补阳还五汤联合脊髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓外伤性截瘫后功能恢复的影响.pdf

102江西中医药大学学报 2023 年 10 月第 35 卷第 5 期JOURNAL OF JIANGXI UNIVERSITY OF CM 2023 Vol.35 No.5实验研究补阳还五汤联合脊髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓外伤性截瘫后功能恢复的影响 郭德华1 吴成林1 许洋1 张国福2（1.江西中医药大学 南昌 330004；2.江西中医药大学附属医院 南昌 330006)摘要目的：探讨补阳还五汤联合脊髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠脊髓外伤性截瘫后功能恢复的影响，并初步探讨其可能的作用机制。方法：将大鼠分为 5 组，即假手术组、模型组、补阳还五汤组、BMSCs 组、补阳还五汤+BMSCs 组，各10 只。采用改良 Tarlov 评分和斜板试验测定大鼠脊髓功能，HE 染色观察脊髓损伤的情况，免疫组织化学染色检测脊髓组织中 Brdu 阳性细胞数；蛋白质印迹检测脊髓组织中 gp130、IL-6 蛋白表达。结果：在 1、3、5 周时，各治疗组 Tarlov 评分和倾斜平面临界角度明显高于模型组，gp130、IL-6 蛋白表达明显低于模型组（P0.05）；补阳还五汤+BMSCs 组 Tarlov 评分和倾斜平面临界角度明显高于 BMSCs 组，gp130、IL-6 蛋白表达明显低于 BMSCs 组（P0.05）；移植 5 周后，补阳还五汤+BMSCs 组 Brdu 标记阳性细胞数明显多于 BMSCs 组（P0.05）；HE 染色见假手术组脊髓组织结构清晰，未见明显细胞结构破坏；模型组灰质破坏溶解，胶质疤痕形成，少见完整的细胞结构，较难区分灰、白质；各治疗组脊髓组织结构较清晰，灰质中坏死区较小，白质有存留，胶质疤痕少。结论：补阳还五汤联合 BMSCs 移植能促进大鼠脊髓外伤性截瘫后运动功能的恢复，并通过促进 BMSCs 迁移，抑制 gp130、IL-6 蛋白表达起作用。关键词补阳还五汤；脊髓损伤；脊髓间充质干细胞；细胞迁移中图分类号：R285.5 文献标志码：AEffect of Buyang Huanwu Decoction Combined with Bone Marrow Stromal Cells Ttransplantation on Functional Recovery after Spinal Cord Rraumatic Paraplegia in RatsGUO De-hua1,WU Cheng-lin1,XU Yang1,ZHANG Guo-fu21.Jiangxi University of Chinese Medicine,Nanchang 330004,China;2.The Affiliated Hospital of Jiangxi University of Chinese Medicine,Nanchang 330006,China.Abstract Objective:To investigate the effect of Buyang Huanwu Decoction Combined with BMSCs transplantation on the functional recovery of spinal cord traumatic paraplegia in Sprague-Dawley rats,and to explore its possible mechanism.Methods:The rats were divided into 5 groups,namely the sham group,model group,Buyang Huanwu decoction group,BMSCs transplantation group,Buyang Huanwu decoction+BMSCs group,10 rats in each group.Modified Tarlov score and inclined plane test were used to determine the