miR-30b-5p通过Sema3A调控HUVECs细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成.pdf

收稿日期:基金项目:山西省卫计委科研项目()作者简介:李志杰(),男,研究生,主治医师,主要从事甲状腺眼病及糖尿病足病的临床与基础研究.m i R b p通过S e m a A调控H U V E C s细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成李志杰(国药同煤总医院内分泌科,山西 大同 )摘要:目的探究m i R b p对HUV E C s细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成的影响及机制.方法培养的HU V E C s细胞进行不同处理:b l a n k组(正常糖培养)、HG组(高糖培养)、HGm i m i c N C组(高糖联合m i m i c N C转染)、HGm i R b pm i m i c组(高糖联合m i R b pm i m i c转染)、HGm i R b pm i m i c o e N C组(高糖联合m i R b pm i m i c o e N C转染)、HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组(高糖联合m i R b pm i m i c o e S e m a A转染).C C K 、流式细胞术、划痕实验、血管生成实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和血管形成.q R T P C R检测m i R b p、S e m a A mR NA表达.S t a r b a s e、T a r g e t s c a n、m i R D B网站预测m i R b p与S e m a A的靶向结合位点,双荧光素酶报告实验分析m i R b p对S e m a A的靶向调控.结果与b l a n k组比较,HG组HU V E C s细胞m i R b p表达下降,细胞增殖、迁移和血管形成能力降低,凋亡率增加(均P);与HGm i m i c N C组比较,HGm i R b pm i m i c组细胞的增殖、迁移和血管形成能力增强,凋亡率降低(均P);m i R b p靶向调控S e m a A;与HGm i R b pm i m i c o e N C组比较,HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组细胞增殖、迁移和血管形成能力降低,凋亡率增加(均P).结论m i R b p通过负调控S e m a A促进高糖介导的HUV E C s细胞增殖、迁移和血管形成,抑制其细胞凋亡.关键词:糖尿病足病;m i R b p;臂板蛋白 A多肽;靶向调控;血管生成中图分类号:R 文献标志码:A文章编号:()D O I:/j c n k i n c d m m i R b pR e g u l a t e sP r o l i f e r a t i o n,A p o p t o s i s,M i g r a t i o na n dA n g i o g e n e s i s i nH U V E C s t h r o u g hS e m a AL IZ h i j i e(D e p a r t m e n t o fE n d o c r i n o l o g y,S i n o p h a r mT o n g m e iG e n e r a lH o s p i t a l,D a t o n g ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e T oe x p l o r et h ee f f e c to fm i R b po nt h ep r o l i f e r a t i o n,a p o p t o s i s,m i g r a t i o na n da n g i o g e n e s i si nh u m a nu m b i l i c a lv e i ne n d o t h e l i a lc e l l s(HUV E C s)a n di t sm e c h a n i s m s M e t h o d sHUV E C sw e r et r e a t e dw i t hn o r m a lg l u c o s e(b l a n kg r o u p),h i g hg l u c o s e(HGg r o u p),h i g hg l u c o s e c o m b i n e dw i t hm i m i c N Ct r a n s f e c t i o n(HGm i m i c N Cg r o u p),h i g hg l u c o s ec o m b i n e dw i t h m i R b p m i m i ct r a n s f e c t i o n(HGm i R b p m i m i cg r o u p),h i g hg l u c o s ec o m b i n e d w i t h m i R b p m i m i co e N C t r a n s f e c t i o n(HG m i R b p m i m i co e N Cg r o u p),o rh i g hg l u c o s ec o m b i n e dw i t hm i R b pm i m i c o e S e m a At r a n s f e c t i o n(HGm i R b pm i m i c o e S e m a Ag r o u p)C e l lp r o l i f e r a t i o n,a p o p t o s i