HPA通过上调MCP-1_CCR2促进胃癌发生侵袭和转移.pdf

基金项目:内蒙古自治区自然科学基金项目(编号:)作者单位:.内蒙古医科大学(呼和浩特).内蒙古医科大学附属医院病理科作者简介:付鑫雅女()硕士研究生从事胃癌相关的研究通信作者:马秀梅 :.通过上调 /促进胃癌发生侵袭和转移付鑫雅 胡灵丹 张志坚 马秀梅【摘要】目的 检测乙酰肝素酶()、单核细胞趋化因子()和趋化因子受体()在人胃癌中的表达探讨 诱导人胃癌细胞发生侵袭和转移的分子机制 方法 免疫组织化学方法检测 例人胃癌组织中、和 蛋白的表达 培养人胃癌 细胞、细胞(过表达 蛋白细胞株)、细胞和 ()细胞(敲低 蛋白细胞株)细胞和 细胞作为实验组 细胞和 ()作为对照组 实验检测 抑制剂()作用于人胃癌 细胞的最适抑制浓度 实验检测人胃癌细胞中各种蛋白的表达划痕实验和 侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力 结果人胃癌组织中、/蛋白阳性表达与人胃癌发病部位、分化程度、侵袭深度以及淋巴结转移相关(.)人胃癌组织中 蛋白表达与 /蛋白表达呈正相关(.)过表达可促进细胞迁移和侵袭(.)抑制剂 能抑制胃癌细胞中因 过表达所增强的迁移和基质侵袭能力(.)结论 人胃癌中 蛋白是诱导 /蛋白表达的上游因子 通过上调 /蛋白表达诱导人胃癌发生侵袭和转移【关键词】胃癌乙酰肝素酶单核细胞趋化因子 趋化因子受体 侵袭转移【中图分类号】.【文献标识码】:././.【】()()().()()().().()./(.)./(.).(.)(.)././.【】实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期 胃癌是源自胃黏膜上皮的恶性肿瘤是癌症相关死亡的第三大原因也是全世界第四大常见的恶性肿瘤 年生存率仅为 乙酰肝素酶()是唯一能切割硫酸乙酰肝素的哺乳动物酶在多种癌症中高表达并与肿瘤预后密切相关 前期研究发现 能够促进胃癌细胞的侵袭和转移 趋化因子是一类由细胞分泌的具有趋化活性的细胞因子可以诱导特异细胞趋化转移 单核细胞趋化因子 ()又称趋化因子配体()可激活炎症转录因子在炎症中起着关键的作用趋化因子受体可通过磷脂酰肌醇途径发挥生物学效应研究人员使用同位素标记相对和绝对定量()技术检测 高表达与 低表达的细胞系的蛋白质差异表达情况结果显示在 高表达细胞系中 、趋化因子受体()为表达水平上调的因子 本研究在前期研究的基础上探讨 促进人胃癌侵袭转移的机制 材料与方法.标本来源收集内蒙古医科大学第一附属医院 年手术切除胃癌标本 例病理资料完整患者 年 龄 .岁 其 中 男 性 例 占.女性 例占.癌组织最大直径为 最小直径为.位于贲门者 例幽门胃窦者 例中低分化者 例高和中分化者 例其中侵及浆膜层 例侵及肌层 例有淋巴结转移 例无淋巴结转移 例.细胞培养人胃癌细胞系 和 购自上海复祥生物科技有限公司(中国科学院上海细胞库)人胃癌细胞系 和 ()均由前期实验建立均在含 胎牛血清的/()细胞培养液(公司)中、二氧化碳培养箱(美国 公司)内培养 实验用细胞均处于对数生长期.免疫组化采用免疫组织化学 法检测人胃癌组织中、和 蛋白的表达 兔抗人多克隆抗体 兔抗人多克隆抗体 兔抗人多克隆抗体均购于(中国)公司(稀释)按染色强度及阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比综合计分 染色强度:无色:分浅黄色:分棕黄色:分棕褐色:分阳性细胞数:小于:分 :分 :分:分大于:分 染色强度得分与阳性细胞数得分相乘 分记为“”分记为“/”分记为“”大于 分记为“”.实验配制 溶液每.溶于 将对数生长期细胞接种到 孔板上设置调零孔和对照孔对照组人胃癌 细胞不作处理实验组人胃癌 细胞加入浓度梯度的 分别在加药 、时加入 溶液 后加入 使噻唑蓝结晶溶解设置调零孔(培养基、)与对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养基、)使用酶标仪检测在 处的吸光值 绘制细胞活性曲线选择最佳实验浓度.