HBV血清学标志物联合HBV-DNA定量检测在HBV感染诊断中的临床意义.pdf

论著 临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2023年第39卷第26期中国社区医师2023年第39卷第26期临床对于乙型肝炎病毒(HBV)感染程度、传染性的评估，主要采用血清学标志物、HBV-DNA定量检测。其中血清学标志物的检测手段较为简单，结果读取速度快，在大批量HBV感染筛查中应用较为广泛1。但是无法准确体现HBV-DNA具体的复制情况，无法对不同阶段感染情况鉴别诊断提供参考，尤其是对于鉴别HBV突变株，诊断效果具有局限性2。HBV-DNA定量检测有着一定的优势，目前将2种方法联合应用，是HBV感染诊断的重要研究方向3。本研究旨在探讨HBV血清学标志物联合HBV-DNA定量检测在HBV感染诊断中的临床意义，现报告如下。资料与方法回顾性分析2021年3月2022年10月于灌南县第一人民医院行进行 HBV 血清标志物及 HBV-DNA定量检测的1 120例患者的临床资料，按照HBV血清标志物检查结果分为大三阳组(n=320)、小三阳组(n=360)、其他组(n=440)。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)、乙肝核心抗体(抗-HBc)阳性为大三阳；HBsAg、抗-HBc、乙型肝炎 E 抗体(抗-HBe)阳性为小三阳。参与该研究的患者均已签署知情同意书并保存，该研究经灌南县第一人民医院伦理审批通过。方法：三组患者入院后，空腹时采集肘正中静脉血 2 mL，将血清保存在-18环境中待检。血 清 HBV-DNA 定 量 检 测：使 用 100 L 血 清 与DNA 浓缩液 100 L 混合均匀，离心 10 min，离心半径 8.5 cm，转速 12 000 r/min。离心结束后，将doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2023.26.036摘要目的：分析乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物联合HBV-DNA定量检测在HBV感染诊断中的应用效果。方法：回顾性分析2021年3月2022年10月于灌南县第一人民医院行进行HBV血清标志物及HBV-DNA定量检测的1 120例患者的临床资料，按照HBV血清标志物检查结果分为大三阳组(n=320)、小三阳组(n=360)、其他组(n=440)，比较三组HBV-DNA检验结果。结果：HBV-DNA阳性率、HBV-DNA定量均为大三阳组小三阳组其他组，差异有统计学意义(P0.05)。1 120张化验单中，550例为HBV-DNA阳性样本，其中HBsAg阳性率为96.4%(530/550)，HBeAg阳性率为40.0%(220/550)。结论：HBV血清标志物、HBV-DNA定量检测在临床上联合应用，能为乙型肝炎诊断提供准确参考，有利于临床筛选、诊断和鉴别HBV感染。关键词血清学标志物；HBV-DNA；定量检测Clinical Significance of HBV Serological Markers Combined with HBV-DNA Quantitative Detection in Diagnosis ofHBV InfectionYuan LiyunCentral Laboratory,Lianyungang City Guannan County First Peoples Hospital,Lianyungang 222500,Jiangsu Province,ChinaAbstractObjective:To analyze the application effect of hepatitis B virus(HBV)serological markers combined with HBV-DNAquantitative detection in the diagnosis of HBV infection.Methods:The clinical data of 1 120 patients who underwent HBVserological markers combined with HBV-DNA quantitative detection in the Guannan County First Peoples Hospital from March2021 to October 2022 were retrospectively analyzed.According to the results of HBV serological markers,the patients weredivided into large three positive group(n=320),small three positive group(n=360)and other group(n=440).The results of HBV-DNA test in the three groups were compared.Results:The