志贺氏菌的检验.pptx

志贺氏菌的检验志贺氏菌的检验一、生物学特性一、生物学特性 （一）形态与染色（一）形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛有菌毛 23um*0.50.7um（二）培养特性（二）培养特性1、需需氧氧或或兼兼氧氧性性厌厌氧氧，最最适适温温度度37，PH6。47.82、在在普普通通琼琼脂脂和和SS平平板板上上，能能形形成成圆圆形形、微微凸凸、光光滑滑湿湿润润、无无色色半半透透明明、边边缘缘整整齐齐、在中等大小的菌落在中等大小的菌落3、宋宋氏氏志志贺贺氏氏菌菌菌菌落落较较大大，较较不不透透明明，粗粗糙糙而而扁扁平平，在在SS平平板板上上可可迟迟发发酵酵乳乳糖糖，菌菌落落呈玫瑰红色。呈玫瑰红色。4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。（三）生化反应（三）生化反应1、发发酵酵葡葡萄萄糖糖，产产酸酸不不产产气气，除除宋宋氏氏志志贺贺氏氏菌外，均不发酵乳糖。菌外，均不发酵乳糖。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不不产产生生H2S，不不分分解解尿尿素素，V-P试试验验阴阴性性，不能利用柠檬酸盐。不能利用柠檬酸盐。4、甲基红阳性，靛基质不定。、甲基红阳性，靛基质不定。5、痢痢疾疾志志贺贺氏氏菌菌不不分分解解甘甘露露醇醇，其其它它（福福氏氏、鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。二、志贺氏菌的致病性与食物中毒二、志贺氏菌的致病性与食物中毒（一）传染源食物、病人、粪便、苍蝇等食物、病人、粪便、苍蝇等（二）志贺氏菌的致病性（二）志贺氏菌的致病性致病因素：致病因素：侵袭力、菌体内毒素、外毒素侵袭力、菌体内毒素、外毒素临床症状临床症状A、急性细菌性痢疾：、急性细菌性痢疾：急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。B、慢性细菌性痢疾：、慢性细菌性痢疾：慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。GB/T4789.5-2003GB/T4789.5-2003中志贺氏菌检验程序中志贺氏菌检验程序三、志贺氏菌的检验（一）实验内容（一）实验内容样品处理样品处理选择性增菌选择性增菌选择性平板分选择性平板分离离生化学试验生化学试验结果报告结果报告第一次第一次 样品处理和增菌培养样品处理和增菌培养预先准备并灭菌的器材预先准备并灭菌的器材 规格名称数量1、18180mm试管 6支2、10ml移液管 1支3、直径为90mm平皿 2套4、250ml量筒与500毫升广口瓶酌情 7、不锈钢汤匙1把，玻璃珠，杜氏小管 酌情（一）样品处理（一）样品处理 无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min。（二）增菌培养（二）增菌培养放于36培养68h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。第二次第二次 接种选择性平板进行分离培养接种选择性平板进行分离培养（一）接种选择性平板（一）接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂琼脂平板平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或EMB（伊红美蓝）琼脂平板各1个。（二）培养（二）培养 放于36培养1824h。结果结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落HE平板原理及反应平板原理及反应 发酵乳糖的肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌 不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色可能就是志贺氏菌 SS平板原理及反应平板原理及反应SS Agar(Salmonella Shigella Agar)大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌 是沙门氏菌。有黑色中心。如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了麦康凯琼脂平板麦康凯琼脂平板 菌落为粉红色，半透明的，菌落为粉红色，半透明的，可能为志贺氏菌可能为志贺氏菌EMB平板照片及原理平板照片及原理 菌落为无色半透明状，菌落为无色半透明状，可能为志贺氏菌可能为志贺氏菌 大肠杆菌大肠杆菌第三次第三次 初步生化试验初步生化试验（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36培养1824h，分别观察结果。（二）培养（二）培养 放于36培养1824h。结果结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力志贺氏菌在志贺氏菌在TSITSI生长的结果（现象）：生长的结果（现象）：（1 1）斜面产碱仍为红色或粉红色；）斜面产碱仍为红色或粉红色；（2 2）底层产酸不产气，变黄色；）底层产酸不产气，变黄色；（3 3）不产）不产H H2 2S S，不出现黑色。，不出现黑色。志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无动力。长，无动力。三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验的原理）琼脂试验的原理2志贺氏菌志贺氏菌3沙门氏菌沙门氏菌4大肠杆菌大肠杆菌 葡萄糖半固体原理及结果葡萄糖半固体原理及结果。1.铜绿假单胞菌2.志贺氏菌 3.枯草芽孢杆菌 在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：（1）在）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物表面上呈现蔓延生长的培养物（2）在）在1824h发酵乳糖、蔗糖的培养物发酵乳糖、蔗糖的培养物（3）不不分分解解葡葡萄萄糖糖，只只在在半半固固体体培培养养基基表表面面生生长长的培养物。的培养物。（4）产气的培养物）产气的培养物（5）有动力的培养物）有动力的培养物（6）产）产H2S的培养物的培养物第四天、进一步的第四天、进一步的生化试验生化试验 凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和生化分型实验。（一）进一步生化试验即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七叶苷的分解，36培养。志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。接种生化培养基接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,接种到：5%乳糖发酵、甘露醇、棉籽糖和甘油发酵、靛基质试验。见P167：根据不同生化反应结果，可分为A群（痢疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。（二）生化分群试验各项生化试验现象葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落。西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。KCN：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。水杨苷和七叶苷：阳性者产气。（三）结果报告（三）结果报告 综合生化试验结果判定菌型并作出报告