spinal cord function of rats.HE staining was used to observe the spinal cord injury.Detect the number of Brdu-positive cells in spinal cord tissue(immunohistochemical staining).Western blotting was used to detect gp130,IL-6 protein expression.Results:At 1w,3w,and 5w,there were statistically significant differences in Tarlov score,critical angle of inclined plane and related protein expression between the sham operation group,each treatment group and the blank control group(P0.05).At 1w,3w,and 5w,the Tarlov score and the critical angle of the inclined plane in the Buyang Huanwu decoction+BMSCs group were significantly higher than those in the MSCs group(P0.05),and the expression of gp130,IL-6 protein was significantly lower than that in the BMSCs group(P0.05).There were no Brdu-labeled positive cells in the spinal cord tissue of the sham-operated group.Brdu-positive BMSCs with brownish-yellow cells in the other BMSCs transplantation groups survived in the spinal cord injury area and surrounding tissues.BMSCs migrated and survived more 1 week after transplantation,and 5 weeks after transplantation.The number of Brub marker positive cells in Buyang Huanwu Decoction+BMSCs group was significantly higher than that in BMSCs group(P0.05).HE staining showed clear spinal cord tissue structure and no obvious cell structure damage in the sham operation group.In the model group,gray matter was destroyed and dissolved,glial scar was formed,and the complete cell structure was rarely seen,and it was difficult to distinguish gray matter from white matter.In the treatment group,the spinal cord tissue structure was clear,the necrotic area in gray matter was small,the white matter remained,and the glial scar was less.Conclusion:Buyanghuwu Decoction combined with BMSCs transplantation can promote the recovery of motor function after spinal cord injury