上海交大网络课程检验微生物讲义32.doc

第九章 球菌一、教学大纲要求1掌握常见化脓性球菌的种类。2掌握葡萄球菌的分类方法、微生物特性、微生物学检验，熟悉其致病因素及所致主要疾病。3掌握链球菌的分类方法、微生物特性、微生物学检验，熟悉其致病因素及所致主要疾病。掌握鉴别甲型链球菌和肺炎链球菌的主要试验。4.熟悉肠球菌的分类、微生物特性、微生物学检验，了解其所致主要疾病。5掌握奈瑟菌属的分类方法、微生物特性、微生物学检验，熟悉其致病因素及所致主要疾病。熟悉其致病因素及所致主要疾病。6.了解布兰汉菌属的微生物特性、微生物学检验及临床意义。二、教材内容精要（一）葡萄球菌属葡萄球菌属是一群革兰阳性球菌，广泛分布于自然界以及人的体表及与外界相通的腔道中，多为非致病菌，正常人体皮肤和鼻咽部也可携带致病菌株，是医院内交叉感染的重要来源。1分类葡萄球菌属分为32个种、15个亚种。传统的分型方法有：根据产生的色素不同分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色。按凝固酶产生与否分为凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌两大类。按噬菌体分型法可将金黄色葡萄球菌分为5群26型。其他还有分子生物学方法，如质粒图谱分析和染色体DNA的脉冲电泳分型法等。2细菌特性（1）形态染色 球形或略呈椭圆形，直径0.51.5m，平均0.8m.。葡萄球菌无鞭毛、无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜，排列成葡萄串状的革兰阳性球菌。（2）培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，多数菌株耐盐性强。在琼脂平板培养基可形成金黄色、白色、柠檬色等不透明、凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐的菌落。金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落周围有明显的透明溶血环（溶血）。（3）生化反应 葡萄球菌的生化活性强，能分解多种糖类、蛋白质和氨基酸，触酶阳性。致病菌株可分解甘露醇。（4）抗原结构葡萄球菌的表面抗原主要有两种： 葡萄球菌A蛋白（staphylococcal proteinA,SPA）存在于细胞壁上的一种表面蛋白，具有抗吞噬作用，可与人类IgG的Fc段非特异性结合而不影响Fab段，故常用含SPA的葡萄球菌作为载体，结合特异性抗体后，开展简易、快速的协同凝集试验（coagglutination）。 多糖抗原 具有型特异性的半抗原，存在于细胞壁，为核糖醇磷壁酸，检测机体磷壁酸抗体有助于对金黄色葡萄球菌感染的诊断。（5）抵抗力葡萄球菌是抵抗力最强的无芽胞菌。近年来由于抗生素的广泛应用，耐药菌株迅速增多，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant S. aureus，MRSA）已成为医院感染最常见的致病菌。3临床意义凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌产生的毒素及酶最多，故其毒力最强，是人类重要致病菌。其所致感染常以急性、化脓性为特征。常见的感染有疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎等全身性感染。金黄色葡萄球菌的致病性主要与各种侵袭性酶类，如血浆凝固酶、透明质酸酶、磷脂酶、触酶、耐热核酸酶和多种毒素，如溶血毒素、杀白细胞素等有关。3050金黄色葡萄球菌可产生肠毒素。噬菌体群金黄色葡萄球菌产生的表皮剥脱毒素可引起人类烫伤样皮肤综合征（staphylococcal scalded skin syndrome，SSSS），多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成年人。金黄色葡萄球菌产生的毒性休克综合征毒素-1（toxic shock syndrome toxiu 1，TSST-1），可引起机体发热并增加对内毒素的敏感性，该毒素是由噬菌体群金黄色葡萄球菌产生的一类蛋白质，刺激T细胞诱发TNF和LI-1，可致机体多个器官系统的功能紊乱或引起毒性休克综合征。凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤黏膜正常菌群之一，近年来已成为医院感染的主要病原菌，且由于耐药菌株的增多，给临床诊治工作造成很大困难。病后能获得一定免疫力，但作用不强，且不持久，可再次感染。4微生物学检验（1）检验程序葡萄球菌检验程序见图9-1。脓液、咽拭、穿刺液、尿液、痰液 脑脊液 血液 粪便、呕吐物 增菌培养 直接涂片染色 分离培养 分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板） 初报 取可疑菌落（性状、色素、溶血） 鉴定试验及药敏 涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 药敏试验 其他鉴定法 报告 图9-1 葡萄球菌属检验程序（2）标本采集 由于该属细菌对干燥和温度抵抗力强，且易从感染部位获取标本，故按常规方法采取标本。