HPLC法同时测定地氯雷他定糖浆中地氯雷他定与苯甲酸的含量.pdf

中 国 药 品 标 准 ，（）第一作者简介：张红梅，副主任药师；研究方向：药品分析与检验。：；：法同时测定地氯雷他定糖浆中地氯雷他定与苯甲酸的含量张红梅，魏永涛，王桂英（济南市食品药品检验检测中心，济南 ）摘要目的：建立高效液相色谱法同时测定地氯雷他定糖浆中地氯雷他定和苯甲酸的含量。方法：采用 （，）色谱柱，以乙腈 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调 至 ）（）为流动相；流速：，检测波长：，柱温：。结果：地氯雷他定在 范围内线性关系良好（），苯甲酸在 范围内线性关系良好（），平均回收率分别为 （，）、（，）；地氯雷他定糖浆中地氯雷他定和苯甲酸的含量分别为 、（批号：），、（批号：），、（批号：）。结论：本方法简便快速，重复性良好，结果准确可靠，可用于地氯雷他定糖浆中地氯雷他定和苯甲酸的含量测定。关键词：地氯雷他定糖浆；地氯雷他定；苯甲酸；高效液相色谱法中图分类号：文献标识码：文章编号：（）：，（，）：（，）（）（）；：，：，：（），（），（，），（，），（：），（：），（：）：，：；地氯雷他定是氯雷他定在体内脱甲酸乙酯而得到的活性代谢产物，为非镇静性的长效三环类抗组胺药，可通过选择性地拮抗外周 受体，缓解季节性过敏性鼻炎或慢性特发性荨麻疹的相关症状，具中 国 药 品 标 准 ，（）有抗过敏作用强、起效快、药效持久等作用特点 。苯甲酸钠为食品和药品中的常用防腐剂，被广泛使用，也是地氯雷他定糖浆中的防腐剂，但过量摄入防腐剂会对人体产生一定的毒性 ，中华人民共和国药典（简称 中国药典）规定糖浆剂中苯甲酸的用量不得超过 （其钠盐的用量按酸计）。目前，地氯雷他定原料及相关制剂标准均未收入 中国药典，糖浆制剂部分注册标准只关注了有关物质的测定，但没有对防腐剂苯甲酸进行测定，能同时测定地氯雷他定和苯甲酸含量的方法也尚未见有文献报道，本文建立了同时测定地氯雷他定糖浆中地氯雷他定和苯甲酸钠含量的 法，并进行了方法学考察，操作简单，测定结果可靠，重复性良好，可作为地氯雷他定糖浆的质量控制方法之一。仪器与试药 高效液相色谱仪（岛津公司，带二极管阵列检测器），型十万分之一电子天平（梅特勒公司），去离子水发生器（密理博公司）。地氯雷他定对照品（批号 ，含量 ）与苯甲酸对照品（批号 ，含量 ）均购自中国食品药品检定研究院；地氯雷他 定 糖 浆 批（批 号 、，规格 ：）与阴性空白糖浆 批（批号 ）均由 厂家提供；乙腈、甲醇与磷酸为色谱纯、磷酸二氢钾为分析纯（国药集团）；试验用水为超纯水。方法与结果 溶液的制备 混合对照品溶液精密称取地氯雷他定对照品 ，苯甲酸对照品 ，置同一 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液 ，置 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。供试品溶液精密量取样品 置 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。阴性空白溶液精密量取空白糖浆 置 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。色谱条件及系统适用性试验色谱柱：（，）；流动相：乙腈 磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调 至 ）；流速：；检测波长：；柱温：；进样量：。理论板数按地氯雷他定峰计不低于 ，地氯雷他定峰与苯甲酸峰及相邻杂质峰之间的分离度均不低于 。色谱图见图。01234567891011121314151617181920010 00020 00030 00040 00050 00060 00070 00080 00090 000100 000110 000120 000130 000140 000150 000ABC1221U/Vt/min 对照品溶液（）供试品溶液（）阴性空白溶液（）地氯雷他定（）苯甲酸（）图 色谱图 方法学考察 线性关系考察精密量取“”项下混合对照品储备液 ，分别置 、量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得地氯雷他定与苯甲酸的回归方程分别为：结果表明，地氯雷他定在 、苯甲酸在 浓度范围 中 国 药 品 标 准 ，（）内线性关系良好。