,经肾随尿排出,不能,能,通透细胞膜对脑的毒性作用,大,无,G6PD缺乏,NADPH严重缺乏,谷胱甘肽难以保持还原状态,NADPH高铁血红蛋白还原酶活性低,红细胞膜完整性破坏,红细胞裂解,血红蛋白大量溢出,胆红素生成量增加,Hb大量氧化成MHb，Hb含量减少,黄疸,皮肤，巩膜及黏膜等组织黄染,恶心，呕吐,全身无力,面色苍白,溶血性黄疸,由于红细胞的大量破坏，在单核吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过了肝细胞的摄取，转化和排泄胆红素的能力，造成血液中未结合胆红素浓度显著增高所致。,高未结合胆红素血症,由于肝对胆红素的摄取，转化，排泄增多，过多的胆红素进入胆道系统，肠肝循环增多，使得 尿中的尿素原和尿胆素含量增多，粪胆素与粪胆原也增加。,溶血性黄疸,大量红细胞破裂,血中未结合胆红素增加,肠肝循环增多,大量血红蛋白溢出,尿蛋白（+）,潜血(+),尿胆红素(),尿胆素原(+),尿液镜下未见红细胞,恶心、呕吐、面色苍白,排尿呈酱油样色,粪胆素原,项目,检查值,正常值,体温,38,37.5,脉搏,150次/分,80次/分,呼吸,40次/分,20次/分,血压,80/60mmHg,120/90mmHg,红细胞大量破裂,四、要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答）,基因结构分析法,我组讨论认为：要想探讨该病发生的分子基础，需要对目的基因进行,基因结构分析,，即,DNA序列检测,DNA序列测定方法,直接法,间接法,：对于未知片段，或片段过长，用几种方法（RFLP；PCR-RFLP；SSCP）来粗略的估计待分析基因的一级结构是否与对照基因相同,双脱氧末端终止法（Sanger法）,化学裂解法（Maxam-Gilbert法）,DNA的自动化测序,DNA序列测定方法,DNA,链的方向是,5,3,交替的,磷酸,基团,和戊糖,构成了,DNA,的骨架,(backbone),。,（构成DNA,）,脱氧核糖(deoxyribose),双脱氧末端终止法（Sanger法）,Sanger法是根据,双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),在DNA合成过程中不能形成,3,5-磷酸二酯键,而导致链延伸终止的原理，利用四种,ddNTP代替部分脱氧核苷酸（dNTP）作为底物进行DNA合成，从而获得在不同部位终止反应的大小不同的DNA链，结合高分辨率变性聚丙烯凝胶电泳分离，就可以对DNA序列进行分析。,TAATCTGCAGGC,3,5,加入引物；,32,P-dATP,dGTP,dTTP；,DNA聚合酶,3,TAATCTGCAGGC,5,5,3,primer,ddGTP,ddATP,ddTTP,ddCTP,ATTAG,ATTAGACG,A,ATTA,ATTAGA,AT,ATT,ATTAGACGT,ATTAGAC,ATTAGACGTC,ATTAGACGTCC,ATTAGACGTCCG,ATTAG,ATTAGACG,A,ATTA,ATTAGA,ATT,ATTAGACGT,ATTAGACGTC,ATTAGACGTCC,AT,ATTAGAC,聚丙烯酰胺凝胶电泳,G,A,T,C,GCCTGCAGATTA,3,5,ATTAGACGTCCG,五、患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答）,患者体型瘦小与该病症,有,关,蚕豆病是因为体内缺乏G6PD，,G6PD主要影响体内的磷酸戊糖途径 该途径主要生成两种重要的物质即,5-磷酸核糖,和,NADPH,5-磷酸核糖影响：,1：核酸的合成,2：体内己糖和戊糖的代谢,3：37碳原子糖类物质的相互转化,NADPH影响：,1：,体内以NADPH作为供氢体合成多种活性物质如胆固醇 脂肪酸 和一些非必需氨基酸,2：,NADPH可作为羟化酶的辅酶，参与体内生物转化作用,3：,NADPH参与吞噬细胞的杀菌作用,4：维持GSH的正常水平 GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化 使蛋白质或酶处于活性状态,磷酸戊糖途径中,生成多余的核糖转变为6-磷酸果糖和3-磷酸甘油醛进入糖酵解途径，G6PD缺乏使得糖代谢受到影响。脂酸可以合成甘油三酯，其主要功能是储存和氧化能量，机体难以合成甘油三酯则消耗原有储备的甘油三酯，使得机体消瘦。同时体内的一些生物活性物质功能发生障碍，如胆固醇不能直接氧化但能转化为胆汁酸，类固醇激素 维生素D3参与物质代谢调节，胆汁酸具有促进脂类消化和吸收的作用。维生素D3主要参与体内血钙和血磷的调节。生物转化作用可以对体内大部分非营养物质尽心代谢转化，或使有毒物质的毒性减低或消除，增强这些非营养物质的水溶性和极性，从而易于从胆汁或尿液中排除。GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化 使蛋白质或酶处于活性状态，蛋白质一方面可以作为营养物质提供能量一方面又发挥着其它重要的生物功能，而酶使得生物体内的化学反应有条不紊的进行。,综上所述：蚕豆病使得该男孩体内发生糖，蛋白质，脂类物质的代谢障碍，一些重要的生物活动受到影响，加之因疾病带来的一些身体上和精神上的折磨，这些因素使得他的身体比同龄孩子削瘦。,1,、字体安装与设置,如果您对PPT模板中的字体风格不满意，可进行批量替换，一次性更改各页面字体。,在,“,开始”,选,项卡,中,，点击“,替,换”按,钮右,侧箭,头,，,选,择“,替,换,字,体,”。（如下,图）,在图“替换”下拉列表中选择要更改字体。（如下图）,在“替换为”下拉列表中选择替换字体。,点击“替换”按钮，完成。,42,2,、替换模板中的图片,模板中的图片展示页面，您可以根据需要替换这些图片，下面介绍两种替换方法。,方法一：更改图片,选中模版中的图,片,（,有些图片与其他,对象,进行了组合，,选,择,时,一定要选中图,片 本身，而不是组合）。,单击鼠标右键，选择“更改图片”，选择要替换的图片。（如下图）,注意：,为防止替换图片发生变形，请使用与原图长宽比例相同的图片。,42,赠送精美图标,