NEC患儿T抗原暴露导致红细胞多凝集现象的鉴定及输血策略.pdf

J Clin Transfus Lab Med,August.2023,Vol 25,No.4494 论著NEC患儿T抗原暴露导致红细胞多凝集现象的鉴定及输血策略张静 王素玲 乔芳 赵佳 胡光磊 王振雷河北省血液中心，河北石家庄 050000DOI：10.3969/j.issn.1671-2587.2023.04.012作者简介：张静，主要从事流行病与卫生统计学方面研究，（E-mail）。通信作者：王素玲，博士，主要从事生物化学与分子生物学方面研究，（E-mail）。【摘要】目的 探讨坏死性小肠结肠炎（necrotising enterocolitis，NEC）患儿发生T抗原暴露导致红细胞多凝集现象的鉴定方法，为其制定输血策略，为指导临床为患儿科学、合理用血提供参考依据。方法 在本中心进行疑难交叉配血的2例NEC患儿，采用试管法对其进行ABO血型和Rh血型鉴定、直接抗人球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）、抗体筛查试验及交叉配血试验，采用3例ABO同型献血者血浆，3例AB型献血者血浆，3例同型脐血血浆等方法发现其出现红细胞多凝集现象，并用花生凝集素、MN血型抗体鉴定试剂及凝聚胺方法鉴定其多凝集现象。结果 两例患儿红细胞抗体筛查实验阴性；DAT实验阴性；交叉配血实验主侧阴性；次侧盐水法阳性，抗人球蛋白实验阳性；患儿红细胞与献血者同型血浆、AB型血浆呈阳性反应，与同型脐血血浆呈阴性反应；与花生凝集素均呈阳性反应患儿MN血型抗原均为阴性，患儿红细胞加入凝聚胺试剂不出现预期凝集现象。结论 NEC患儿出现多凝集红细胞现象表现为DAT实验阴性，但是次侧交叉配血不相合现象。此时应采用多种方法鉴定其红细胞发生多凝集现象，准确识别患儿红细胞多凝集现象，选择合适的血液产品，避免延误患儿输血治疗。【关键词】坏死性小肠结肠炎 T抗原暴露 多凝集红细胞 交叉配血 输血策略 【中图分类号】R457 【文献标识码】A 【文章编号】1671-2587（2023）04-0494-04Children with NEC:Report of Red Blood Cell Polyagglutination by T-antigen Exposure ZHANG Jing,WANG Suling,QIAO Fang,et al.Hebei Blood Center,Shijiazhuang,Hebei 050017【Abstract】Objective To discuss the identification method of polyagglutination of red blood cells by T-antigen exposure in children with necrotizing enterocolitis(NEC)to formulate transfusion strategies to provide reference for clinical guidance and scientific and rational use of blood in children.Methods ABO and Rh blood group identification,direct antiglobulin test(DAT),antibody screening test and cross-matching test were performed in 2 NEC children with difficult cross-matching difficulty in our center.Erythrocyte polyagglutination was found in 3 ABO donor plasma,3 AB donor plasma and 3 umbilical cord blood plasma.The polyagglutination was further identified by Peanut Agglutinin,MN Blood Group Reagent and Polybrene test.Results The erythrocyte antibody screening test,DAT and major cross-matching test were negative in 2 cases.The minor cross-matching test using saline and anti-human globulin test were positive.The red blood cells of the children were positive with plasma from donor of the same blood type and AB plasma,and negative with cord blood plasma of the same blood type.MN blood group antigen was negative in children who were positive with Peanut Agglutinin.No