（3）检验方法1)显微镜检查 标本涂片，革兰染色镜检，若发现革兰阳性呈葡萄状排列的球菌，应初步报告“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”，并进一步鉴定。 2)分离培养 血标本注入50ml葡萄糖肉汤增菌培养基，迅速摇匀，37过夜，若混浊则转种血平板进一步鉴定。若无细菌生长，需连续观察7d，并以血平板确定有无细菌生长。脓液、尿道分泌物等可直接接种血平板，37过夜，观察菌落性状 。尿标本，必要时作细菌菌落计数。粪便、呕吐物应接种高盐甘露醇平板，37过夜可形成淡黄色菌落。3)鉴定 血浆凝固酶试验 有玻片法和试管法，前者测结合型凝固酶，后者测游离型凝固酶。玻片法即刻血浆凝固为阳性；试管法以37水浴34h后凝固为阳性，24h不凝固为阴性。 甘露醇发酵试验 金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇。 耐热核酸酶试验 用于检测金黄色葡萄球菌产生的耐热核酸酶。 肠毒素测定 取食物中毒病人的呕吐物、粪便或剩余食物接种高盐肉汤，可用幼猫试验检测肠毒素。 检测SPA 是鉴定金黄色葡萄球菌的指标之一。 还可用ELISA等方法检测金黄色葡萄球菌磷壁酸抗体；用脉冲凝胶电泳法进行葡萄球菌的限制性内切酶图谱分析等。 近年来，凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase-negative staphylococci，CNS）如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌等成为医院感染的重要病原菌，且耐药菌株比金黄色葡萄球菌更为多见，日益受到重视。CNS可用PYR水解、凝固酶试验、尿素酶试验等来鉴别。4）耐药性葡萄球菌属细菌药敏试验常规首选抗生素为苯唑西林和青霉素；通过药敏试验可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌(methecillin resmtant Staphylococcus，MRS)，该菌株耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和-内酰胺药、-内酰胺酶抑制剂类抗生素，同时对氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类抗生素也耐药。该菌是医院内感染的重要病原菌，多见于免疫缺陷患者、手术及烧伤后的患者，病死率高。 链球菌属链球菌属（Streptococcus）细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。分类链球菌的分类方法尚未统一。常用下列两种方法。根据溶血现象：分为3类。甲型溶血性链球菌（-hemolytic streptococcus）：菌落周围有12mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。乙型溶血性链球菌（-hemolytic streptococcus）：菌落周围有24mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。丙型链球菌（-streptococcus）：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D 等20个群。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型；B群分4个型。对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。细菌特性 链球菌 形态染色 球形或椭圆形，直径0.51.0m，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。无芽胞，无鞭毛。多数菌株在培养早期（24h）形成透明质酸的荚膜。革兰染色阳性。 分离培养 营养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，371824h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。 生化反应 触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。 抗原构造 主要有三种：蛋白质抗原：或称表面抗原。具型特异性有M、T、R、S 4种，位于C抗原外层。与致病性有关的是M抗原。多糖抗原：或称C抗原。为群特异性抗原，位于细胞壁。根据C抗原的不同，将链球菌分为20群。对人致病的90属A群。核蛋白抗原：或称P抗原。无特异性，为各种链球菌所共有，并与葡萄球菌有交叉。 抵抗力 不强，6030min即被杀死。对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类敏感。 