paraplegia in rats,and play a role by promoting BMSCs migration and inhibiting gp130 and IL-6 protein expression.Key words Buyang Huanwu Decoction;Spinal Cord Injury;Bone Marrow Stromal Cells Transplantation;Cell Migration103刘豫等：覆盆子枸杞提取工艺优化及压片糖果制备实验研究随着现代社会交通、工业的不断发展，脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）的发病率正呈现逐年增高趋势1，但目前临床上治疗 SCI 主要依靠药物和外科手术，虽可在一定程度上缓解病情，但解决不了病患的根本问题2。SCI 不仅严重影响患者的生活质量，甚至影响社会的安定3。因此,寻找到有利于脊髓损伤后神经功能恢复的治疗方法是当今基础和临床研究的热点之一。研究发现，脊髓间充质干细胞（bonemarrowstromalcells，BMSCs）、神经干细胞、脐血干细胞等干细胞移植有望成为治疗 SCI 的最佳方法4。与其他移植细胞比较，BMSCs 具有显著的营养神经、调控节免疫系统平衡、抗凋亡、抗氧化应激、跨胚层分化的能力，促进神经网络构建，改善后肢运动功能，且体内移植不良反应和免疫排斥少、不存在伦理道德问题等优点，这些特性使 BMSCs 成为治疗 SCI 的理想候选细胞，被广泛用于神经系统损伤修复领域中5-6。目前治疗脊髓损伤是以积极预防治疗继发性损伤为主，但该损伤是由多因子和多因素相互作用所致，单一治疗某一方面的药物都不能从整体上修复脊髓损伤。研究发现，中药复方是通过多方面进行治疗，并且能为神经生长提供适应的环境，还因中药毒副作用少、价格经济等更易被患者接受7。研究表明，补阳还五汤（BuyangHuanwudecoction，BYHWD）的有效成分比较丰富，在治疗脊髓损伤方面发挥了中医整体观念的优势，能通过多路径、多层次和多靶位的作用机制，在多方面抑制继发性脊髓损伤的病理因素，改善 SCI 后的局部微环境，促进 SCI 的修复和重建7-8。本研究前期研究发现，单纯 BMSCs 移植和补阳还五汤对脊髓损伤均具有治疗作用9-11。但补阳还五汤能否促进 BMSCs 在体内迁移，中药联合 BMSCs 移植对脊髓损伤能否产生协同增效的作用，值得深入研究。近年来研究发现，用鼠的 MSCs 用 Brud 标记注射到胎鼠侧室，处死小鼠后发现 MSCs 能迁移到海马嗅球等神经元分布丰富的部位；多功能细胞因子 IL-6 在脑组织中表达较少，在神经疾病脑组织中高表达，可见IL-6 可介导神经系统疾病的神经元修复；且 gp130是 IL-6 等多种细胞因子受体中的共用信号传导链12-14。gp130 本身不具有酪氨酸激酶活性，其可通过介导 IL-6 进行信号转导；但具体作用于脊髓损伤的机制尚未明确。因此，在前期研究基础上，本研究采用改良 Allen 重物打击法制备脊髓损伤模型，通过改良 Tarlov 评分和斜板试验，评价补阳还五汤联合 BMSCs 移植对脊髓损伤外伤性截瘫后功能恢复的影响；通过 HE 染色、免疫组化及蛋白免疫印迹法，观察中药联用对脊髓损伤局部损伤情况、局部损伤组织中 Brdu 含量及 gp130、IL-6 蛋白表达的影响，探讨其可能的作用机理。1 材料1.1 动物50只810周龄SPF级大鼠和5只6周龄大鼠，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物许可证编号：SCXK（湘）2019-0004，雌雄不限，200250g，饲养于洁净环境中，温度（232），湿度 40%70%，自由饮食摄水，12h 光暗交替，所有动物适应性喂养 7d 后开始正式试验。1.2 药物补阳还五汤组成：生黄芪 60g（批号 210606），当归 10g（批号 210419），地龙 10g（批号 210226），赤芍 10g（批号 020410），川芎 10g（批号 210722），桃仁 10g（批号 210427），红花 10g（批号 210526），以上饮片均购于江西中医药大学附属医院中药房，均为江西江中中药饮片有限公司产品，经江西中医药大学附属医院中药库李晓芳副主任中药师鉴定，均符合 2015 年版中国药典质量标准。