expected agglutination was observed with Polybrene test.Conclusion NEC children with polyagglutinated erythrocytes showed negative DAT tests and positive minor cross-matching tests.At this time,multiple methods should be used to identify the phenomenon of erythrocyte polyagglutination to choose appropriate blood products to avoid delayed transfusion.【Key words】Necrotizing enterocolitis T antigen exposure Red blood cell polyagglutination Cross-matching Transfusion strategyT抗原一般是以隐匿的形式存在人体细胞表面。它的暴露多数是由微生物感染产生唾液酸水解酶，水解催化了细胞膜上的唾液酸，暴露出T抗原，这个过程也被称为T活化，因成人血浆中含有天然产生的IgM型抗-T抗体1，因此红细胞发生T抗原暴露后几乎与所有相容的成人血浆发生凝集，即所谓多凝集现象，红细胞发生多凝集现象会导致ABO血型正反定型不符或交叉配血次侧不合现象2。NEC患儿常发生T抗原暴露情况3，本研究针对近期发现的两例NEC患儿T抗原暴露导致的红细胞多凝集现象，探讨其红细胞多凝集现象的特点和实验室鉴定方法，并为后期此类患儿输血提供参考依据。材料与方法1 临床资料 病例1：患儿，男，1月龄，早产儿，低体重临床输血与检验2023年8月第25卷第4期495儿，先天性肠扭转不良，无输血史，无器官移植史，术前备血，因次侧不相合送至本实验室检测。病例2：患儿，女，3月龄，肠造瘘术后，无输血史，无器官移植史，因备血次侧不相合送至本实验室检测。2 试剂与仪器抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）（上海血液生物，批号：20230102）；抗-D IgM+IgG血型定型试剂（美国IMMUCOR公司，批号：517234）、人ABO血型反定型用红细胞试剂盒（美国IMMUCOR公司，批号：115469C）：人不规则抗体检测用3%红细胞试剂盒（荷兰Sanquin公司，批号分别为8000459486），16系谱细胞（荷兰Sanquin公司，批号：8000459488）；抗人球蛋白试剂（抗C3d）检测试剂盒、抗人球蛋白试剂（抗IgG）检测试剂盒、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）检测试剂盒（上海血液生物，批号分别为：20225201、20225101、20225001），抗M、抗N血浆单克隆抗体（上海血液生物，批号分别为：20230328、20220620），凝聚胺试剂（珠海贝索生物技术有限公司：A220701）以 上 试 剂 均 在 有 效 期 内 使 用。细 胞 洗 涤 离 心 机（德祥，ROTOLAVIT）；医用低速离心机（日本久保田，KA-2200）；医用离心机（珠海贝索，BABO2005-2）。3 方法3.1 输血前血浆学检测3.1.1 ABO血型及Rh血型鉴定按照输血技术操作规程（输血科部分）4试管法操作，将患者红细胞用生理盐水洗三遍，配置成2%5%的红细胞悬液，用单克隆抗-A、抗-B、抗-D及ABO标准红细胞进行红细胞正反定型及RhD血型定型。3.1.2 直接抗球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）按照输血技术操作规程（输血科部分）4试管法操作，采用试管法，取三支试管分别各加入1滴单特异性抗IgG抗体，4单特异性抗人C3d抗体，多特异性抗人球蛋白试剂-IgG+C3d，每支试管加入一滴经生理盐水洗涤3次后配制成的2%5%的患儿红细胞悬液；1 000g，离心15 s看结果。3.1.3 间接抗人球蛋白实验（indirect antiglobulin test，IAT）及交叉配血实验按照输血技术操作规程（输血科部分）4试管法操作对不规则抗体筛查、交叉配血实验均采用盐水试管法和Liss抗人蛋白法，每只试管加入2滴患儿血浆，再加入1滴相应筛查红细胞、自身红细胞、献血者ABO同型Rh阳性红细胞，混匀后1 000g，离心15 s看结果；直接离心阴性的在每管中分别加入2滴Liss液，至37水浴箱内孵育15 min，用生理盐水洗涤后，弃去上清液，各管分别加入1滴抗人球蛋白试剂，1 000g，离心15 s看结果。3.1.4 多凝集红细胞确认实验采用献血者抗血浆，脐血抗血浆，自制花生凝集素，抗-M，抗-N试剂，凝聚胺试剂与患儿红细胞反应。与献血者抗血浆、脐血浆反应步骤同3.1.3操作进行；2%5%患儿红细胞悬液分别与3份ABO同型血浆和3份AB型献血者血浆反应，均出现1+以上的凝集，而与3份ABO同型脐血血浆不发生凝集反应，提示为红细胞多凝集5-6；与花生凝集素反应，检测方法参照7取患儿红细胞悬液 2 滴加入花生凝集素试剂4滴，1 000g，离心60 s，观察结果，花生凝集素试验达3+4+强凝集示为红细胞T活化；抗-M，抗-N试剂按照1滴抗血浆加一滴患儿红细胞，1 000g，离心15 s看结果，均出现阴性反应提示T活化；患儿红细胞加入凝聚胺试剂不出现预期的凝集现象。