肺炎链球菌 形态染色 革兰阳性球菌，菌体呈矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向外，在脓液、痰液及肺组织病变中亦可呈短链状，无鞭毛，无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。 分离培养 营养要求高，在血平板上形成灰白色、圆形、直径为0.5mm1.0mm的扁平菌落，周围有草绿色溶血环。培养时间长时可产生自溶酶。 生化反应 多数菌株分解菊糖，胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性，籍此可与草绿色链球菌相区别。 抗原结构荚膜多糖抗原 可将肺炎链球菌分为85个血清型。肺炎链球菌14型与人类A血型抗原有交叉反应。多糖抗原 为各型菌株所共有。可被血清中一种C反应蛋白（C reactive protein,CRP）所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎症者含量增高，故常以测定CRP作为诊断的依据。M蛋白：为型特异抗原，与A群链球菌M蛋白类似，但抗原性不同，与毒力无关。 抵抗力 本菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感。有荚膜菌株抗干燥力较强，在干痰中可存活12月。对青霉素、红霉素、洁霉素敏感。 变异性 有荚膜的肺炎链球菌经人工培养后可发生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R变异，同时随着荚膜的消失，毒力亦随之减弱。将R型菌落的菌株接种动物或在血清肉汤中培养，则又可恢复S型。临床意义化脓性链球菌A群链球菌也称化脓性链球菌（pyogenic streptococcus），致病力强，占人类链球菌感染的90%，能产生多种外毒素和侵袭性酶，如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等，产毒株还可引起猩红热。链球菌型别多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。乳链球菌B群链球菌学名无乳链球菌（S.agalactiae）是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌，对成人主要引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。 肺炎链球菌 肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称肺炎球菌（pneumococcus），是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等。其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用，此外溶血素、神经氨酸酶是主要致病物质。感染后机体可产生牢固的型特异性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。 草绿色链球菌草绿色链球菌亦称甲型溶血性链球菌。是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亚急性细菌性心内膜炎。微生物学检验链球菌检验程序 链球菌检验程序见图9-2。痰、脓、穿刺液、咽拭等 脑脊液 血液 增菌培养（葡萄糖肉汤等，5CO2） 直接涂片染色 检测抗原 分离培养 初步报告 接种血平板（5CO2） 可疑菌落（性状、溶血） 鉴定试验 血 杆 optochin 胆 其 清 菌 盐 他 学 肽 敏 溶 鉴 分 敏 感 菌 定 类 感 试 试 试 鉴 试 验 验 验 定 验 报告图9-2 链球菌检验程序标本采集 根据不同疾病采集不同标本。检验方法显微镜检查 标本涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初报。分离培养 血液标本先增菌培养，脓液、咽拭可接种血琼脂平板并涂片染色镜检，初代分离需5C02，3524h观察菌落性状。肺炎链球菌检验程序 肺炎链球菌检验程序见图9-3。 痰、脓液 脑脊液 血液 直接涂片 分离培养 增菌培养（葡萄糖肉汤或 硫酸镁肉汤） （血平板） 革 美 荚 兰 蓝 膜 挑选可疑菌落 染 染 肿 色 色 胀 试 纯培养 验 鉴定试验 初报 兔血清肉汤 胆汁溶菌试验 菊糖发酵 Optochin敏感试验 小白鼠毒力试验 涂片 荚膜肿胀试验 药敏试验 报告 图9-3 肺炎链球菌检验程序标本采集 根据病变部位采集不同标本。检验方法显微镜检查 除血液外，痰、脓液等均可直接涂片染色镜检。如发现革兰阳性矛头状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初报“找到肺炎链球菌”。分离培养：血液、脑脊液先增菌，可呈均匀混浊，有绿色荧光。痰液、脓液可直接接种血平板，5%10%CO2培养后，取可疑菌落进一步作optochin敏感实验、胆盐溶菌试验与菊糖发酵试验，以区别于甲型链球菌。动物试验：小鼠对肺炎链球菌敏感，1236h死亡。荚膜肿胀试验：如遇同型免疫血清，则肺炎链球菌荚膜出现肿胀，为阳性。