positive rate of HBV-DNA and the quantification of HBV-DNA wereranked as follows:large three positive group small three positive group other group,and the difference was statisticallysignificant(P0.05).Among the 1 120 test sheets,550 cases were HBV-DNA positive samples,of which the positive rate ofHBsAg was 96.4%(530/550)and the positive rate of HBeAg was 40.0%(220/550).Conclusion:The combined application of HBVserological markers and HBV-DNA quantitative detection in clinical setting can provide an accurate reference for the diagnosis ofhepatitis B,and is conducive to clinical screening,diagnosis and identification of HBV infection.Key wordsSerological markers;HBV-DNA;Quantitative detectionHBV血清学标志物联合HBV-DNA定量检测在HBV感染诊断中的临床意义袁立云222500连云港市灌南县第一人民医院中心实验室，江苏 连云港104论著 临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2023年第39卷第26期中国社区医师2023年第39卷第26期上层清液去除后，将 20 L HBV-DNA 提取液放入，通过振荡的方式混合均匀，煮沸10 min，再离心8 min，速度为1 200 r/min，取上层清液备用。使用PCR反应管，将已经处理好的5 L样本、5 L标准品同时加入，离心30 s，转速为5 000 r/min，处理结束后放入样品槽。调节反映参数，结束后读取荧光值。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对乙肝血清学标志物进行检验，操作遵试剂说明书进行。观察指标及结果判定：HBV-DNA：500 IU/mL为阳性，500 IU/mL 为阴性。血清学标志物：HBsAg0.2 ng/mL为阴性，0.2 ng/mL为阳性；抗-BHs10 mIU/mL 为 阳 性，10 mIU/mL 为 阴 性；抗-HBc0.9 PEIU/mL 为阳性，0.9 PEIU/mL 为阴性；抗-HBe0.3 PEIU/mL 为阴性，0.5 PEIU/mL为阳性。统计学方法：数据应用SPSS 20.0软件分析；计量资料以xs表示，采用方差分析；计数资料以n(%)表示，采用2检验；两两比较采用Bonferroni法校正；P0.05为差异有统计学意义。结果三组HBV-DNA定量结果比较：HBV-DNA阳性率、HBV-DNA定量均为大三阳组小三阳组其他组，差异有统计学意义(P0.05)。见表1。HBV-DNA 阳性患者 HBsAg、HBeAg 阳性率分析：1 120例患者中，550例为HBV-DNA阳性样本，其中HBsAg阳性率为96.4%(530/550)，HBeAg阳性率为40.0%(220/550)。见表2。讨论乙型肝炎(简称乙肝)是临床常见的慢性传染病之一，患病后，患者常表现为较为明显的肝区疼痛、腹胀、恶心、乏力等症状，严重时还会导致肝功能异常并出现蜘蛛痣、脾大等。中国作为乙肝的高发区，发病率在世界上居首位，每年约有25万的患者因患乙肝或是乙肝导致的肝衰竭等疾病死亡4。同时，由于乙肝有传播速度快、治愈时间长的特点，不仅威胁人们的健康，也对社会医疗体系造成了较大负担。人体感染HBV后，免疫应答会引发免疫杀伤，且免疫功能会受感染程度、病程情况有较大的影响5-6。一旦免疫功能较低，病毒持续复制，生成 HBeAg，即使在免疫功能提升、病情有所好转的情况下，抗-HBe为阳性，HBV的复制也会随之减弱。目前，林敏全等7研究发现，血清标志物能够对HBV免疫力的判定起到决定作用，而HBV-DNA可反映病毒复制情况。因此，临床上正在深入研究将2种方法联合应用于HBV感染的疾病筛查和诊断中，以期为临床疾病诊断、鉴别等提供一定参考。以往常用的HBV血清学标志物检测方法，其主要使用ELISA法进行检测，所有检测操作只需要通过对应的试剂完成即可，该方法价格低廉，操作方便，接受度高8。通过血清学标志物检测，可以对HBV感染情况进行间接反映，能够满足临床初步筛查的基本需求，在大批量HBV感染筛查中较为常用，已经成为临床上不可缺少的一种检测手段。