s,m i g r a t i o na n da n g i o g e n e s i sw e r ed e t e c t e db yC C K a s s a y,f l o wc y t o m e t r y,s c r a t c ht e s t a n dt u b e f o r m a t i o na s s a y,r e s p e c t i v e l y T h ee x p r e s s i o no fm i R b pa n dS e m a A mR NA w a sd e t e c t e db yq R T P C R T h eS t a r b a s e,T a r g e t s c a na n dm i R D Bw e r ee m p l o y e dt op r e d i c tt h et a r g e t e db i n d i n gs i t e so fm i R b pa n dS e m a AD u a l l u c i f e r a s er e p o r t a s s a yw a sp e r f o r m e dt oa n a l y z et h et a r g e t e dr e g u l a t i o no fm i R b 南昌大学学报(医学版)年第 卷第期J o u r n a l o fN a n c h a n gU n i v e r s i t y(M e d i c a lS c i e n c e s),V o l N o po nS e m a A R e s u l t s C o m p a r e dw i t ht h eb l a n kg r o u p,t h ee x p r e s s i o no fm i R b pa n dt h ep r o l i f e r a t i o n,c e l lm i g r a t i o na n da n g i o g e n e s i so f c e l l sw e r e r e d u c e d,a n dt h ea p o p t o s i s r a t ew a s i n c r e a s e d i nHGg r o u p(P)C o m p a r e dw i t hHGm i m i c N Cg r o u p,t h ep r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n da n g i o g e n e s i so f c e l l sw e r e i n c r e a s e d,a n dt h ea p o p t o s i sr a t ew a sd e c r e a s e d i nHGm i R b pm i m i cg r o u p(P)m i R b pe x e r t e da t a r g e t e dr e g u l a t o r ye f f e c to nS e m a AC o m p a r e dw i t hHGm i R b pm i m i c o e N Cg r o u p,t h ep r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n da n g i o g e n e s i so f c e l l sw e r er e d u c e d,a n dt h ea p o p t o s i sr a t ew a se l e v a t e di n HGm i R b p m i m i co e S e m a Ag r o u p(P)C o n c l u s i o nm i R b pp r o m o t e sh i g hg l u c o s e m e d i a t e dp r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n da n g i o g e n e s i sa n ds u p p r e s s e sa p o p t o s i s i nHUV E C st h r o u g hn e g a t i v e l yr e g u l a t i n gS e m a AK E Y WO R D S:d i a b e t i c f o o t;m i R b p;S e m a A;t a r g e t e dr e g u l a t i o n;a n g i o g e n e s i s糖尿病足病是糖尿病患者常见的严重慢性并发症之一,患者常出现局部神经异常,伴有下肢远端外周血管病变相关的足部感染、溃疡和(或)深层组织破坏.其发病原因包括感觉运动和自主神经病变、周围 血 管 病 变、关 节 活 动 受 限 和 局 部 压 力 增加.糖 尿 病 足 病 患 者 易 出 现 糖 尿 病 足 溃 疡(D F U),若溃疡并发感染将影响伤口愈合.伤口愈合是一个复杂而有序的过程,包括凝血、炎症、细胞增殖和组织重塑四个互有重叠的阶段,其中新生血管的形成十分关键,其能够提供氧气和营养、促进碎片清除和伤口愈合.微小R NA(m i R NA s)是一种内源性非编码小R NA,长度约为 个核苷酸,通过特异性结合下游靶mR NA的 UT R区域来调节基因表达.有研究表明,糖尿病影响m i R NA s表达,而m i R NA s与糖尿病微血管和大血管并发症的发生密切相关.有研究报道,m i R b p在胰岛素敏感和胰岛素抵抗人群的皮下脂肪组织中呈差异性表达,提示m i R b p可能在糖尿病发生过程中起作用.臂板蛋白 A多肽(S e m a A)是S e m a家族的成员,其家族已鉴定出 多种类型,S e m a A在心脏发育、血管生成、肿瘤转移、破骨细胞生成和免疫调节中均发挥 作 用.