GC法同时测定壮骨麝香止痛凝胶贴膏中5种挥发性成分.pdf

法同时测定壮骨麝香止痛凝胶贴膏中 种挥发性成分汤 燕，朱 宁，沈 立，崔红梅，罗 恒（四川省中医药科学院分析测试中心，四川 成都；四川省中医药科学院中药药学研究所，四川 成都）收稿日期：基金项目：四川省科技厅省级科研院所基本科研业务专项项目（）作者简介：汤 燕（），女，助理研究员，从事中药质量研究。：，：通信作者：罗恒（），女，硕士，副研究员，从事中药质量、药动学研究。：，：摘要：目的 建立 法同时测定壮骨麝香止痛凝胶贴膏中薄荷脑、樟脑、龙脑、异龙脑、水杨酸甲酯的含量。方法该药物乙酸乙酯提取液的分析采用 色谱柱（）；载气氮气；检测器，温度；分流比 ；程序升温。结果 种挥发性成分在各自范围内线性关系良好（），平均加样回收率 ，。结论该方法准确、稳定、可靠，可用于壮骨麝香止痛凝胶贴膏的质量控制。关键词：壮骨麝香止痛凝胶贴膏；薄荷脑；樟脑；龙脑；异龙脑；水杨酸甲酯；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：，（，；，）：，（），（），：；壮骨麝香止痛膏具有祛风湿、活血止痛作用，可用于治疗风湿性关节炎、肌肉疼痛、扭伤，该制剂为橡胶型基质贴膏，在生产过程中需要用汽油等易燃溶剂，存在较大的安全隐患，并且粘附性强，容易引起皮肤过敏，揭掉时有疼痛感、皮肤易破损等缺点。中药凝胶贴膏具有载药量大、皮肤刺激性小、贴敷舒适度和保湿性能好、透气、依从性高的优势，消除了原剂型对皮肤的过敏反应，作为壮骨麝香止痛膏改进剂型十分合适。为了制定壮骨麝香止痛凝胶贴膏质量标准，本实验采用 法同时测定樟脑、龙脑、异龙脑、薄荷脑、水杨酸甲酯的含量。另外，对于凝胶贴膏而 年 月第 卷 第 期中 成 药 言，大多数文献中的提取方法为超声提取、研匀提取、加热回流提取后直接测定；本实验发现，未经纯化的样品中存在大量凝胶基质材料，黏度较大，极易损坏仪器进样针、色谱柱，故在含量测定前首先对其作进一步纯化，以期消除凝胶基质带来的干扰。材料 仪器 气相色谱系统及其工作站，配置 检测器（美国 公司）；电子天平（十万分之一，瑞士梅特勒托利多公司）；氢空一体机（北京中惠普分析技术研究所）；旋转蒸发仪（瑞士 公司）。试剂 樟脑（批号，纯度 ）、薄 荷 脑（批 号，纯 度 ）、龙 脑（批 号，纯 度 ）、异 龙 脑（批 号，纯 度 ）、水杨酸甲酯（批号，纯度）对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙酸乙酯为色谱纯（德国 公司）；水为超纯水。药物 批壮骨麝香止痛凝胶贴膏剂（批号、）及空白基质贴膏剂均由课题组自制。方法与结果 溶液制备 对照品溶液精密称取各对照品适量，乙酸乙酯定容至刻度，制成每 分别含薄荷脑 、樟脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 的溶液，即得。供试品溶液将本品剪成小块，精密称取，置于 具塞锥形瓶中，精密加入 乙酸乙酯，加热回流提取 ，冰浴放冷，蒸馏水萃取 次，收集乙酸乙酯层，用铺有无水硫酸钠的漏斗过滤，少量乙酸乙酯洗脱，收集滤液，减压浓缩至 ，定容至 ，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。空白基质溶液 取空白贴膏适量，按“”项下方法制备，即得。阴性样品溶液按处方工艺，分别制得缺樟脑、缺薄荷脑、缺龙脑、缺异龙脑、缺水杨酸甲酯的阴性样品，按“”项下方法制备，即得。色谱条件 弹性石英毛细管柱（）；氢 火 焰 离 子 检 测 器（）；进样口温度 ；检测器温度 ；载气高纯氮气（）；分流比 ；程序升温（初始 ，以 升至 ，升至 ，保持 ）；进样量 。方法学考察 专属性试验取阴性样品、供试品溶液适量，在“”项色谱条件下进样测定，结果见图。由此可知，阴性无干扰，表明该方法专属性良好。线性关系考察 精密吸取对照品溶液适量，乙酸乙酯梯度稀释成 个质量浓度，在“”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（），峰面积为纵坐标（）进行回归，并分别以信噪比 、为检测限、定量限，结果见表，可知各挥发性成分在各自范围内线性关系良好。表 各挥发性成分线性关系 成分回归方程线性范围（）检测限（）定量限（）薄荷脑 樟脑 龙脑 异龙脑 水杨酸甲酯 稳定性试验取供试品溶液适量，于、在“”项色谱条件下各进样 测定，测得各挥发性成分峰面积 分别为樟脑 、薄荷脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 ，表明溶液在 内稳定性良好。精密度试验取对照品溶液（樟脑 、薄荷脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 ）适量，在“”项色谱条件下进样测定 次，测得各挥发性成分峰面积 分别为樟脑 、薄荷脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 ，表明仪器精密度良好。