实验在 孔板内分别培养人胃癌、和 ()细胞根据实验需要设对照组和处理组 兔抗人多克隆抗体、兔抗人多克隆抗体、兔抗人多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)稀释其中 为内参 并计算目的蛋白条带灰度值/条带灰度值的比值作为目的蛋白的相对表达量 每组实验重复 次分别求其均数及标准差最后做统计分析.划痕迁移实验将人胃癌 和 细胞接种于 孔板在孔的中央部位用 枪头在培养板底部划一损失区域 后在显微镜下观察细胞移动情况设 组、组和提前 加入 抑制剂(/)的 组 所有实验重复 次并计算结果的平均值 迁移距离 最初划痕时损失区域的宽度 后损失区域的宽度.基质侵袭实验细胞基质侵袭实验在 小室中进行滤膜孔径 上室中加入无血清培养基的细胞悬液下室中加入含 血清培养基置于、的培养箱内 后棉签小心擦除滤膜上面的细胞穿过小室的细胞以甲醇固定结晶紫染色随机取 个视野计数侵袭的细胞数实验重复 次实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期计算平均值.统计学分析采用 .统计软件进行统计分析正态分布且方差齐性的计量资料用 表示组间比较采用 检验计数资料组间比较采用 检验相关性分析用 相关性分析方法.为差异具有统计学意义 结果.、和 蛋白的表达与临床病理特征的关系人胃癌组织中、和 阳性表达均主要位于胃癌细胞胞浆中阳性染色均为黄褐色(图)例人胃癌组织中、和 蛋白阳性表达率在胃贲门处者分别明显高于幽门胃窦处(.)低分化胃癌者明显高于高和中分化胃癌者(.)侵及浆膜层者明显高于侵及肌层者(.)有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(.)(表).人胃癌组织中 蛋白与 和 蛋白表达的关系人胃癌组织中 蛋白和 蛋白表达呈正相关(.)蛋白和 蛋白表达呈正相关(.)(表)表 蛋白与 和 蛋白表达的相关性 .、和 在人胃癌 细胞和 细胞中的表达 实验检测结果显示前期建立的人胃癌 细胞中 高表达具有统计学意义(.)和 在 细胞和 细胞中均为阳性表达且在 细胞中蛋白相对表达量明显高于 细胞差异具有统计学意义(.)(图)结果表明在 细胞中 和 与 蛋白的表达呈正相关图 人胃癌组织中、和 蛋白的表达 :.().().().().().().实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期表 、和 的表达与胃癌临床病理特征的关系 ()./.图 、和 在人胃癌 细胞和 细胞中的表达 :.实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期.和 在人胃癌 细胞和 ()细胞中的表达 实验检测结果显示在 敲低的 ()细胞中 和 的表达量也明显降低 在人胃癌 细胞和 ()细胞中 和 均为阳性表达但在 ()细胞中蛋白相对表达量明显低于人胃癌 细胞(图)且差异具有统计学意义(.)(图)表明 可能为调节 /蛋白表达的上游因子.过表达对人胃癌 细胞迁移和基质侵袭能力的影响划痕迁移实验显示人胃癌 细胞的迁移距离明显高于人胃癌 细胞组差异有统计学意义(.)表明 过表达能促进人胃癌 细胞的迁移 小室实验结果显示人胃癌 细胞穿过小室的细胞数明显高于人胃癌 组差异有统计学意义(.)(图)表明 过表达能促进人胃癌 细胞的迁移和基质侵袭能力.抑制剂 对 细胞的迁移和基质侵袭能力的影响用 /抑制剂 预处理人胃癌 细胞 后经划痕迁移实验结果显示 抑制剂组的迁移距离较人胃癌 细胞迁移距离明显变短差异有统计学意义(.)经 小室试验显示 抑制剂组穿过小室的细胞数较人胃癌 细胞穿过小室的细胞数明显减少差异有统计学意义(.实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期图 和 在人胃癌 细胞 ()细胞中的表达 ():.().().