本 研 究 以 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞HUV E C s为研究对象,观察m i R b p是否通过S e m a A影响HUV E C s细胞的增殖、凋亡、迁移与血管形成,旨在为糖尿病足病伤口愈合机制的研究提供实验依据.材料与方法主要试剂与仪器人脐静脉内皮细胞HUV E C s购自美国模式培养物研究所;F B S、青霉素/链霉素均购自美国G i b c o公司;DMEM培养基、T r i z o l购自美国I n v i t r o g e n公司;高糖(mm o lL)购自美国S i g m a公司;C C K 溶液及凋亡试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司;M a t r i g e l购自B e c t o n D i c k i n s o n公司;R NA提取试剂盒购自北京天根生化科技有 限 公 司;S u p e r S c r i p t 试 剂 盒、P o w e r U pTMS Y B RTMG r e e nM a s t e rm i x均购自美国赛默飞公司;荧光素酶载体p G L 及双萤光素酶报告基因检测试剂盒购自普洛麦格生物技术有限公司.L i P o f e c t a m i n e 购 自 美 国I n v i t r o g e n公 司;m i m i cN C、m i R b pm i m i c、p c D NA N C、p c D NA S e m a A均购自上海吉凯基因医学科技股份有限公司;多功能酶标仪购自美国B i o T e k公司;流式细胞仪及A B IV i i AS y s t e m均购自美国赛默飞公司.方法细胞培养与处理HUV E C s细胞用正常葡萄糖(mm o lL)或高糖(mm o lL)添加 F B S和青霉素/链霉素DMEM培养基培养,取对数期生长细胞用于后续实验.HUV E C s细胞进行种不同处理:b l a n k组:正常葡萄糖培养的HUV E C s细胞;HG组:高糖培养的HUV E C s细胞;HGm i m i c N C组:高糖培养HUV E C s细 胞 转 染m i m i c N C;HGmR b pm i m i c:高糖培养HUV E C s细胞转染m i R b pm i m i c;HGm i R b p m i m i co e N C组:高糖培养HUV E C s细胞共转染m i R b p m i m i c及p c D NA N C;HGm i R b p m i m i co e S e m a A组:高 糖 培 养HUV E C s细 胞 共 转 染m i R b pm i m i c及p c D NA S e m a A.C C K 实验各组以 个孔细胞密度接种于 孔板中,待细胞贴壁后,培养、h后加入 LC C K 溶液处理h.使用多功能酶标仪测李志杰:m i R b p通过S e m a A调控HUV E C s细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成定各孔 n m处的O D值.流式细胞术各组细胞用 胰蛋白酶消化后按照细胞凋亡试剂盒说明书,用 L结合缓冲液将细胞重悬,依 次 向 细 胞 中 加 入A n n e x i n V(L)和P I(L),并在室温下避光孵育 m i n.使用流式细胞仪检测细胞凋亡,M o d F i L T软件(版本)分析细胞凋亡率.细胞划痕实验各组以 个孔细胞密度接种于六孔板中,培养至约 融合后使用 L无菌微量移液器吸头进行划痕,用P B S清洗细胞次,并用无血清培养基继续培养.在划痕后、h分别在相同位置用倒置显微镜拍照,每组采集个独立视野图像.使用I m a g e J软件对划痕的宽度进行定量,评估迁移情况.血管形成实验 孔板中加入 L液化M a t r i g e l,将孔板置于 下,直至M a t r i g e l凝固.然后,将各组细胞接种于 孔板中.h后,使用倒置显微镜观察HUV E C s的管状分枝形成情况并拍照.使用I m a g e J软件对血管的分枝数目及长度进行量化.实时定量P C R(q R T P C R)各组以 个孔细胞密度接种于孔板中,R NA提取试剂盒提取总R NA,S u p e r S c r i p tI V试 剂 盒 进 行 逆 转 录 合 成c D NA,P o w e r U pTMS Y B RTMG r e e nM a s t e rm i x和A B IV i i AS y s t e m进行q R T P C R.P C R条件:初始变性 s,变性 s,延伸 s,循环 次.用 C T方法 进行定量,U 作为m i R b p的内参,GA P DH作 为S e m a A的 内 参.引 物 序 列 见表.表引物序列引物名称序列()m i R b p FC C GAAA C A T C C T A C A C T C A G C T AAm i R b p RC A G T G C G T G T C G T G GA G TS e m a A FC C C T G GAA G T C A T T GA C A C A GS e m a A RG G T A T G T C C T G G C C T T T G C C GGA P DH FC AAG C AA C T G T C C C T GAGGA P DH RTA GA C A GAA G G T G G C A C AU FAT T G GAA C GA T A C A GA GAA GU RG GAA C G C T T C A C GAA T T T G双荧光素酶报告实验于S t a r b a s e(h t t p s:/s t a r b a s e s y s u e d u c n/)、T a r g e t s c a n(h t t p:/www t a r g e t s c a n o r g/v e r t_/)、m i R D B(h t t p:/m i r d b o r g/)网站进行m i R b p和S e m a A的靶向结合位点预测分析,将结合序列及突变的 序列分别克 隆至 荧 光 素 酶 载 体p G L 中构建野生型(S e m a A WT)和突变型(S e m a A MUT)荧光素 酶 质 粒.