临床标本的细菌学检验专家讲座.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床标本细菌学检验,临床标本的细菌学检验,第1页,基本要求,认真查对：,了解诊疗：,联络临床：,临床标本的细菌学检验,第2页,正确采集和处理标本,无菌操作：对无菌或有菌标本不一样处理,盛放容器：无菌容器,采集时间、部位：,送检时间、方法：及时送检、低温或保温保留,安全防护：,及时检验和汇报：,临床标本的细菌学检验,第3页,选择适当培基养和培养方法,增菌,血平板,SS,MAC/EMB,巧克力培养基,SNA,NYE,SA,备注,血液,骨髓,+,+,+,+,可同时做厌氧、需氧培养，做菌计,尿液,+,+,+,做菌计、需要时做厌氧,粪,/,肛拭,+,+,+,弧菌培养选取碱性蛋白胨水和TCBS培养基,痰,/,咽拭,+,+,+,+,直接涂片镜检,脓液,分泌物,+,+,+,+,直接涂片镜检、可同时做厌氧、需氧培养,生殖道,标本,+,+,+,+,+,可直接涂片镜检,眼耳口鼻,标本,+,+,+,+,+,直接涂片镜检,体液,+,+,+,直接涂片镜检，可同时做厌氧、需氧培养,临床标本的细菌学检验,第4页,血液和骨髓,采血时间与次数：采集血培养都应该在使用在使用抗生素之前进行；对间歇性寒战，应该预计寒战或体温高峰时间。,采血部位：肘静脉或肘动脉,骨髓采集：,增菌培养：培养基中加入,SPS,临床标本的细菌学检验,第5页,检测方法和汇报,普通培养：分别做厌氧和需氧培养,阳性表现：,均匀浑浊，革兰阴性菌,浑浊有绿色，肺炎链球菌,表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌,下面沉淀，链球菌,溶血，溶血性链球菌,浑浊有胶胨，葡萄球菌,灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌,涂片革兰染色镜检，直接药敏、分离培养,汇报临床,阴性结果,7,天汇报,临床标本的细菌学检验,第6页,检测方法和汇报,特殊培养,脑膜炎奈瑟菌培养：,37,加,5-10%CO,2,伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤,草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、,CO,2,和厌氧培养,L,型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋”菌落,厌氧培养：,真菌培养：,临床标本的细菌学检验,第7页,临床意义,确诊菌血症和败血症,金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引发败血症,革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引发败血症,草绿色链球菌引发亚急性心内膜炎,铜绿、金葡引发烧伤后败血症,临床标本的细菌学检验,第8页,尿液处理,标本采集：,普通培养采取清洁中段尿。采样前，用肥皂水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中段和后段尿液,10-20ml,盛装于无菌容器。,肾盂尿采集法,膀胱穿刺尿采集法,结核菌涂片或培养用,24,小时尿取沉淀。,临床标本的细菌学检验,第9页,检测方法和汇报,直接镜检,-,离心沉淀涂片革兰染色,-,淋球菌镜检,假丝酵母镜检,结核分枝杆菌镜检,临床标本的细菌学检验,第10页,检测方法和汇报,分离培养,-,普通培养：,-,淋球菌培养：,-,厌氧菌培养：,-,真菌培养：,临床标本的细菌学检验,第11页,检测方法和汇报,菌落计数,倾注平皿法：尿液稀释成,1,：,10,、,1,：,100,、,1,：,1000,，取此液,1ml,放入直径,9cm,灭菌平皿内，同时加入已熔化并冷至,50,培养基与尿混合，待凝固后置,35,培养。,定量接种环涂抹法：使用,1ul,定量接种环沾满尿液，在分离培养基分离培养。生长菌落数乘以,1000,，等于每毫升尿中菌数。,汇报：,革兰阴性菌,10,5,cfu/ml,，,革兰阳性菌,10,4,cfu/ml,有临床意义,阴性汇报为“,48h,培养无菌生长”,临床标本的细菌学检验,第12页,患者徐某，男，,26,岁，因烧伤入住某院烧伤病房等候植皮手术。期间，患者烧伤创面有蓝绿色有甜腥气味粘稠分泌物渗出，随即患者出现,41,高热、呼吸急促、血压下降、昏迷。临床诊疗为败血症休克，马上给予广谱抗生素抗菌治疗与对症支持治疗，同时采集血标本送检验科微生物室检验并要求做药敏试验。请问，该患者可能为哪种细菌感染？血培养将会出现什么现象？该怎样深入判定？,临床标本的细菌学检验,第13页,患者周某，男，,65,岁，结肠癌术后化疗三日后出现高热，常规应用抗生素治疗无效，遂临床采集血标本送检验科微生物室，要求血培养判定病原菌及药敏试验。