高铜对雏鸡血清中免疫球蛋白含量的影响.doc

2010届本科毕业论文（设计）高铜对雏鸡血清中免疫球蛋白含量的影响学生姓名： 所在院 所学专业： 导师姓名 完成时间： 2011年6月 13摘 要选用1日龄艾维茵肉鸡健雏420只，随机分为7组，分别喂以对照日粮(Cu 11mg/kg)、高铜日粮(Cu 100mg/kg，高铜组；Cu 200mg/kg，高铜组；Cu 300mg/kg，高铜组；Cu 400mg/kg，高铜组；Cu 500mg/kg，高铜组；Cu 600mg/kg，高铜组)六周，以免疫比浊法研究日粮铜添加水平对雏鸡血清中免疫球蛋白含量的影响。结果显示高铜、组雏鸡血清中免疫球蛋白含量在整个实验期间与对照组比较差异均不显著（P0.05）；日粮含铜超过300mg/kg时，雏鸡血清中免疫球蛋白含量程度不同地降低，与日粮含铜量呈负相关。表明，日粮中低于300mg/kg的高铜量对雏鸡血清中免疫球蛋白的合成无显著影响，超过300mg/kg的高铜量对免疫球蛋白合成有程度不同的抑制作用。 关键词：肉鸡，高铜，血清，免疫球蛋白Abstract420 one-day-old Avian chickens were randomly divided into seven groups, and fed on diets as follows: control group(Cu 11mg/kg) and Cu-excess groups（Cu 100mg/kg,Cu-excess group ; Cu 200mg/kg,Cu-excess group ; Cu 300mg/kg,Cu-excess group ; Cu 400mg/kg,Cu-excess group ; Cu 500mg/kg, Cu-excess group ; Cu 600mg/kg, Cu-excess group ）respectively for six weeks. Effect of dietary different quantity of copper on Immunoglobulin level of blood serum in chicken was studied by Immunoturbidimetry.The results showed that Immunoglobulin contents of blood serum in group、 had no obvious difference in whole experiment period in comparison with those of control group(P0.05); Immunoglobulin contents of 、 groups were decreased significantly in comparison with those of control group. The above-mentioned results showed that 100、200、300mg/kg Cu had no obvious influence on Immunoglobulin synthesis of blood serum in chicken, and dietary Cu more than 300mg/kg could decrease it in different degrees.Key words:Chicken; Copper-excess;Blood Serum;Immunoglobulin目 录前 言31 材料与方法41.1 材料41.1.1实验动物41.1.2试验日粮41.2试验方法动物分组与饲养管理51.3 采取样品及样品制备51.4血清中免疫球蛋白含量51.5数据统计与分析62结果与分析62.1临床观察62.2 血清中免疫球蛋白的变化6221IgG:6222 IgA:7223 IgM:83讨论9参考文献11致谢12前 言铜作为机体必需的微量元素之一，在维持正常的免疫功能方面具有重要作用1。铜对体液免疫功能影响的研究主要集中在铜缺乏对血清中免疫球蛋白的影响，业已证实，铜缺乏小鼠2-3和大鼠4注射绵羊红细胞后，抗体形成细胞应答反应降低，结果导致铜缺乏小鼠和大鼠脾脏抗体产生受阻。进一步的研究指出，铜缺乏大鼠5注射绵羊红细胞后血清抗体效价下降，以及对其它一种细胞依赖抗原的血清免疫球蛋白产生减少或抗体效价降低6。严重缺铜大鼠IgM含量减少7。喂以半纯合日粮，日龄牛补铜（11.5mg/kg日粮）组血清IgM含量和第天对溶血性巴氏杆菌抗原特异性抗体含量较不补铜组高8。牛缺铜时对注射流产杆菌的抗体IgG效价降低9。在人方面，刘纯锐等10报道低铜儿童（0.05）；高铜组在2、4周龄时差异不显著（P0.05），6周龄时差异显著（P0.05），4、6周龄时差异显著（P0.05）；高铜组在2周龄时差异显著（P0.05），在4、6周龄时差异极显著（P0.05）；高铜组在2、4周龄时差异不显著（P0.05），6周龄时差异显著（P0.05）；高铜组在2、4周龄时差异显著（P0.05），在6周龄时差异极显著（P0.05）；高铜组在2、4周龄时差异不显著（P0.05），在6周龄时差异显著（P0.05），在6周龄时差异极显著（P0.0）；高铜组在2周龄时差异显著（P0.05），在4、6周龄时差异极显著（P0.0）。结果表明:日粮含铜低于300mg/kg时,对雏鸡血清中IgM的含量无显著影响；当铜含量超过300mg/kg以上时，雏鸡血清中免疫球蛋白IgM的含量程度不同地低于对照组，影响了雏鸡的免疫功能。