将S e m a A WT或S e m a A MUT分别与m i R b pm i m i c或m i m i cN C共转染至HUV E C s细胞中,h后收集细胞,用双荧光素酶报告基因检测试剂盒评估荧光素酶活性.统计学方法采用S P S S 软件和G r a p h P a dP r i s m软件进行数据处理.所有数据均采用均值标准差表示;组间比较采用独立样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,采用T u k e y检验进行多重比较.以P 为差异有统计学意义.结果m i R b p逆转高糖对H U V E C s细胞的影响q R T P C R结果显示,HG组m i R b p表达较b l a n k组 更 低,而HG m i R b p m i m i c组m i R b p的表达较HGm i m i c N C组更高(均P).见图 A.C C K 实验结果显示,HG组较b l a n k组 细 胞 活 力 更 低,HG m i R b pm i m i c组细胞活力较HGm i m i c N C组更高(均P).见图 B.流式细胞术结果显示,HG组细胞较b l a n k组细胞凋亡率更高,HGm i R b pm i m i c组细胞凋亡率较HGm i m i c N C组更低(均P).见图 C.细胞划痕实验显示,HG组细胞较b l a n k组细胞迁移能力更低,HGm i R b pm i m i c组细胞迁移能力较HGm i m i c N C组更高(均P).见图 D.血管生成实验显示,HG组分枝数量较b l a n k组血管生成能力更少,HGm i R b pm i m i c组分枝数量较HGm i m i c N C组更多(均P).见图 E.m i R b p靶向抑制S e m a A个网站预测m i R b p的下游靶基因数目及交集情况,见图 A.m i R b p与S e m a A的结合位点,见图 B.双荧光素酶报告实验显示,m i R b p与S e m a A具有靶向结合关系(P).见图 C.q R T P C R结果显示,HG组S e m a A mR NA表达水平较b l a n k组更高,而HGm i R b pm i m i c组S e m a A mR NA表达水平较HGm i m i c N C组更低(均P).见图 D.南昌大学学报(医学版)年 月,第 卷第期*1组2组*3组2组1组4组1.51.00.50.0miR-30b-5p表达水平A48120722.01.51.00.50.0OD值*24B1组2组3组4组3组4组3组2组1组4组20151050细胞凋亡率/%C3组2组1组4组1.51.00.50.0伤口愈合比值*3组2组1组4组0 h24 hD3组2组1组4组2520151050分枝数量/个*3组2组1组4组E时间/hA:q R T P C R实验;B:C C K 实验;C:流式细胞术;D:细胞划痕实验;E:血管生成实验.组:b l a n k组;组:HG组;组:HGm i m i c N C组;组:HGmR b pm i m i c组.P.图m i R b p逆转高糖对H U V E C s细胞的影响1.51.00.50.0相对荧光酶活性*Sema3A-WT Sema3A-MUTControlmiR-30b-5p mimicC3组2组1组4组Sema3A mRNA表达水平*2.52.01.51.00.50.0DABA:个网站预测m i R b p的下游靶基因情况;B:m i R b p与S e m a A的结合位点;C:双荧光素酶实验;D:q R T P C R实验.组:b l a n k组;组:HG组;组:HGm i m i c N C组;组:HGmR b pm i m i c组;P.图m i R b p靶向负调控S e m a A过表达S e m a A部分抵消m i R b p对高糖H U V E C s细胞的保护作用q R T P C R结果显示,HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组S e m a A mR NA表达较HGm i R b pm i m i co e N C组上调(P ).见 图 A.C KK 结果显示,HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组 细 胞 活 力 较HG m i R b pm i m i c o e N C组下降(P).见图 B.流式细胞术结果显示,HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组细胞凋亡率较HGm i R b pm i m i c o e N C组增加(P).见图 C.细胞划痕实验显示,HGm i R b p m i m i co e S e m a A组细胞迁移能力较HGm i R b pm i m i c o e N C组更低(P).见图 D.血管生成实验显示,李志杰:m i R b p通过S e m a A调控HUV E C s细胞增殖、凋亡、迁移与血管形成HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组分枝数量较HGm i R b pm i m i co e N C组更少(P).见图 E.*5组分枝数量/个6组E201510506组5组6组5组0 h24 h*5组伤口愈合比值6组D0.80.60.40.20.06组5组Sema3A mRNA表达水平*A2.01.51.00.50.06组20151050细胞凋亡率/%*5组C6组5组72481.51.00.50.0OD值*241205组6组B时间/hA:q R T P C R实验;B:C C K 实验;C:流式细胞术;D:细胞划痕实验;E:血管生成实验.