1.3 仪器与试剂戊巴比妥钠麻醉剂（美国 Sigma 公司）；尿嘧啶脱氧核苷（Brdu）、鼠抗人尿嘧啶脱氧核苷（Brdu）单克隆抗体、DAB 显色试剂盒（北京中山生物技术有限公司）；山羊抗兔-actin 多克隆抗体、gp130 抗体、IL-6 抗体（武汉博士德生物工程有限公司）；免疫组化试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）；荧光显微镜、倒置显微镜（日本 OLYMPUS公司）。2 方法2.1 脊髓损伤模型的建立将 50 只大鼠分为假手术组 10 只和造模组 40只，采用改良 Allen 重物打击法制备脊髓损伤模型，可保持硬膜完整性，造成大鼠脊髓重度损伤，即完全性截瘫。各组大鼠均以 2戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（50mg/kg），俯卧位固定大鼠，在背部以 T10为中心，纵向切一 3cm 的小口，充分暴露 T10 段脊髓。在 T10 脊髓的表面放置一个直径为 3mm 的圆形薄片，用重 10g 的砝码自由坠落 12.5cm 打击该垫片，造成 T10 段脊髓的冲击伤，逐层缝合大鼠皮肤。当撞击脊髓时大鼠出现身体抖动，打击局部脊髓表面迅速呈瘀紫色，术后双下肢出现完全瘫痪时视为脊髓损伤模型制备成功。手术结束后，将所有大鼠均置于 25的动物房内统一饲养，将垫有郭德华等：补阳还五汤联合脊髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓外伤性截瘫后功能恢复的影响104江西中医药大学学报 2023 年 10 月第 35 卷第 5 期实验研究锯末的平板置于大鼠笼中，以防肢体或骶部压疮及吸收排尿，并及时更换。手术结束后人工排尿，2次/d，各大鼠均连续排尿 2 周，直至大鼠恢复自主排尿时停止。假手术组大鼠只暴露 T10 段脊髓并不打击脊髓，其余步骤和其他各组大鼠相同。2.2 补阳还五汤的制备根据中国药典制定剂量范围内的临床常用剂量称取中药材，补阳还五汤药物组成：川芎10g，芍药 10g，生黄芪 60g，地龙 10g，桃仁 10g，当归 10g，红花 6g。按照中药煎药规定，将药汤浓缩至 200mL 备用，相当于临床等效生药量药物浓度为 0.6g/mL11。2.3 BMSCs 制备与鉴定以 2戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔注射麻醉 6 周龄大鼠并安乐死处死，取大鼠双侧下肢胫骨骨髓，将单核细胞单独分离，接种单核细胞于培养瓶中，培养箱培养细胞 3d，将未贴壁的细胞弃掉，流式细胞仪检测细胞表面标记物。将证实的 BMSCs 细胞扩增培养，取第三代 BMSCs 细胞用于体内移植。移植前一天，将 Brdu 标记加入到 20mol/L 细胞中，洗涤细胞后，在细胞中加入 0.25%胰蛋白酶消化，1000r/min 离心 4min，将 PBS 溶液加入到细胞中重悬，调整细胞浓度为1106/mL 备用。2.4 分组和给药将 50 只大鼠随机分为 5 组，即假手术组（灌胃等量生理盐水）、空白对照组（灌胃等量生理盐水）、补阳还五汤组分上、下午 2 次灌胃 25g/kg 补阳还五汤11（课题组前期实验得出的最佳实验浓度）、BMSCs 移植组（尾静脉注射 1mL1106BMSCs）、补阳还五汤+BMSCs 组（灌胃 25g/kg 补阳还五汤，同时尾静脉注射 1mL1106BMSCs），每组 10 只。2.5 行为学评估采用双盲、双人独立观察记录，在术后 1、3、5 周进行行为学评分观察，采用改良 Tarlov 评分和斜板试验。2.5.1 改良 Tarlov 评分 0 和 1 分：没有自主性的运动，只限于非反射性的髋、膝关节运动；2 分：髋、膝、踝 3 个关节的肢体运动；3 分：行走时可主动支撑体重和不协调步态或偶尔出现协调步态；4 分：活动时呈现前后肢协调步态，行动时有趾间关节的肢体运动；5 分：正常步态。2.5.2 斜板试验 取一块长方形木板，将 2mm 的橡胶垫垫于木板上，将大鼠头向前，身体纵轴与斜面板纵轴垂直放置，将木板与水平面之间的角度逐渐增大，直至大鼠在原定位置上刚好可以维持5s，将这一个角度称为倾斜平面临界角度。