重 复 性 试 验 取 同 一 份 本 品（批 号 年 月第 卷 第 期中 成 药 樟脑 薄荷脑 异龙脑 龙脑 水杨酸甲酯 图 各挥发性成分 色谱图 ），按“”项下方法平行制备 份供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，测得各挥发性成分含量 分别为樟脑 、薄荷脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 ，表明该方法重复性良好。加样回收率试验取各挥发性成分含量已知（樟脑 、薄荷脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 ）的本品（批号）份，每份约 ，精密称定，置于 具塞锥形瓶中，分为 个质量浓度，每个平行 份，分别以、水平精密加入对照品溶液（樟脑 、薄荷脑 、龙脑 、异龙脑 、水杨酸甲酯 ）、，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下各进样 测定，计算回收率。结果，薄荷脑、樟脑、龙脑、异龙脑、水杨酸甲酯平均加样回收率分别为 、，分别为 、。样品含量测定 取 批样品，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表。讨论 色谱条件选择 本实验发现，色谱柱（）分离度较高，目标成分无干扰；恒温条件无法满足定量分析要求，表 各挥发性成分含量测定结果（片）（）批号薄荷脑樟脑龙脑异龙脑水杨酸甲酯 平均值 故采用程序升温。在相同色谱条件下，分别设置分流比 、，发现在 下各挥发性成分色谱峰分离度、峰形最佳。根据文献 报道结合预实验结果，分别选择、作为进样口、检测器温度。供试品溶液提取方法选择含有挥发性成分药材的供试品溶液在前处理过程中，主要采用超声 年 月第 卷 第 期中 成 药 提取、挥发油提取，而凝胶贴膏前处理方法主要为超声提取、溶剂研磨提取、加热回流提取。课题组前期研究发现，溶剂研磨法无法提取出壮骨麝香止痛凝胶贴膏中各挥发性成分，并且超声提取不充分，效果远不如回流提取，故最终选择后者。提取溶剂选择本实验分别考察了甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷提取效果，发现乙酸乙酯或二氯甲烷提取时提取液清澈，容易过滤，由于后者毒性较强，故最终选择前者。提取液处理方法选择由于凝胶基质黏性较大，直接提取的溶液重复进样后易损坏气相色谱仪进样针，色谱系统污染严重。本实验发现，回流提取液用水洗 次后再进行分析时，仪器损伤程度降低，各挥发性成分加样回收率大大提高。结论本实验建立 法同时测定壮骨麝香止痛凝胶贴膏中樟脑、薄荷脑、龙脑、异龙脑、水杨酸甲酯的的含量，完善了该制剂质量标准，可达到全面控制其质量的目的。另外，大多数文献、法定标准采用挥发油提取来对挥发性成分进行含量测定，但该方法装置复杂，操作繁琐，样品回收率低；本实验采用有机溶剂回流提取，并结合水萃取以除去损坏仪器、色谱柱的高分子骨架材料杂质，该方法操作简便，重复性、回收率均能达到相关要求。参考文献：，卫生部药品标准中药成方制剂（第十四册壮骨麝香止痛膏），国家食品药品监督管理局国家药品标准（壮骨麝香止痛膏）王承潇，汤秀珍，沈平孃，等 热熔压敏胶应用于中药贴剂的研究进展 中草药，（）：林懋祖，沈 坚，江仲淮 国外橡皮膏制剂工艺发展概况 中成药研究，（）：李保林，王建辉，黄露露，等 中药凝胶贴膏的研究进展 医学综述，（）：；万思琦，徐京育 中药凝胶贴膏研究进展及问题展望河北中医，（）：郭成杰，杨 娜，吴飞，等 复方红胡镇痛凝胶贴膏基质处方的优化 中成药，（）：吴红云，张有志，李 梅，等 双氯芬酸钾凝胶贴膏质量研究方法的建立和制剂评价 国际药学研究杂志，（）：施利群，徐建峰，张利华，等 测定 薄荷凝胶贴膏中薄荷脑的含量 中国现代应用药学，（）：庞武耀，吴美珠，黄思玉 竭红跌打凝胶贴膏的质量标准研究 广东药科大学学报，（）：徐 朗，沈 晨，方 方，等 法测定洛索洛芬钠凝胶贴膏中克罗米通的含量 中国药剂学杂志，（）：陈 敏，邓萌萌，伍蕊嗣，等 五虎凝胶贴膏质量标准研究 中国现代应用药学，（）：李丽月，冯小映，林静吟，等 双香贴膏士的宁含量测定样品前处理的研究 海峡药学，（）：申二永 壮骨麝香止痛膏的质量标准研究 西北药学杂志，（）：施利群，徐建峰，张利华，等 气相色谱法测定麝香壮骨膏中薄荷脑含量 中国药业，（）：刘 翔，孙 飞 气相法测定麝香壮骨膏中樟脑、薄荷脑、冰片、水 杨 酸 甲 酯 含 量 中 成 药，（）：倪美萍，张福成，董立华，等 法同时测定麝香跌打风湿膏中的 种挥发性成分 华西药学杂志，（）：国家药典委员会 中华人民共和国药典：年版一部 北京：中国医药科技出版社，：年 月第 卷 第 期中 成 药