鉴定与鉴别 溶血链球菌鉴定（表9-1）Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌，A、C、G群抗原不是种特异性抗原，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。PYR试验：化脓性链球菌为阳性。杆菌肽(bacitracin)敏感试验：化脓性链球菌为阳性，有别于其他PYR阳性的溶血性细菌(猪链球菌、海豚链球菌)和A群小菌落溶血性链球菌(米勒链球菌)。此法可作为筛选试验。 VP试验：可鉴别A、C、G群溶血的大、小两种不同菌落。 CAMP试验：无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。试验时先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔约34mm。35孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。表9-1 溶血链球菌鉴别Lancefield抗原群菌落大小菌种PYRVPCAMPBGURAABCCFGC未分群大小大小小大小小化脓性链球菌米勒链球菌无乳链球菌马链球菌米勒链球菌米勒链球菌似马链球菌米勒链球菌米勒链球菌+-+-+-+-+-+-+- 非溶血链球菌鉴定 包括不溶血和溶血C、G群链球菌，其生化特征见表9-2。表9-2 非溶血链球菌鉴别链球菌optochin敏感试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌草绿色链球菌牛链球菌SRR+-+optochin试验：肺炎链球菌抑菌圈直径大于14mm，表现为敏感。胆汁溶菌试验：肺炎链球菌为阳性。胆汁七叶苷试验：牛链球菌试验阳性。 草绿色链球菌鉴定 通常鉴定到群。各群鉴别特征见表9-3。表9-3 草绿色链球菌鉴别菌群VP脲酶精氨酸七叶苷甘露醇山梨醇温和链球菌群变异链球菌群唾液链球菌群米勒链球菌群-+-+-+-+-+-+-+-+- 免疫学检测 抗链球菌溶素0试验，常用于风湿热的辅助诊断，活动性风湿热患者的抗体效价一般超过400单位。治疗首选青霉素，也可用头孢菌素、红霉素、万古霉素。值得注意的是耐青霉素的肺炎链球菌(penicillinresistant streptococcus pneumonia，PRSP)和草绿色链球菌。 肠球菌属肠球菌属（Enterococcus）是人类肠道中的正常菌群，可从腹部和盆腔部感染的混合菌丛中分离出，对人有致病力。分类肠球菌属归类链球菌科，但种系分类法证实粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(Efaecium)不同于链球菌属的细菌，Schleifer和Kilpper-Balz将其命名为肠球菌属。用16SrRNA序列分析和核酸杂交等证实有19种肠球菌，分成5群，临床分离的肠球菌多属于群2。细菌特性 肠球菌为革兰阳性球菌，呈单个、成对或短链状排列，无芽胞和荚膜。所有菌株在含 65NaCl肉汤中能生长，在40胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种能水解吡咯烷酮-萘基酰胺(PYR)，不含细胞色素氧化酶和触酶。临床意义 是重要的医院感染病原菌，多见于尿路感染，与尿路器械操作、留置导尿、尿路生理结构异常有关，也可引起腹腔和盆腔的创伤感染、免疫低下患者的菌血症。微生物学检验检验程序肠球菌检验程序见图9-4。脓液、尿液、穿刺液 血液 涂片染色 分离培养（血平板、5CO2） 增菌培养（5CO2） (葡萄糖肉汤等) 初报 挑选可疑菌落 鉴定试验 PYR 胆汁七叶 6.5NaCl 血清学 试验 苷试验 生长试验 试验 肠球菌属细菌 参见表9-3鉴定到种 报告图9-4 肠球菌属检验程序标本采集 根据病种不同，采集不同标本。检验方法 显微镜检查 可见单个、成双、或短链状排列的卵圆形革兰阳性球菌。分离培养 可用血平板或选择性培养基（如叠氮胆汁七叶苷琼脂）进行分离培养。鉴定 PYR试验：是一种快速筛选鉴定试验，可鉴定能产生吡咯烷酮芳基酰胺酶的细菌，如肠球菌、化脓性链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。肠球菌与非肠球菌，需作盐耐受试验进一步鉴定。盐耐受试验：肠球菌能在含6.5%NaCl的心浸液肉汤中生长，本法结合胆汁-七叶苷试验可对肠球菌作出鉴定。 耐药性肠球菌的耐药性分为天然耐药和获得性耐药，对一般剂量或中剂量氨基糖苷类耐药和对万古霉素低度耐药常是先天性耐药。获得性耐药表现为对氨基糖苷类高水平耐药和对万古霉素、肽可霉素高度耐药。、 奈瑟菌属和布兰汉菌属分类 “伯杰鉴定细菌学手册”第9版将奈瑟菌属(Neisseria)和布兰汉菌属(Branhamella)归于群4，将奈瑟菌属、卡他布兰汉菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属归于奈瑟菌科。奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌(Ngonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(Nmeningitidis)以及布兰汉菌属中的卡他布兰汉菌(B.catarrhalis)是主要的致病菌。