细菌芽孢染色及酵母菌的观察.doc

实验五 细菌芽孢染色及酵母菌的观察
姓名：贾晓霖
学号：201000140032
班级：生科10.1
同组人：李江湲 程子修 洪钧烨
一、 实验目的
1、 学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。
2、 观察酵母菌形态及出芽方式，区分酵母死活细胞。
3、 学习酵母子体孢子的观察方法。
二、 原理
1、芽孢染色法
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或处理，则菌体和芽孢易于区分。
2、酵母菌的繁殖方式
酵母菌是一类单细胞的真核微生物的通俗名称。其繁殖方式包括无性繁殖和有性繁殖。无性繁殖方式包括芽殖和裂殖。
芽殖是酵母菌最普遍的繁殖方式。其过程是：成熟的母细胞在其形成芽体的部位长出芽细胞，芽细胞脱离母体，成为新的个体细胞。如果不脱离母细胞，又长出新芽，子细胞就和母细胞连接在一起，形成藕节状或竹节状的细胞串，称为假菌丝或真菌丝。少数酵母以裂殖方式进行繁殖，当母细胞长到一定大小时，细胞核开始分裂，之后，在细胞中间产生一隔膜，将细胞一分为二。还有些酵母菌可形成一些无性孢子如节孢子、掷孢子、厚垣孢子等。有性繁殖则是通过形成子囊和子囊孢子。

三、 实验器材
1、 菌种
芽孢：枯草芽孢杆菌 梭状芽胞杆菌
酵母：酿酒酵母（产孢培养基 7天）
2、 溶液和试剂
5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇。0.01%美蓝水溶液。、
3、 仪器和其他用品
酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，试管架，木夹，滴管和蒸馏水等。
四、 实验内容
1、 芽孢染色（说明一下我做的是梭状芽孢杆菌）
1、 涂片 在洁净的载玻片中央滴两小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从枯草芽孢杆菌、梭状芽胞杆菌菌种斜面分别挑取少量菌体加到两滴蒸馏水中，与水滴充分混匀。
2、 干燥 加热干燥，使菌固定。
3、 染色 木夹夹住载玻片，滴加孔雀绿覆盖菌种，待染液冒出蒸气时，开始计时5min，
过程中需不断补加染液，以免载玻片温度过高致使芽孢变形。
4、 水洗 冷却后用缓水流从载玻片反面冲洗，直到水流无色。
5、 复染 滴加番红染液，复染2min。
6、 干燥、镜检 自然干燥后，放置于油镜下镜检。
附：实验照片

2、 酵母菌
（1） 美蓝浸片
准备两块玻片，分别在玻片中央滴加一滴美蓝染液，接种少量酵母菌，分别放置3min和30min镜检（10×40）。
附：实验照片

左：3min 右：30min
（2） 子体观察
1、涂片 在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从酵母菌菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀。
2、干燥 自然干燥，使其固定。
3、染色 滴加孔雀绿染液，覆盖1~1.5min。
4、水洗 用缓水流从载玻片反面冲洗，直到水流无色。
5、脱色 用95%乙醇冲洗并覆盖菌体30s。
6、水洗 用缓水流从载玻片反面冲洗。
7、复染 滴加番红染液，覆盖30s~1min。
8、干燥、镜检 水洗过后，自然干燥，放置于油镜下镜检。
附：实验照片

五、 思考题
1、 为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察细菌芽胞？
答：因为与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，而加热时芽孢的通透性高，此时染液可以进入从而使芽孢着色，而简单染色法不能使芽孢染色，所以不能看到。
2、 若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。
答：如果只看到芽孢，可能是：
（1） 菌种培养的环境太恶劣了，营养体几乎都变成芽孢了。
（2） 可能是给芽孢染色用水洗时没洗干净，细胞还是孔雀绿的色彩。
（3） 复染出现问题了，可能是复染时间不够，没染上，或是水洗得太厉害，把染液都冲走了。
3、 用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗？
答：如果直接放到水下可能会导致玻片迅速受冷破裂。