2.6 HE 染色将各组大鼠分别于造模干预后1、3、5周，以2戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（50mg/kg）并开胸，大鼠心脏用 4%多聚甲醛灌注固定，将损伤区的脊髓组织切取 23mm，用中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋后制成 3m 的切片，将切片经二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，然后浸入焦油紫染液中。将染色缸放入 56烤箱中 1h，蒸馏水冲洗 2min，用分化液分化约 2min，直至背景接近于无色为止。依次脱水、透明、中性树胶封片。取各组大鼠 5 周后的样本切片置于显微镜下观察脊髓损伤的情况。2.7 免疫组化分析取 BMSCs 组、补阳还五汤+BMSCs 组，分别于造模干预后 1、3、5 周，以 2戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（50mg/kg）大鼠并开胸，大鼠心脏用 4%多聚甲醛灌注固定，将损伤区的脊髓组织切取 1.5cm，用中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋后制成 3m 的切片，用免疫组化法检测Brdu阳性标记的细胞数量。取各 BMSCs 移植组大鼠 5 周后的样本，观察 Brdu的阳性细胞数量。用“ImageJ”软件进行免疫组化半定量分析。2.8 Western blot 法检测处死各组大鼠，取 20mg 脊髓组织，在冰上研磨组织呈粉末状，将裂解液加入到组织中，制成组织悬液后离心，对蛋白样本总浓度进行测定。转移蛋白样品至 PVDF 膜，加入 5%脱脂奶粉，封闭样品 2h。蛋白样品中分别加入一抗 gp130、IL-6 和内参-actin 蛋白，孵育后洗涤蛋白样品，将二抗（12000）加入到蛋白样品中，室温孵育 1h。用ECL 液显色，ImageJ 软件观察条带灰度值并计算蛋白表达。2.9 统计学方法采用 SPSS20.0 软件进行统计学分析。结果采用均数 标准差（xs）表示。2 组定量数值采用独立样本 t 检验，多组定量数值采用单因素方差分析。以 P0.05 为差异有统计学意义。3 结果3.1 BMSCs 的培养和鉴定显微镜下可见，BMSCs 原代细胞多呈星形和多角形，细胞集落样生长。后继续生长，直至细胞融合率为 80%，姬姆萨染色显示，第 3 代 BMSCs细胞呈短梭形，以旋涡状或放射状排列分布。见图 1。105刘豫等：覆盆子枸杞提取工艺优化及压片糖果制备实验研究注：A.大鼠原代BMSCs形态；B.大鼠第3代BMSCs姬姆萨染色。图1 大鼠原代BMSCs形态（40）3.2 流式细胞仪鉴定 BMSCs 表面标志物取生长良好的第 3 代 BMSCs 进行表面标志物鉴定，结果显示，BMSCs 表达间充质干细胞标志CD90、CD105，不表达造血干细胞标志 CD14，具有 BMSCs 特性。见图 2。注：A.CD14表达水平；B.CD105表达水平；C.CD14表达水平。图2 流式细胞仪鉴定BMSCs表面标志物3.3 行为学结果3.3.1 改良 Tarlov 评分结果 与模型组比较，各治疗组大鼠的改良 Tarlov 评分均明显上升；与 BMSCs组比较，补阳还五汤+BMSCs 组大鼠的 Tarlov 评分显著上升，差异具有统计学意义。见表 1。表1 各组大鼠损伤后改良Tarlov评分结果（xs，n=10）组别1 周3 周5 周假手术组4.200.42*4.500.53*4.830.41*模型组0.100.050.130.070.170.09补阳还五汤组1.500.12*1.890.15*2.630.17*BMSCs 组1.600.13*2.560.18*3.250.21*补阳还五汤+BMSCs 组1.960.17*#3.390.21*#4.130.25*#注：与模型组比较，*P0.05；与BMSCs组比较，#P0.05。3.3.2斜板试验结果通过斜板实验观察脊髓损伤后神经功能恢复情况，与模型组比较，各治疗组大鼠的斜板实验倾斜角度均明显增大；与 BMSCs组相比，补阳还五汤+BMSCs 组大鼠的斜板实验角度显著增大（P0.05）。见表 2。