以上实验均为患儿T抗原暴露导致的红细胞多凝集现象的确认实验。结 果1 血型鉴定结果案例1为A型RhD阳性，案例2为B型RhD阳性，见表1。2 DAT结果 两例患者抗IgG、抗C3d及抗-IgG+C3d均为阴性，见表2。3 IAT结果及交叉配血实验结果2例患者抗体筛查实验盐水试管法、Liss-IAT均为阴性，交叉配血实验主侧盐水试管法、Liss-IAT均表1 两例患者血型鉴定结果标本抗血清试剂红细胞-A-B-DAcBcOc自身细胞案例14+04+0W+00案例204+4+W+000 J Clin Transfus Lab Med,August.2023,Vol 25,No.4496表2 DAT实验结果标本抗-IgG抗-C3d抗-IgG+C3d案例1000案例2000表3 抗体筛查结果标本检测方法自身主侧次侧案例1盐水试管法00000W+Liss-IAT000001+案例2盐水试管法000001+Liss-IAT000001+表4 多凝集红细胞确认实验标本检测方法献血者同型抗血浆献血者同型抗血浆献血者同型抗血浆献血者AB型抗血浆献血者AB型抗血浆献血者AB型抗血浆同型脐血血浆同型脐血血浆同型脐血血浆案例1盐水试管法w+w+w+w+w+w+000Liss-IAT1+1+1+1+1+1+000案例2盐水试管法1+1+1+1+1+1+000Liss-IAT1+1+1+1+1+1+000表5 多凝集红细胞确认实验标本检测方法花生凝集素抗-M抗-N凝聚胺试剂案例1试管法3+000案例2试管法3+000为阴性，次侧盐水试管法、Liss-IAT均为阳性，凝集强度见表3。4 多凝集红细胞确认实验结果2例患者分别与3例献血者同型血浆、3例献血者AB型血浆反应，盐水试管法及Liss-IAT均呈阳性反应，与3例同型脐血血浆反应，盐水试管法及Liss-IAT均呈阴性反应，凝集强度见表4。2例患儿红细胞悬液分别与花生凝集素呈阳性反应，与抗-M、抗-N试剂均呈阴性反应，与凝聚胺试剂反应不出现预期凝集情况各反应强度见表5。5 血液选择两例患儿交叉配血结果显示均为主侧配血相合，次侧配血不相合，故均为患儿选择同型Rh阳性洗涤红细胞发血。但后续回访发现，一例患儿在手术中未输血，一例患儿分四次输注2 U洗涤红细胞后，Hb含量从输血前86 g/L逐渐上升到146 g/L输血效果良好。讨 论红细胞发生多凝集现象是指其容易被大多数正常成人血清凝集，与自身血清不发生凝集的现象。细菌感染后的酶催化或血液病、肿瘤患者基因突变导致隐藏在正常细胞膜下的结构抗原即隐蔽抗原的暴露，其与大多数成人体内存在的抗体发生凝集反应8，导致患者红细胞出现多凝集现象。患者红细胞多凝集现象可干扰输血前检测，若不及时辨识红细胞多凝集现象而导致输注不合适的血液制品也会使患者出现不同程度的溶血反应，故及时判别红细胞多凝集现象对于后续诊断及治疗非常必要。由T抗原暴露导致的红细胞多凝集现象常见于新生儿NEC患儿及肺炎链球菌感染患儿9-11，T抗原暴露发生的机理有两种，一种是由于微生物感染产生神经氨酸酶，去除红细胞膜上N-乙酰神经氨酸（唾液酸）残基，导致T抗原暴露；还有一种是由于疾病原因导致唾液酸转移酶活性下降，导致唾液酸合成受阻，导致T抗原暴露12。人体从出生到3个月大都缺乏抗-T抗体，由于微生物或其他环境刺激，抗-T抗体至2岁上升到成人水平，故成年人体内均含有IgM型的抗-T抗体，因此T抗原暴露红细胞与绝大部分相容性成人血浆均出现多凝集现象，却不与相容性新生儿血浆发生凝集5。T抗原暴露也称为T抗原活化，T活化的类型可以通过其暴露抗原与各种植物凝集素的反应性来区分。T、Th、Tk和Tx抗原结合花生凝集素，但只有T抗原也结合大豆凝集素，为便于鉴定，我们只用花生凝集素来鉴定T抗原活化13。T抗原是MN抗原的前体，若T抗原暴露，该患者MN临床输血与检验2023年8月第25卷第4期497抗原一过性消失14；T抗原暴露患者唾液酸消失导致加入凝聚胺试剂不出现预期凝集现象15；这些实验均为T抗原暴露导致多凝集现象的辅助实验。由于多凝集红细胞在血型鉴定和交叉配血中常引起正反不符和次侧凝集现象，本实验室两例患儿在血型鉴定过程中，因使用的是单克隆抗体试剂，故均未发现血型正反不符现象。但是在实验过程中我们发现该两例患儿DAT实验均为阴性，而次侧配血却发生交叉不合现象，此时我们结合两例患儿的病史，即新生儿NEC，在排除供受者血型不相符情况及供者血浆不规则抗体阳性情况外，因此高度怀疑是患儿出现了T抗原暴露导致次侧交叉配血不相合情况。此时辅助诊断用三例与患儿同型的献血者血浆和三例AB型血浆与患儿红细胞反应，均出现不同程度的凝集；再用三例同型的脐血浆与患儿红细胞反应，均未出现凝集；为进一步辅助鉴别其为T抗原暴露导致的多凝集现象，我们加做了患者MN抗原鉴定情况，本两例患儿MN抗原阴性；患儿红细胞加入凝聚胺试剂不出现非特异凝集，与花生凝集素呈现不同程度凝集等，这些实验结果均间接证明此两例患儿为NEC并且发生细菌感染导致T抗原暴露。