miR-155通过调节ETS1促进鼻咽癌细胞侵袭转移能力的研究.pdf

收稿日期:作者单位:丽水市人民医院 耳鼻咽喉科 眼科浙江 丽水 :./.通过调节 促进鼻咽癌细胞侵袭转移能力的研究黄 武孟易禹张丽娜 摘 要 目的观察微小()在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用方法以鼻咽癌 和 细胞作为研究对象分别转染 、和 运用 实验检测 和 对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的作用 检测细胞 表达蛋白印记实验检测、和 蛋白表达结果与 组相比 组细胞侵袭()个 ()个和迁移()个 ()个能力均降低()()、()和 ()蛋白表达均下调()组细胞侵袭()个 ()个 和迁移()个 ()个能力均增强()()、()和 ()蛋白表达均升高()与 组相比 组的细胞迁移()个 ()个 和侵袭()个 ()个能力均减弱()()()、()()、()()蛋白的表达均下降()结论 可能通过调节转录因子 促进细胞外基质降解过程从而发挥促进鼻咽癌细胞的迁移与侵袭作用关键词 鼻咽癌侵袭迁移转移 ().()()()()()()()()()()()()()()()()()().()()()()()()()()()()()().:引言鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤是我国南方最常见的肿瘤之一具有位置深、侵袭性强、进展快、易复发的特点 鼻咽癌是一种放射敏感性肿瘤放射治疗是其主要的治疗策略 尽管放疗可以提高鼻咽癌患者的 年生存率但由于疾病位置较深早期诊断困难部分患者在治疗时已有淋巴结转移和远处转移总体效果仍然较差 因此对鼻咽癌转移机制的探讨寻找有价值的生物标志物和新的治疗靶点显得尤为重要 是一种高度保守的非编码单链小 分子约 个核苷酸通过与靶基因的 序列结合调控靶基因的表达 在包括鼻咽癌、乳腺癌在内的许多肿瘤组织中高表达但是 与鼻咽癌之间的关系及其分子机制尚未见报道 而(实用药物与临床 年第 卷第 期 .癌基因同源物)作为一个转录因子在鼻咽癌的进展和转移进程中发挥重要作用 本研究通过分析鼻咽癌细胞中 和 对侵袭转移的作用来探究其分子机制 材料和方法 细胞系 人鼻咽癌细胞、和人正常鼻咽上皮细胞 购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心 主要试剂胎牛血清购自美国 公司 液体培养基购自美国 公司 、和 均由吉玛基因公司设计合成 多聚甲醛购自上海博谷生物科技有限公司青霉素链霉素、胰蛋白酶消化液和结晶紫染色液购自上海碧云天科技有限公司 基质胶()购自美国 公司()购自北京索莱宝科技有限公司 小室购自美国 公司 试剂盒购自美国赛默飞世尔科技公司反转录试剂盒 ()和 试剂盒()购自南京诺唯赞生物科技有限公司兔单克隆抗体 ()、兔单克隆抗体()、兔单克隆抗体()和兔单克隆抗体 ()购自美国 公司 标记山羊抗兔()购自上海碧云天科技有限公司 化学发光底物购自美国 公司 细胞培养和转染 人鼻咽癌细胞、以含 和青链霉素的 培养基培养人正常鼻咽上皮细胞 以含 和 青链霉素的 培养基培养细胞正常培养环境为 空气、饱和湿度的培养箱 取对数生长期的 细胞和 细胞进行实验转染时按照说明书 步 骤 通 过 转染()、()、()和 ()以上 个质粒均购自广州市锐博生物科技有限公司 实时荧光定量()检测 和 的 表达 采用 法提取人鼻咽癌细胞、和人正常鼻咽上皮细胞 中总 按照说明书步骤建立 反应体系后行基因组 去除并在上述体系中加入 的 混匀并按 和 的程序进行逆转录 后利用 实时荧光定量 仪(美国 公司)将逆转录的 用 法进行 反应 采用 法计算 表达水平 引物由生工生物工程(上海)股份有限公司设计合成:()():()():()()蛋白印迹法测定、和 