图 乙酰肝素酶过表达对人胃癌 细胞迁移和基质侵袭能力的影响 :.实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期图 使用 抑制剂 后人胃癌 细胞的迁移和基质侵袭能力的影响 :.讨论胃癌是世界范围内癌症相关死亡的第三大原因 胃癌早诊率较低诊断时常常处于中晚期 晚期胃癌的特点是迅速出现全身的转移导致由于缺乏根治治疗的预后不良 然而关于胃癌等肿瘤侵袭和转移的机制并不十分清楚给肿瘤的治疗和康复带来了巨大的难度所以进一步探索胃癌细胞侵袭和转移的机制寻找防治胃癌侵袭和转移的靶点具有重要意义 我们前期研究已经证明 能够促进人胃癌细胞发生侵袭和转移但 促进肿瘤侵袭和转移的机制尚未完全研究清楚 本文探讨 是否通过调节 /信号轴诱导胃癌细胞发生侵袭和转移 由炎症细胞分泌在炎症部位迁移浸润导致疾病的进展某些肿瘤细胞也可产生 与其受体 结合主要通过募集肿瘤相关巨噬细胞、调节肿瘤免疫、直接作用于肿瘤细胞等方式参与肿瘤的发生发展过程 的表达可通过生长因子、放射治疗、循环缺氧和抗癌药物等因素或与其他细胞(包括癌相关成纤维细胞)的相互作用而增加 等研究发现在卵巢癌中/通过激活/途径及其下游效应子 和 促进迁移和网膜转移表明 /轴的新靶点可能有益于卵巢癌患者的治疗 另有研究证明子宫内膜癌患者中较高表达的 与更好的预后和更长的无病生存期相关 的水平可能对子宫内膜癌患者具有预后价值 还有学者检测大肠癌组织及癌旁组织中 表达情况发现 的过表达与大肠癌发生发展及转移密切相关 等在裸鼠胃癌细胞中转染 表明胃癌细胞产生的 可能通过巨噬细胞浸润来调节肿瘤的转移在肿瘤的发生发展过程中趋化因子不仅趋化炎性细胞浸润肿瘤组织而且与多种生物分子以及信号通路相互作用介导肿瘤的侵袭和转移等过程 是一种趋化细胞因子并且与其 受体结合在肿瘤的转移中发挥重要作用 等的研究发现 通过促进/介导的 的磷酸化从而诱导糖原合成酶激酶()的活化而/抑制剂 减弱了 介导的 的磷酸化并降低了实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期 的表达结果导致 细胞的侵袭和转移能力增强 等的研究也证实了这一观点:/在多种人类肿瘤细胞中表达明显上调这些肿瘤细胞常伴随着经 转导或 处理的 的表达在其他细胞包括()肿瘤细胞和肿瘤微环境中的上皮细胞()肿瘤衍生的 /放大了 研究结果表明/是()肿瘤细胞侵袭转移的一个关键因素本研究发现人胃癌组织中、/蛋白阳性表达与人胃癌发病部位、分化程度、侵袭深度以及淋巴结转移密切相关即胃贲门部表达高、分化程度越低表达越高、侵袭深度越深表达越高以及有淋巴结转移表达越高 人胃癌细胞中在 蛋白高表达的细胞系中 和 蛋白也高表达当敲低 蛋白时 和 蛋白表达也随之降低由此可见 蛋白与 /蛋白之间存在着正向调节关系目前关于 /信号轴介导肿瘤发生发展已成为肿瘤学的研究热点对其进一步的探讨和研究将会丰富肿瘤发病机制的理论基础同时也对肿瘤的预防和诊治提供新的方法和思路参考文献尚钐钐马秀梅.乙酰肝素酶非酶活性促进肿瘤侵袭转移的研究进展.临床与实验病理学杂志():.():.():.():.():.马秀梅孙勤暖任明姬等.胃癌乙酰肝素酶和 表达及与临床病理特征和血管形成的关系.中国组织化学与细胞化学杂志():.马秀梅王栓柱于宏等.沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响.肿瘤():.怀娜于虹马秀梅.沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响.中华肿瘤杂志():.:.:.李方舒黄萨础拉马秀梅等.基于 技术探讨人胃癌细胞乙酰肝素酶调控的信号通路.现代肿瘤医学():.():.:.():./.():.():.马凤丽王新颖彭亮等.在结直肠癌的表达及意义.现代消化及介入():.():./.():.():.(收稿日期:修回日期:)实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期