但是该方法的缺陷也较为明显，即无法将患者体内HBV的复制情况、传染所具备的危害性客观、动态、及时地反映出来，导致无法及时明确病患本身所处的疾病发展阶段，部分患者HBV复制期并不会表现出明显症状，等到发现时为时已晚，单独HBV血清标志物检测容易错误判断疾病的进展，导致疾病得不到应有的重视，或者是无法判断治疗效果，影响后续的治疗，甚至可能造成患者周边高危人群的大范围感染等问题9。同时，ELISA试剂盒检测过程中也会受到操作以及熟练度等多种人为或者客观因素的影响，造成检测结果不准确，主要包括：ELISA法操作过程中，可能会受到多种因素的影响，如温度、污染情况、孵育时间等，导致显色弱的假阳性情况。因此，对于 HBV 的ELISA检测结果中的低水平阳性值，要实施双孔甚至三孔来重复实验，或者是中和确认实验。目前具体实践过程中，主要是应用时间分辨荧光免疫分析技术，由于设备属于全自动检测设备，可以稳定运行，提供表1三组HBV-DNA定量结果比较组别nHBV-DNAHBV-DNA定量阳性n(%)(xs，IU/mL)大三阳组320300(93.75)725.3663.46小三阳组360170(42.22)*532.3852.71*其他组44020(4.55)*#212.5524.87*#2/F3.2503.860P0.0050.003注：与大三阳组比较，*P0.05；与小三阳组比较，#P0.05表2HBV-DNA阳性患者HBsAg、HBeAg阳性率分析(n)HBV-DNAHBsAgHBeAg阳性阴性阳性阴性阳性55053020220330阴性570320250130440合计1 120850270350770105论著 临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2023年第39卷第26期中国社区医师2023年第39卷第26期可靠试验条件，有效避免了污染等问题对结果的影响，降低了检测误差。急性乙肝早期，可以通过该方法对HBsAg进行准确检测，对感染情况进行确定，有效缩短窗口期。但是低浓度的HBsAg携带者，或者是部分慢性乙肝患者，由于体内缺少对于HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg无法表达，检测后可能会出现HBsAg、抗-HBs均为阴性的结果。为确保结果的准确性，目前大部分情况下均采用定量检测，与ELISA 相比，采用时间分辨荧光免疫测定，能够为HBV的检测提供量化指标，量化的具体数值可以提升结果的直观性，尤其在人体对于乙肝疫苗免疫效果、治疗效果的数值观察以及分析统计方面，重要性和优势尤为突出。而 HBV-DNA 定量检验使用的是荧光强度检测法，通过PCR检测量化数值，能够有效弥补血清学标志物检测定性上的不足，对病毒自身遗传物质 DNA 进行直接扩增后检测相关表达数值，检测过程中可以设置多个复孔，并且操作过程中的误差较小，获得的 DNA 具体数值结果直接、可靠。选择该技术实施乙肝病毒检测的主要原因在于乙肝病毒无法分离培养，只能通过核酸杂交技术进行处理，但这种方式不仅耗时较长，且在价格上较为昂贵，不适合临床推广，并且出现假阳性率较高，对结果准确性产生较大影响。基于以上 2 种检测方法自身的不足和优势，为了提升临床诊断准确性，近些年开始将2种方法联合应用于临床检测。通过联合应用，能够从根本上为诊断的准确性提供支持，且可以通过同时发挥2种方法的应用优势，在利用血清学检测反映感染问题后，通过HBV-DNA对复制情况进行明确，能够节约时间10。本次研究中，大三阳组HBV-DNA阳性率高于小三阳组和其他组，证明HBeAg阳性者的病毒复制情况比较活跃，并且HBV-DNA阳性者大部分为HBsAg携带者。在 HBV-DNA500 IU/mL 时，病毒较为活跃，因此，临床可以通过实施HBV-DNA检测确定病毒具体复制情况，通过PCR对HBV-DNA指标进行检测，能够尽早识别HBsAg阴性的感染者。综上所述，HBV血清标志物、HBV-DNA联合应用有利于HBV感染的临床诊断，可以弥补二者的缺陷和不足，提升诊断准确率。参考文献1张楠.CMIA法在HBV感染患者血清学标志物水平检测中的应用价值J.罕少疾病杂志,2022,29(10):84-85.2张宇,潘成明,刘翠娴,等.佛山市高明区18岁以下人群乙肝五项血清学标志物检测分析J.医学检验与临床,2022,33(7):4-9.3刘小芳,李哲.研究分析对乙肝患者施予乙肝血清学标志物定量联合HBVDNA定量监测的价值及效果J.康颐,2022(2):136-138.4沙启明.HBV-DNA载量水平与血清学标志物分组模式及前S1抗原的关系J.临床与病理杂志,2022,42(1):33-38.5郝雪涛,王立华,胡丽敏,等.乙肝疫苗接种后1014岁高年龄儿童HBV相关血清标志物检测分析J.医学动物防制,2022,38(7):671-673.6曹灵芝,樊正勤.高灵敏度HBVDNA定量与HBVM的相关性分析J.基层医学论坛,2022,26(29):7-9.7林敏全,黎丽红,麦伟图,等.化学发光(吖啶酯发光)与ELISA在乙肝病毒血清学检验中的应用价值探讨J.基层医学论坛,2022,26(13):31-33.8王婷,王丹丹,陈文鑫,等.HBsAg 阳性母亲 C 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