详情见表4，图3。表4 高铜对雏鸡血清中IgM含量的影响（mg/ml）组别2周4周6周对照组1.070.20AB1.130.15AC1.220.12AC组1.090.04A1.170.05A1.240.23A组1.080.06A1.160.10ADa1.230.03AD组1.050.77Ab1.120.28Ca1.190.06Cabc组1.050.96AC1.110.02Cbcd1.180.17Bcd组1.030.36Cb1.080.22Bc1.150.10BE组1.020.11bc1.060.15B1.120.12E图3高铜对雏鸡血清中IgM含量的影响（mg/ml）3讨论免疫系统担负着调节细胞间多种生理功能的任务，免疫球蛋白就是发挥这些重要调节功能的蛋白质之一。免疫球蛋白主要是由脾脏淋巴结和淋巴组织内的浆细胞所产生的，是具有抗体活性、能与相应抗原呈特异性结合的蛋白质，普遍存在于血液、组织液及外分泌液中，在免疫应答中产生重要作用。IgG、IgA、IgM是在机体体液免疫中较为重要的三种特异性抗体。IgG在血清中含量最高，约占免疫球蛋白总量的75%，由于其相对较小，较其他免疫球蛋白更易从血管渗出，因而IgG更易参与组织间和体表防御作用；IgG是血液中主要抗体成分，发挥重要的免疫学效应，如调理吞噬、ADCC、沉淀抗原、中和病毒和毒素的作用，能经过经典途径激活补体，是机体抗感染的主要抗体11。IgA是富含碳水化合物的免疫球蛋白，主要是由肠系膜淋巴组织中的浆细胞所产生的，血清IgA具有多种抗体活性，占血清免疫球蛋白总量的10%左右；IgA能中和病毒，对机体局部抗病毒感染起重要作用11。IgM是B细胞产生最早的免疫球蛋白分子，也是在B细胞表面表达最早的抗体，是B细胞表面的抗原受体，是B细胞分化过程中主要的表面标志；IgM抗体中和病毒的能力不如IgG抗体，但固定补体的能力很强，故对依赖补体破坏病毒感染细胞以及对包膜病毒的溶解均有重要作用11。本实验结果表明，高铜、组雏鸡血清中免疫球蛋白含量在整个试验期间与对照组比较差异均不显著，高铜、组雏鸡血清中免疫球蛋白含量均随日粮中含铜量的增加、雏鸡日龄的增长，程度不同地低于对照组，差异显著或极显著。由此我们可以看出，一定量的高铜（低于300mg/kg）对雏鸡血清中免疫球蛋白含量无显著影响，进一步表明了一定量的高铜对雏鸡血清中B淋巴细胞含量及体液免疫功能无明显影响；随着饲用高铜日粮时间的延长，高铜、组雏鸡血清中免疫球蛋白含量与对照组比较差异显著或极显著（P0.05或P0.01），表明日粮中超过一定量（300mg/kg以上）的高铜会程度不同地抑制雏鸡血清中免疫球蛋白的生成，抑制了雏鸡的体液免疫功能。作者认为高铜对雏鸡血清中免疫球蛋白含量影响结果不同的原因可能是：饲喂一定量高铜日粮后，雏鸡血清铜和组织中铜含量增高，铜作为外界抗原刺激脾脏边缘区巨噬细胞的吞噬，吞噬细胞携带抗原至白髓的脾小结处，刺激休止期淋巴细胞由期向期过渡，导致淋巴细胞分化增殖，形成生发中心，之后B淋巴细胞由脾小结处迁移至边缘区和红髓，在抗原刺激下增殖分化为浆细胞11，浆细胞在胞核指导下，线粒体提供能量，在粗面内质网中合成IgG、IgA、IgM等免疫球蛋白分子，导致雏鸡血清中免疫球蛋白含量增高，本实验300mg/kg以下高铜组对雏鸡血清中免疫球蛋白含量的影响与对照组比较差异不显著，原因可能是淋巴细胞对一定量的高铜(300mg/kg以下)不敏感,这与Dove给伺喂5mg/kg和250mg/kg铜猪注射SRBC,铜添加水平不影响SRBC抗体效价12具有相似性。法氏囊是禽类一个重要的中枢免疫器官,为禽类所特有13,它对体液免疫的形成和功能具有特别重要的作用；禽类B淋巴细胞在法氏囊中发育成熟后，迁移至外周免疫器官（脾脏），激活分化为浆细胞，产生抗体参与体液免疫；脾脏中B细胞约占60%，是产生抗体的主要基地，脾脏淋巴小结是B淋巴细胞的寄宿点。根据结构功能原理，当免疫细胞结构受到破坏时，其免疫功能也会受到损伤。400mg/kg以上高铜组程度不同地抑制了雏鸡血清中免疫球蛋白的含量，原因可能是铜过量雏鸡血清中铜含量显著高于正常组，血清铜蓝蛋白活性显著低于对照组，导致雏鸡体内自由基或和过氧化物堆积，损害膜系统和膜结构，组织细胞出现程度不同的病变，淋巴免疫器官的实质细胞出现变性坏死14-15，法氏囊、脾脏等免疫器官组织结构发生病理变化,致使淋巴细胞增殖、分化、成熟过程发生障碍，浆细胞数量生成减少，雏鸡血清中免疫球蛋白含量相应降低,导致机体体液免疫功能受损。这与吴建设等报道肉仔鸡饲喂的低铜（3.03mg/kg）半纯合日粮中，添加440mg/kg铜会导致B细胞对LPS刺激的应答反应降低，同时对马立克氏病弱毒疫苗（HVT）和新城疫弱毒疫苗的抗体ELISA效价也降低16具有相关性。生产中，高铜作为雏鸡的促生长剂得到了广泛的应用。本实验结果表明，300mg/kg以下的高铜量对雏鸡机体血清中免疫球蛋白含量无显著影响，而高于300mg/kg的高铜量导致雏鸡血清中免疫球蛋白含量程度不同地低于对照组。同时有资料显示添加高铜时，血清中部分酶的活性发生改变14-15；也有报道当铜添加量达到150mg/kg时，肉铜含量明显上升17。所以补铜必须慎重，防止过量补铜对动物机体的毒副作用，及间接对人类健康的危害。参考文献1Bonham, 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