组:HGm i R b pm i m i c o e N C组;组:HGm i R b pm i m i c o e S e m a A组.P 与组比较.图过表达S e m a A部分抵消m i R b p对H U V E C s细胞的保护作用讨论作为细胞生理的关键调节因子,m i R NA s的紊乱可导致许多病理状态 及疾病.差异表达的m i R NA s与型糖尿病及其并发症相关,故这些m i R NA s可用于糖尿病及其并发症诊断或治疗的生物标志物.D F U患者的内皮细胞衰老且其血管生成能力不足,而内皮细胞血管生成能力与高水平葡萄糖之间存在直接联系.大量研究 显示,恢复人脐静脉内皮细胞HUV E C s的功能可以加速D F U的伤口愈合.本研究建立高糖HUV E C s细胞模型,探讨m i R b p在HUV E C s增殖、凋亡、迁移和血管生成中的作用.本研究发现,高糖培养条件下m i R b p表达水平显著下降,且HUV E C s细胞增殖、迁移和血管形成能力受到抑制,细胞凋亡率增 加,而 上 调m i R b p表 达 能 够 部 分 逆 转HUV E C s的增殖、凋亡、迁移、血管形成能力.这些研究提示,m i R b p可能通过促进血管内皮细胞的血管形成影响D F U伤口愈合的发生发展.S e m a A由结合受体n e u r o p i l i n 和信号受体p l e x i n A作为共受体,参与细胞迁移、血管生成等过程调节.此外,Z HANG等 研究显示S e m a A对糖尿病性骨病成骨分化能力具有调控作用.本研究结果显示,高糖促进S e m a A mR NA表达,而过表达m i R b p可抑制其mR NA表达;同时,双荧光素酶报告实验显示m i R b p对S e m a A存在靶向调控关系.进一步通过外源性过表达S e m a A发现,过表达S e m a A可抑制HUV E C s细胞增殖、迁移和血管形成能力,增加细胞凋亡率.这些研究 表 明m i R b p靶 向 负 调 控S e m a A,S e m a A过表达可部分抵消m i R b p对HUV E C s增殖、迁移、凋亡和血管形成能力的作用.综上,本研究在细胞水平证实m i R b p表达可减轻高糖诱导的HUV E C s细胞的损伤作用,且m i R b p的 这 种 作 用 可 能 是 通 过 负 调 控S e m a A而实现的,这将为进一步探讨糖尿病足病防治机制研究提供理论基础.然而,本研究局限于细胞水平,未来应在动物整体水平对结果进行验证.参考文献:王雪玲 ME B T/ME B O治疗糖尿病足溃疡临床疗效的M e t a分析D南宁:广西中医药大学,WAN GX,YUANCX,XUB,e t a l D i a b e t i c f o o tu l c e r s:c l a s s i f i c a t i o n,r i s kf a c t o r sa n d m a n a g e m e n tJ W o r l dJD i a b e t e s,():HO L TRIG,C o c k r a m CS,F L YV B J E R G A,e ta l T e x t b o o ko fd i a b e t e sM t he d C h i c h e s t e r,W e s tS u s s e x,UK:B l a c k w e l lP u b l i s h i n gL t d,K A W A S UM I A,S A G A W A N,HA Y A S H IS,e ta l W o u n dh e a l i n g i nm a mm a l sa n da m p h i b i a n s:t o w a r dl i m br e g e n e r a t i o ni nm a mm a l sJC u r rT o pM i c r o b i o l I mm u n o l,:G R E AV E SNS,A S HC R O F TKJ,B A GUN E I D M,e ta l C u r r e n tu n d e r s t a n d i n go fm o l e c u l a r a n dc e l l u l a rm e c h a n i s m s i nf i b r o p l a s i aa n da n g i o g e n e s i sd u r i n ga c u t ew o u n dh e a l i n gJ JD e r m a t o lS c i,():D I E N E R C,K E L L E R A,ME E S E E E m e r g i n gc o n c e p t so fm i R NAt h e r a p e u t i c s:f r o m c e l l st oc l i n i cJ T r e n d sG e n e t,():HEXY,KUAN GGY,WUYR,e t a l E m e r g i n gr o l e so f e x o 南昌大学学报(医学版)年 月,第 卷第期s o m a lm i R NA s i nd i a b e t e sm e l l i t u sJC l i nT r a n s lM e d,():e K I R B YTJ,WA L T ONRG,F I N L I NB,e ta l I n t e g r a t i v emR NA m i c r o R NAa n a l y s e s r e v e a l n o v e l i n t e r a c t i o n s r e l a t e d t o i n s u l i ns