表2 各组大鼠损伤后斜板试验结果（xs，n=10）组别1 周3 周5 周假手术组62.602.27*62.752.32*64.673.89*模型组21.902.2320.503.0720.004.05补阳还五汤组29.553.93*32.224.18*32.064.34*BMSCs 组30.702.15*34.223.26*33.815.41*补阳还五汤+BMSCs 组 32.252.17*#37.173.82*#41.505.76*#注：与模型组比较，*P0.05；与BMSCs组比较，#P0.05。3.4 免疫组化观察 BMSCs 的迁移情况假手术组、模型组、补阳还五汤组中脊髓组织无 Brdu 标记的阳性细胞；各 BMSCs 移植组脊髓组织中均可见棕黄色 Brdu 标记的阳性细胞；在BMSCs 移植 1 周后迁移细胞数量大量成活，移植35 周时脊髓组织中仍有较多 BMSCs 存活。移植5 周时，补阳还五汤+BMSCs 组 Brdu 标记阳性细胞数为（8.640.92）个，明显多于 BMSCs 组的（9.870.25）个（P0.05）。见图 3。ABCDE注：A.假手术组；B.模型组；C.补阳还五汤组；D.BMSCs组；E.补阳还五汤+BMSCs组。图3 免疫组化检测各组大鼠中脊髓组织Brdu水平（倒置显微镜，200）3.5 HE 染色观察脊髓损伤的情况在 5 周时，假手术组见脊髓组织结构清晰，未见明显细胞结构的破坏；模型组灰质破坏溶解，胶质疤痕形成，少见完整的细胞结构，灰、白质较难区分；各治疗组脊髓组织结构较清晰，灰质中坏死区较小，白质有存留，胶质疤痕少。见图 4。ABCDE注：A.假手术组；B.模型组；C.补阳还五汤组；D.BMSCs组；E.补阳还五汤+BMSCs组。图4 HE染色观察脊髓损伤的情况（100）3.6 补阳还五汤联合 BMSCs 移植对脊髓损伤大鼠影响的相关机制研究与模型组比较，各治疗组中的 gp130、IL-6 的蛋白表达水平均显著下调；与 BMSCs 组比较，补阳还五汤+BMSCs 组中的 gp130、IL-6 的蛋白表达水平均显著下调（P0.05）。见表 4、图 5。郭德华等：补阳还五汤联合脊髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓外伤性截瘫后功能恢复的影响106江西中医药大学学报 2023 年 10 月第 35 卷第 5 期实验研究图5 各组大鼠脊髓损伤组织中gp130、IL-6蛋白表达4 讨论据世卫组织的数据统计，全球每年由于跌倒、暴力或交通事故等外伤导致的脊髓损伤患者大约有 2550 万人15。目前，临床常以手术治疗脊髓损伤，但治疗效果并不是十分理想，且治疗费用相对较高，导致患者及家庭难以接受。对于治疗脊髓损伤尚未形成系统的方案，因此亟需研究一种更安全、可靠和有效的治疗方法。中药复方体现了中医药治病辨证施治和整体观念的特点，其作用效果往往是多途径、多靶点的，配伍有效的中药复方在治疗脊髓损伤时，可能会提供更有利于脊髓恢复的环境。中医药治疗脊髓损伤已有数千年的历史，其中补阳还五汤是促进血液循环、通经活络的代表方，用于修复脊髓损伤神经功能有着数百年的历史16-17。本实验结果显示，补阳还五汤与模型组比较，改良 Tarlov 评分、斜板试验倾斜角度均明显上升，HE 染色见脊髓组织结构较清晰灰质中坏死区较小，白质有存留，胶质疤痕少，且抑制了 gp130 及 IL-6的蛋白表达，充分说明其促进了大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复，其机制可能是改善损伤后组织的炎症反应、抑制细胞的死亡并保护神经细胞。相关研究证实，对脊髓损伤患者给予补阳还五汤治疗后发现，患者的临床疗效显著升高18-19。通过前期实验研究发现，补阳还五汤可以促进移植的 BMSCs 迁移，进而有效地恢复脊髓功能，但目前关于其迁移的具体机制尚不清楚11。BMSCs 能对脊髓损伤区的微环境进行改变，可刺激神经生长，促进神经再生，并可通过对神经元和胶质细胞进行分化，进而补充细胞结构，起到促进血管新生和抑制炎症等生物学作用20。有研究显示，BMSCs 经静脉注射通过自行特异性迁移而植入受损部位21。其中体外培育扩增的 BMSCs移植后，能够抑制脊髓损伤局部的炎症反应，减轻脊髓神经细胞的凋亡，显著改善脊髓损伤后局部的病理表现和下肢功能22。本研究通过建立 SCI大鼠模型，结果发现 BMSCs 移植能增加 SCI 大鼠Tralov 评分和倾斜平面临界角度，且中药联用比单纯 BMSCs 移植使用效果更显著。