细菌特性淋病奈瑟菌形态染色 形态似脑膜炎奈瑟菌，成双排列，两菌接触面平坦，呈肾形或咖啡豆的革兰阴性球菌。脓液标本中，大多数淋病奈瑟菌位于中性粒细胞内，但慢性淋病病人多分布于细胞外。无芽胞，无鞭毛，新分离株有荚膜和菌毛。 分离培养 本菌对营养的要求比脑膜炎奈瑟菌更高，只能在巧克力平板和专用选择培养基中生长，初次分离须供给5%CO2。最适温度为3537。经2448h后，形成圆形、凸起、灰白色、直径0.51.0 mm的光滑型菌落。根据菌落大小、色泽等分T1T5五种类型，菌落有自溶性。 生化反应 本菌只分解葡萄糖，产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖等。氧化酶和触酶试验阳性。抗原构造 至少有三类，菌毛蛋白抗原；脂多糖抗原；外膜蛋白抗原。根据外膜蛋白抗原的不同，将淋病奈瑟菌分成A、B、C等16个血清型。 抵抗力 对外界抵抗力低。干燥状态下1h或555min、100立即死亡。在患者分泌物污染的衣裤、被褥、毛巾及厕所坐垫上，能存活1824h。对各种消毒剂极敏感。脑膜炎奈瑟菌 形态染色 呈肾形或豆形，成双排列的革兰阴性球菌，人工培养后呈卵圆形或球形，排列不规则，单个、成双或四个相联等。在患者脑脊液中位于中性粒细胞内。新分离株多有荚膜和菌毛。 培养特性 营养要求高，需在含有血液、血清等培养基中才能生长。常用培养基为巧克力（色）琼脂平板、血平板和卵黄双抗平板。最适生长温度37 ，专性需氧，5%CO2可促进生长。巧克力平板上的菌落为圆形、扁平、光滑、半透明；在血平板上不溶血；卵黄双抗培养基上菌落较大，光滑、湿润、扁平。 生化反应 能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气。 抗原构造 主要有荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原和核蛋白抗原四种。根据荚膜多糖抗原的不同，可将脑膜炎奈瑟菌分为13个血清群，我国流行的菌株以A群为主。 抵抗力 本菌抵抗力弱，对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。床意义淋病奈瑟菌致病物质有外膜蛋白、菌毛、IgAI、蛋白水解酶、内毒素等。成人淋病主要通过性交传染，污染的毛巾、衣裤、被褥等也起一定传播作用，男性可发展为前列腺炎、附睾炎等；女性可致前庭大腺炎、盆腔炎或不育。母体患淋菌性阴道炎或子宫颈炎时，婴儿出生时可致淋菌性结膜炎。病后免疫力弱且不持久，再感染和慢性患者较多见。脑膜炎奈瑟菌主要引起流脑。致病物质为荚膜、菌毛和内毒素。5岁以下儿童多见，6个月2岁的婴儿发病率最高。感染早期有上呼吸道症状，少数引起败血症，进而致化脓性脑脊髓膜炎。他布兰汉菌可引起中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎。微生物学检验炎奈瑟菌 检验程序 见图9-5。 脑脊液 瘀血点穿刺物、鼻咽分泌物、拭子、浆膜腔穿刺液 血液 离 心 分离培养（血平板或巧克力平板） 增菌培养（葡萄糖肉汤等） 5CO2 5CO2 上 沉 清 淀 液 挑选可疑菌落 直 涂 接 片 鉴定试验 凝 染 集 色 初报 涂 氧 糖 血 药 片 化 发 清 敏 染 酶 酵 凝 试 色 试 试 集 验验 验 试验 报 告 图9-5 脑膜炎奈瑟菌检验程序 标本采集 菌血症期病人取血液，有出血点或瘀斑者取瘀斑渗出液，出现脑膜刺激征时取脑脊液。上呼吸道感染和带菌者，可取鼻咽分泌物等。标本采集后应立即送检，或用预温平板进行床边接种后立即置37 培养。检验方法显镜检查 脑脊液，离心取沉淀物涂片，革兰染色或美蓝染色后镜检，如在中性粒细胞内、外有革兰阴性双球菌，可作出初步诊断；瘀血点，经碘酊、乙醇消毒后，用无菌针头挑破瘀点，挤出少量血液或渗出液，制成印片，自然干燥后革兰染色和美蓝染色，阳性率达80%左右。分离培养 血液或脑脊液先增菌后，再接种巧克力平板，5%CO2、371824h后可形成圆形、凸起、光滑、湿润、灰褐色菌落。挑取可疑菌落涂片染色检查，并进一步作生化试验等鉴定。淋病奈瑟菌检验程序 参照脑膜炎奈瑟菌的检验程序。标本采集 男性患者用无菌棉拭取尿道脓性分泌物，女性患者取宫颈分泌物，患结膜炎的新生儿取结膜分泌物。因本菌抵抗力极低且易自溶，故采集标本后应立即送至检验室。检验方法显微镜检查 脓性分泌物涂片，革兰染色镜检。如发现中性粒细胞内革兰阴性双球菌可初步诊断。分离培养 是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病病人惟一可靠的方法。标本接种在预温的巧克力平板或选择性培养基，该培养基含万古霉素、多粘菌素、制霉菌素等多种抗菌药物，可抑制杂菌生长，利于淋病奈瑟菌的检出。37、5%10%CO2、24h48h后，取可疑菌落进行涂片镜检，并作氧化酶、糖发酵或协同凝集等鉴定。鉴定推测性鉴定 革兰染色见阴性双球菌和氧化酶试验阳性是两个推测性鉴定指标。确证性鉴定 利用生化反应鉴定奈瑟菌属和卡他布兰汉菌。核酸检测技术：检测淋病奈瑟菌，可快速诊断。淋病治疗首选青霉素。近年来，对青霉素和四环素耐药，对壮观霉素和三代头孢菌素、喹诺酮类敏感的淋病奈瑟菌 (PRNG)临床上多见。