e n s i t i v i t y i nh u m a na d i p o s e t i s s u eJP h y s i o lG e n o m i c s,():YAN GK,M I R ONRJ,B I ANZ,e ta l Ab o n e t a r g e t i n gd r u g d e l i v e r ys y s t e mb a s e do nS e m a p h o r i n Ag e n e t h e r a p ya m e l i o r a t e sb o n e l o s si no s t e o p o r o t i co v a r i e c t o m i z e dm i c eJ B o n e,:T AKAMA T S U H,OKUNO T,KUMANO GOH A R e g u l a t i o no f i mm u n ec e l lr e s p o n s e sb ys e m a p h o r i n sa n dt h e i rr e c e p t o r sJC e l lM o l I mm u n o l,():L I VAK KJ,S C HM I T T G E N TD A n a l y s i so fr e l a t i v eg e n ee x p r e s s i o nd a t au s i n gr e a l t i m eq u a n t i t a t i v eP C Ra n dt h e(d e l t ad e l t aC(T)m e t h o dJ M e t h o d s,():C HE NL,HE I KK I N E NL,WAN GCL,e ta l T r e n d s i nt h ed e v e l o p m e n to fm i R NAb i o i n f o r m a t i c st o o l sJ B r i e fB i o i n f o r m,():T I WA R IA,MUKHE R J E EB,D I X I T M M i c r o R NAk e yt oa n g i o g e n e s i s r e g u l a t i o n:M i R NAb i o l o g ya n d t h e r a p yJC u r rC a n c e rD r u gT a r g e t s,():J I M N E ZL U C E NAR,C AMA R GOA,A L C A L D I A ZJF,e t a l Ap l a s m a c i r c u l a t i n gm i R NA s p r o f i l ep r e d i c t s t y p e d i a b e t e s m e l l i t u s a n d p r e d i a b e t e s:f r o m t h e C O R D I O P R E Vs t u d yJE x pM o lM e d,():C HE NYJ,WUSC,WAN G H C,e ta l A c t i v a t i o no fa n g i o g e n e s i sa n dw o u n dh e a l i n g i nd i a b e t i cm i c eu s i n gNO d e l i v e r yd i n i t r o s y l i r o nc o m p l e x e sJ M o lP h a r m,():B R EM H,J A C O B ST,V I L E I KY T EL,e ta l W o u n d h e a l i n gp r o t o c o l s f o rd i a b e t i c f o o t a n dp r e s s u r eu l c e r sJS u r gT e c h n o l I n t,:HUAN GX,L I AN GP F,J I AN GB M,e ta l H y p e r b a r i co x y g e np o t e n t i a t e sd i a b e t i cw o u n dh e a l i n gb yp r o m o t i n gf i b r o b l a s tc e l lp r o l i f e r a t i o na n de n d o t h e l i a lc e l la n g i o g e n e s i sJL i f eS c i,:WAN GTY,WAN G W,L IFF,e ta l M a g g o te x c r e t i o n s/s e c r e t i o n sp r o m o t ed i a b e t i cw o u n da n g i o g e n e s i sv i a m i R a/a T S P a x i sJ D i a b e t e s R e s C l i n P r a c t,:XUY,YU T,HEL,e ta l I n h i b i t i o no fm i R NA pe n h a n c e sd i a b e t i cw o u n dr e p a i rv i au p r e g u l a t i o no fP T E NJA g i n g(A l b a n yNY),():T RANTS,KO L O D K I NAL,B HA R A DWA JRS e m a p h o r i nr e g u l a t i o no f c e l l u l a rm o r p h o l o g yJ A n n uR e vC e l lD e vB i o l,:Z HAN G LX,Z HE N G LL,L IC,e ta l S e