聂颖等23研究证实，补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对保护 SCI 气虚血瘀证脊髓局部轴突、改善前肢运动功能可产生协同增效作用。中枢神经系统中细胞需经过迁移才能到达损伤部分，进而发挥生物学作用，如不能正常进行迁移，就可导致神经发育的异常，出现多种疾病。目前神经细胞可通过胶质细胞的纤维辐射状迁移和不依赖胶质细胞而作正切方向迁移，迁移方向是由导向因子所引导。有研究发现，用鼠的 MSCs用 Brud 标记注射到胎鼠侧室，处死小鼠后发现MSCs 能迁移到海马嗅球等神经元分布丰富的部位12。本研究将 Brud 标记的 BMSCs 通过尾静脉注射到 SCI 大鼠体内，结果表明带 Brud 标记移植的 BMSCs 在术后 1 周可通过血液循环在宿主体内迁移至脊髓损伤部位，5 周后补阳还五汤可明显促进移植的 BMSCs 迁移成活，说明补阳还五汤促进BMSCs 向脊髓损伤局部迁移。但本实验中假手术组未能检测到 BMSCs，说明移植的 BMSCs 不向正常的脊髓组织迁移，而各细胞移植组中就能检测到BMSCs，说明 BMSCs 能向损伤后的脊髓组织迁移，猜测这与创伤部位的炎症或修复等因素相关。目前 BMSCs 体外迁移的导向因子有多种，其中gp130 及 IL-6 均介导脊髓损伤的发生发展。相关研究表明，IL-6 作为炎症细胞分化的重要影响因子，而gp130 作为 IL-6 等多种细胞因子的信号传导链，均参与了神经系统的调节过程及急性 SCI 的继发性损害24-25。本研究结果显示，补阳还五汤和 BMSCs 移植均能抑制 SCI 大鼠脊髓组织中 gp130、IL-6 蛋白表表4 Western blot检测各组大鼠脊髓损伤组织中gp130、IL-6蛋白表达（xs，n=10）观察指标时间/周模型组假手术组补阳还五汤组BMSCs 组补阳还五汤+BMSCs 组IL-615.060.130.530.02*3.160.14*2.010.08*1.670.08*#34.360.130.460.06*1.070.281.500.15*0.600.07*#51.820.061.050.07*0.760.08*1.250.08*1.060.06*#gp13012.120.060.980.04*1.180.07*1.300.05*1.000.03*#32.090.020.050.00*1.180.06*1.100.13*0.850.05*#52.090.090.450.11*0.310.09*1.360.07*0.900.06*#注：与模型组比较，*P0.05；与BMSCs组比较，#P0.05。107刘豫等：覆盆子枸杞提取工艺优化及压片糖果制备实验研究达，且中药联合细胞移植更显著地抑制 gp130、IL-6蛋白表达。因此，我们猜测补阳还五汤促进 BMSCs迁移，进而恢复大鼠后肢功能，改善脊髓损伤是通过减低脊髓损伤局部的 gp130 及 IL-6 实现的。综上所述，补阳还五汤促进 BMSCs 迁移，补阳还五汤联合 BMSCs 移植提高了脊髓损伤大鼠的改良Tarlov 评分、斜板实验倾斜角度，同时抑制了 IL-6及 gp130 蛋白的表达，改善脊髓损伤，促进了大鼠脊髓外伤性截瘫后运动功能的恢复，明确了补阳还五汤联合 BMSCs 移植具有治疗脊髓损伤的作用，并证明其作用机制可能与促进 BMSCs 迁移、抑制脊髓损伤局部 IL-6 及 gp130 的表达相关。然而补阳还五汤是通过调控哪些导向因子及信号通路促进 BMSCs迁移和抑制 IL-6、gp130 表达，进而促进大鼠脊髓外伤性截瘫后运动功能的恢复，达到修复脊髓损伤的作用，其详细作用机制有待进一步深入研究。参考文献1NaghaviM,GlobalBurdenofDiseaseSelf-HarmCollaborators.Global,regional,andnationalburdenofsuicidemortality1990to2016:systematicanalysisfortheGlobalBurdenofDiseaseStudy2016J.BMJ,2019,364:l94.2田婷,李晓光.脊髓损伤再生修复中的问题与挑战 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