精密度试验取混合对照品溶液照上述色谱条件测定，连续进样 次，以峰面积考察精密度，结果地氯雷他定峰与苯甲酸峰的峰面积 （）分别为 、，表明仪器精密度良好。重复性试验取同一批氯雷他定糖浆（批号 ）份，按照“”项下制备供试品溶液，照上述色谱条件进行测定，分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液各 ，注入液相色谱仪测定，以外标法计算含量，结果供试品溶液中地氯雷他定含量的 为 （），苯甲酸含量的 为 （），表明该方法重复性良好。稳定性试验取同一供试品溶液，照上述色谱条件分别于 、，取 注入液相色谱仪测定，结果地氯雷他定的峰面积 为 （），苯甲酸的峰面积 为 （），表明供试品溶液中地氯雷他定与苯甲酸在 内保持稳定。定量限与检测限取线性关系考察中的最低混合对照品溶液经逐步稀释后测定，以信噪比 时的浓度为定量限浓度，时的浓度为检测限浓度，结果显示：地氯雷他定的定量限为 ，检测限为 ；苯甲酸的定量限为 ，检测限为 。回收率试验精密量取空白糖浆 ，分别置于个 量瓶中，平均分成三组，每组分别加入“”项下的混合对照品储备液 、，用流动相稀释至刻度，摇匀，取续滤液，按上述色谱条件进行测定，按标准曲线计算含量求回收率，结果见表 。表 回收率试验结果 化合物（）对照品加入体积（）对照品加入量（）测得量（）回收率（）平均回收率（）地氯雷他定 （）苯甲酸 （）样品测定取本品 批按照“”项所述的方法制备供试品溶液（每批 份）。按上述色谱条件，分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液各 测定，以外标法计算地氯雷他定和苯甲酸的含量，地氯雷他定按百分含量计算，苯甲酸以 糖浆中含有的克数计算，结果见表 。讨论 测定波长的选择取地氯雷他定与苯甲酸对照品溶液，分别置紫外分光光度计于 波长范围内进行扫描，结果显示地氯雷他定在（）处有最大吸收，苯甲酸在（）处有最大吸收，结合两主峰在 、下高效液相色谱中的色谱峰峰形、分离度、理论塔板数、灵敏度等，选择 作为测定波长，这时两主峰峰形对称性较好，理论塔板数、灵敏度均较高。流动相的选择参考文献 与地氯雷他定相关制剂的注册标准 ，本试验分别考察了以甲醇 磷酸盐缓中 国 药 品 标 准 ，（）冲液、乙腈 磷酸盐缓冲液、乙腈 磷酸盐离子对试剂、甲醇 三氟醋酸为流动相，以供试品溶液中地氯雷他定与苯甲酸及相邻杂质峰的分离情况、拖尾因子、理论塔板数、灵敏度等为考察指标，最终选择乙腈 磷酸盐缓冲液为流动相；并对磷酸盐缓冲液的浓度（）和 值（）进行了考察，结果表明磷酸盐浓度影响较小，但随着盐浓度增大，地氯雷他定峰的峰形对称性相对更好；值对地氯雷他定峰影响较大，不仅影响其峰形对称性，还影响其出峰时间。结合考察指标和两主峰出峰时间最后选择乙腈 磷酸盐缓冲液（）（）为流动相，流速为 ，这时两主峰色谱效果更好，且在 内全部流出。表 样品含量测定结果 批号（）地氯雷他定（）平均含量（）苯甲酸（）（）平均含量（）（）色谱柱与柱温的选择地氯雷他定与苯甲酸都含有苯环，但分子量相差较大，用 色谱柱，地氯雷他定出峰很慢，峰形展开很宽；用 色谱柱，苯甲酸出峰很快，易受溶剂峰的干扰；后选择苯基柱色谱效果理想（见图 ），并比较了 （，）与 （，）色谱柱，测定结果无明显影响。试验中还考察了 、等柱温的影响，结果表明温度影响较小，最后选择常用的 作为柱温条件。本试验建立的同时测定地氯雷他定糖浆中地氯雷他定和苯甲酸的高效液相色谱法，经方法学考察表明所建立的方法操作简便，重复性良好，结果准确可靠，可为地氯雷他定糖浆的质量控制和安全用药提供参考。参考文献 徐道华第三代抗组胺药地氯雷他定 中国新药杂志，（）：，（）：王思文，巩江，高昂，等防腐剂苯甲酸钠的药理及毒理学研究 安徽农业科学，（）：，：，（）：刘天意 食品防腐剂苯甲酸钠的作用机理、毒性及其检测方法综述 现代食品，（）：，（）：中华人民共和国药典 年版四部 ：杜晓琳，雍小兰，刘利 法测定地氯雷他定片的含量 解放军药学学报，（）：，（）：李龙，郭伟，于秀丽，等 法测定地氯雷他定中的有关物质 中国药科大学学报，（）：，（）：江强，李进，祝智，等地氯雷他定糖浆中苯甲酸钠含量测定 广东化工，（）：，（）：国家食品药品监督管理局国家药品标准 国家食品药品监督管理总局国家药品标准 （收稿日期：）