蛋白表达提取各组蛋白后按照文献所述方法进行蛋 白 印 迹 法 其 中 抗 体 配 比 如 下:()、()、()和()测定 对人鼻咽癌 和 细胞的迁移作用分别将 无血清浓度为 个/的转染 、的鼻咽癌 细胞和转染、和 的鼻咽癌细胞加入 上室并在 下室加入含纤连蛋白和 的 培养基培养 后取出 小室并拭去其上层鼻咽癌细胞后加入甲醇固定 结晶紫 染色后洗去干燥 测定 对人鼻咽癌 和 细胞的侵袭作用 取预冷的无血清基质胶稀释液(基质胶 培养基)加入 上室中风干过夜后其余步骤同“”统计学分析 应用 软件进行统计分析 正态分布的计量资料以 表示两组间比较采用 检验多组间比较采用单因素方差分析两两多重比较采用 检验 为差异有统计学意义 结果 和 在鼻咽癌细胞和鼻咽上皮细胞中的表达 在鼻咽癌细胞、实用药物与临床 年第 卷第 期 .、和人正常鼻咽上皮细胞 中 的表达量逐渐降低(见图)蛋白的表达量在鼻咽癌细胞、和人正常鼻咽上皮细胞 中也逐渐降低(见图)在鼻咽癌细胞中 细胞的 表达量和 蛋白的表达量最高 细胞的两者表达量最低因此对鼻咽癌细胞 和 进行后续实验研究图 和 在鼻咽癌细胞中的表达注:鼻咽癌细胞、和人正常鼻咽上皮细胞 中的 表达量 鼻咽癌细胞、和人正常鼻咽上皮细胞 中的 蛋白表达量(左:代表图右:统计图)与 细胞相比 对鼻咽癌细胞 和 侵袭迁移的影响 分别将 和 转染至 细胞和 细胞(见图、)在 细胞中与 组相比 组的侵袭迁移能力明显下降侵袭:()个 ()个迁移:()个.()个(见图、)在 细胞中与 组相比 组的侵袭迁移能力显著提高侵袭:()个.()个迁移:(个.()个(见图、)图 对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响注:鼻咽癌细胞 转染 和 后 表达量 鼻咽癌细胞 转染 和 后 表达量、鼻咽癌细胞 转染 和 后细胞侵袭和迁移能力(:代表图:统计图)、鼻咽癌细胞 转染 和 后细胞侵袭和迁移能力(:代表图:统计图)与 细胞相比 对、蛋白的影响 可以作为 的下游调控基因通过 数据库发现在鼻咽癌组织中表达量高于正常组织(图)实验显示在鼻咽癌 细胞中与 组 相 比 组、蛋白表 达 减 弱 :.():.():.()(图、)在鼻咽癌 细胞中与 组相比 组、蛋白表达增强:.(.):.(.):.(.)(图、)实用药物与临床 年第 卷第 期 .图 对、蛋白的影响注:在 数据库中 在鼻咽癌组织()和正常组织()中的表达量 鼻咽癌细胞转染 、后蛋白、的表达 鼻咽癌细胞 转染 和 后细胞蛋白、的表达定量结果 鼻咽癌细胞 转染 和 后细胞蛋白、的表达定量结果 与 相比 与 组相比 通过 促进鼻咽癌细胞的迁移和侵袭转染 后 鼻咽癌细胞中 的蛋白和 表达水平均降低(图)组的细胞迁移()个.()个和侵袭()个.()个明显弱于 组细胞(图)而、蛋 白 的 表 达 也 弱 于 组:().():().():().()(图)图 促进鼻咽癌 细胞侵袭迁移的机制注:鼻咽癌细胞 转染 后蛋白和 表达水平 鼻咽癌细胞 转染 、和同时转染 后细胞侵袭迁移能力(左:代表图右:统计图)鼻咽癌细胞 转染 、和同时转染 后蛋白、的表达(左:代表图右:统计图)与 组相比 与 相比 与 相比 实用药物与临床 年第 卷第 期 .讨论鼻咽癌患者死亡的一个主要原因是发生转移 在鼻咽癌侵袭转移过程中细胞外基质()降解是重要步骤肿瘤细胞只有通过降解 并侵入血管随全身血液循环才能到达转移靶器官 基质金属蛋白酶()是降解 最重要的蛋白水解酶其中 和 在包括鼻咽癌在内的多种恶性肿瘤组织中高表达 与慢性鼻咽炎组相比鼻咽癌组织中 及 阳性表达率明显提高与无淋巴结转移组相比淋巴结转移组 及 阳性表达率显著升高并且低分化鳞癌高于高分化鳞癌 是在禽逆转录病毒 的研究中发现的其具有高度保守的 结合域可以结合特定序列来调节靶基因的表达 是 