本次输血为患儿提供的主侧配血相合的洗涤红细胞制品，目前有两种观点，一种认为，对于NEC患儿输血，应严格避免输注含有血浆的血液制品16；另一种观点认为，输注含血浆的血液制品后发生溶血的报道比较罕见，因为抗-T抗体为IgM抗体，属于冷抗体，与红细胞抗原的最佳反应温度低于室温，在37反应条件下，既不引起细胞凝集也不引起补体激活，故其不能成为血管内溶血的原因17，输注含抗-T抗体血浆制品后发生溶血可能跟非免疫因素有关，但是在我们日常工作中，若患儿发生了T抗原暴露，还是应谨慎输入含有血浆的血液制品，必要时输入洗涤红细胞或者洗涤血小板等，若必须输入含有血浆的血液制品，应充分评估患儿情况，选择抗-T抗体效价较低的血液制品，尽量避免潜在的溶血因素。另外在输血前检测中，若为NEC患儿，若其DAT阴性，而次侧交叉配血不相合，这种情况要高度怀疑T抗原暴露现象的存在，利用多凝集红细胞的确认实验辅助鉴别患儿红细胞发生多凝集情况，及时为患儿选择合适的血液制品，避免延误患儿输血治疗。利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突参 考 文 献 1 BORALESSA H,MODI N,COCKBURN H,et al.RBC T activation and hemolysis in a neonatal intensive care population:implications for transfusion practiceJ.Transfusion,2002,42(11):1428-1434.2 刘培燕,乔显森,韩斌,等.红细胞多凝集现象1例J.临床输血与检验,2017,19(1):91-92.3 WILLIAMS R A,BROWN E F,HURST D,et al.Transfusi on of infants with activation of erythrocyte T antigenJ.J Pediatr,1989,115(6):949-953.4 汪德清输血技术操作规程(输血科部分)M.北京:人民卫生出版社,2016:13-635 高昂,李萌,王晓卫,等.幼儿红细胞T抗原活化导致交叉配血不合分析J.临床血液学杂志,2022,35(8):602-604.6 朱碎永,朱燕英,林甲进.肠道疾病引起红细胞T活化的检查分析J.中国实验诊断学,2007,11(3):296-297.7 孔凡生,耿微.多凝集红细胞致患儿交叉配血次侧凝集的诊断特征分析J.中华诊断学电子杂志,2021,9(3):187-191.8 KATO T,ISHIMARU K,SEKIGUCHI S.Mistyping of ABO grouping by polyagglutinationJ.Nihon Rinsho Jpn J Clin Med,1997,55(9):2378-2384.9 EDER A F,MANNO C S.Does red-cell T activation matter?J.Br J Haematol,2001,114(1):25-30.10 OBEID D,BIRD G W,WINGHAM J.Prolonged erythrocyte T-polyagglutination in two children with bowel disordersJ.J Clin Pathol,1977,30(10):953-955.11 戎霞,罗广平,张伟东,等.多凝集红细胞1例J.中国输血杂志,2006,19(5):407-408.12 刘芸,陆敏,徐姿,等.多凝集红细胞的研究进展J.临床血液学杂志,2016,29(6):512-517.13 OSBORN D A,LUI K,PUSSELL P,et al.T and Tk antigen activation in necrotising enterocolitis:manifestations,severity of illness,and effectiveness of testingJ.Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed,1999,80(3):F192-F197.14 刘德龙,吴思梦,范诗晴,等.肺炎链球菌导致T多凝集 红 细 胞 的 确 认 及 血 浆 置 换 策 略J.中 国 输 血 杂志,2022,35(7):728-731.1 5 刁雪芹,郝萧,夏小叶,等.肠梗阻、脓毒血症、多器官衰竭伴红细胞T多凝集1例J.临床血液学杂志,2022,35(6):454-456.16 NOVAK R W,ABBOTT A E Jr,KLEIN R L.T-cryptantige n determination affects mortality in necrotizing enterocolitisJ.Surg Gynecol Obstet,1993,176(4):368-370.17 ENGELFRIET C P,REESINK H W.Blood transfusion in premature or young infants with polyagglutination and activation of the T antigenJ.Vox Sang,1999,76(2):128.（收稿日期：2023-06-21）（本文编辑：陈洋）