转录因子家族的重要成员通过与靶基因结合的顺式作用元件激活或抑制靶基因的转录并对细胞生长、分化、凋亡、造血、组织重塑、血管生成等发挥作用 已有研究证实 可以调节鼻咽癌的发展体外下调 的表达可显著抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭性 对下游靶基因转录的调节作用也受 调节本研究通过 网站(:/)收集相关数据结果显示 可以作为 的下游靶基因并在鼻咽癌组织和正常组织中差异表达 研究显示 在鼻咽癌中高表达并且能够提高鼻咽癌细胞的增殖能力抑制鼻咽癌细胞凋亡本研究显示 能够促进鼻咽癌 细胞的侵袭和迁移并提高、蛋白的表达抑制 能够降低鼻咽癌 细胞的侵袭和迁移能力并降低、蛋白的表达 为进一步探索 促进鼻咽癌细胞的迁移和侵袭转移的机制本研究在 鼻咽癌细胞中将 蛋白干扰后再次进行 实验发现干扰 蛋白表达后能够指抗 增强肿瘤细胞迁移和侵袭的能力并减弱、蛋白的表达量越来越多的研究表明 在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用 部分对 的研究已从实验室进入到临床阶段目前有很多成功的期临床试验以及正在开展的期临床试验 本研究发现 能够在体外促进鼻咽癌细胞的迁移与侵袭其机制可能是通过调节转录因子 促进细胞外基质降解过程而实现的进一步揭示了鼻咽癌细胞侵袭和转移的发生发展机制有利于对鼻咽癌疾病的认识对于寻找鼻咽癌生物标志物和新的药物治疗靶点具有指导意义参考文献:.:.:.():.:.():.:.():./.():.():.():.():.:.张欣欣郭永清叶青等.基质金属蛋白酶 和 与鼻咽癌转移的相关性研究.临床耳鼻咽喉科杂志():.白晶曹威刘安廷等.葡萄糖调节蛋白 上调 和 促进鼻咽癌细胞 的增殖与侵袭.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志():.:.:./.():.实用药物与临床 年第 卷第 期 .:./.():.左文娜朱虹金爱燕.诱导 基因对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和免疫逃避的作用.遵义医科大学学报():.孙海力林文巧李绍霄等.在鼻咽癌细胞上皮间质转化中的作用.浙江中西医结合杂志():.():.:.():.():.():.(本文编辑:高宽)收稿日期:作者单位:沈阳医学院研究生院辽宁 沈阳 沈阳医学院口腔医学院辽宁 沈阳 沈阳医学院中医药学院辽宁 沈阳 辽宁省人类族群特异性及重要疾病表型组学研究重点实验室辽宁 沈阳 沈阳医学院国际教育学院辽宁 沈阳 基金项目:辽宁省教育厅科学研究项目沈阳医学院科技基金项目()沈阳医学院硕士研究生科技创新基金项目()共同第一作者 通信作者 :./.基于网络药理学与分子对接技术探讨四氢姜黄素对肝细胞癌作用的分子机制包卓聪王庆庆贾 辉陆 瑶时 娜张 艳 摘 要 目的通过网络药理学靶点预测方法结合分子对接技术探讨四氢姜黄素抗肝细胞癌()的作用机制方法从多个数据库中获得四氢姜黄素或 潜在作用靶点通过在线富集分析平台 将核心靶点进行 功能和 通路富集分析以及可视化处理了解四氢姜黄素治疗肝细胞癌可能涉及的生物过程与信号通路采用 软件进行半柔性分子对接实验以验证药物分子与其核心靶点的结合活性结果四氢姜黄素与 共同靶点 个核心靶点共 个包括、等潜在作用靶点 分析的 条通路包括 信号通路、信号通路等 富集分析表明四氢姜黄素参与细胞对化学压力的反应、细胞对氧含量降低的反应等 分子对接结果显示四氢姜黄素与多个疾病关键靶点具有较高的结合能力对接评分较高的为四氢姜黄素与 靶点蛋白结论四氢姜黄素能够通过多靶点、多通路达到治疗肝细胞癌的目的本研究为进一步研究四氢姜黄素抗肝细胞癌的作用机制提供了参考关键词 肝细胞癌四氢姜黄素网络药理学分子对接 ()()().实用药物与临床 年第 卷第 期 .