微生物室工作人员血标本经,18,h,培养后，出现均匀混浊，酚红指示剂变色。请问该病人可能是什么细菌感染？怎样深入判定？,临床标本的细菌学检验,第14页,患者李某，女，,57,岁，术后留置导尿,3,d,后出现发烧（,38,以上）、尿痛、排尿困难，查体有下腹触痛与肾区叩痛，临床初步判断为肾盂肾炎，病房要求检验科派人帮助采集尿液标本送检。请问怎样正确采集标本，并怎样进行检验？,临床标本的细菌学检验,第15页,粪便标本,自然排便法：挑取脓血、黏液粪便,2-3g,于无菌纸盒中，或放置于增菌液中送检,直肠肛拭子法：直接送检或放入运输培养基中送检,临床标本的细菌学检验,第16页,检测方法,直接镜检：针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等,-,霍乱弧菌：鱼群样排列革兰阴性菌，动力阳性,-,葡萄球菌：金葡菌引发假膜性肠炎,-,结核分枝杆菌：,-,艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢,-,空肠弯曲杆菌：细小、弧形、,S,形或螺旋形革兰阴性,临床标本的细菌学检验,第17页,检测方法,分离培养,-,沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于,SS,和,MAC,、,CB,，,3718-24h,培养，挑取可疑菌落接种,KIA/MIU,，深入做生化和血清凝集试验,-,霍乱弧菌：碱性蛋白胨水,37,增菌,6h,，挑取菌膜接种,TCBS,平板，,37,培养,16-20h,，挑选可疑菌落氧化酶阳性，多价“,O”,诊疗血清凝集试验,-,大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液粪便接种于,MAC,或,EMB,，,37,培养,18-24h,，挑取可疑菌落接种,KIA/MIU,，深入做生化和血清凝集试验,-,金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂，,37,培养,18-24,小时,-,副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与,SS,培养基。,临床标本的细菌学检验,第18页,检测方法,分离培养,-,小肠耶尔森培养：接种,NYE,、,MAC,及,SS,，,22-25,及,37,培养，挑取可疑菌落接种,KIA/MIU,，深入做生化判定。,-,空肠弯曲杆菌：接种弯曲菌培养基，,43,微需氧培养,24-72h,-,艰难梭菌培养：取黄色伪膜状粪便，接种于,CCFA,平板，,37,厌氧培养,48h,，挑取可疑菌落检测毒素,临床标本的细菌学检验,第19页,临床意义,检测引发腹泻、食物中毒肠道菌致病菌,检测肠道正常菌群，预防菌群失调,临床标本的细菌学检验,第20页,患者杨某，女，,24,岁，,2,日前到某海滨城市旅游，并在街边小店食入大量海鲜。回家后出现腹痛、腹泻、呕吐、低热到医院就诊。临床采集粪便标本送检验科微生物室。标本性状为糊状，常规接种,SS,平板与,CB,平板，培养,18,h,后发觉,SS,平板上除乳糖阳性菌落外有扁平、无色透明、蜡滴状小菌落生长，,CB,平板上未见乳糖阴性菌落生长。请问患者可能是何种细菌感染？怎样深入判定？,临床标本的细菌学检验,第21页,患者张某，男，,24,岁，因餐后,2,h,出现恶性、呕吐、发烧伴腹泻入院治疗，临床初步判断为食物中毒。采集粪便标本后送检验科微生物室检验。粪便性状为糊状。微生物室工作人员收到标本后直接接种于,SS,与,MAC,培养基分离培养，,24,小时后仅见乳糖阳性菌落生长，请问是何原因？该怎样深入进行检验,？,临床标本的细菌学检验,第22页,某位病人因肺炎住院，经抗生素治疗,7,天后出现腹痛、腹泻、发烧等症状。病房留粪便标本送检验科微生物室检验。观察粪便性状呈粘液血便，带有条状伪膜。微生物室工作人员收到标本后直接接种于,SS,与,MAC,培养基分离培养，,24,小时后仅见乳糖阳性菌落生长，请问是何原因？该怎样深入进行检验？,临床标本的细菌学检验,第23页,呼吸道标本,标本采集：,咽拭子采集法：,自然咯痰法：,小儿取痰法：,气管镜采集法：,胃内采痰法：,气管穿刺法：,临床标本的细菌学检验,第24页,检测方法,显微镜检验,直接镜检：观察痰液质量,染色镜检：观察细菌或分枝杆菌,临床标本的细菌学检验,第25页,分离培养,培养前处理：,均质化：,净化：,普通培养：接种于,BA,，,10%CO,2,37,培养,18-24,小时，挑取可疑菌落涂片、染色，深入做生化判定。,结核杆菌培养：,临床标本的细菌学检验,第26页,分离培养,厌氧菌培养：接种两个,BA,，同时做厌氧与需氧培养,真菌培养：接种,SA,，,37,或,22,培养,48,小时,白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培养基上，,37,培养,48,小时，经典菌落做生化、毒力试验,百日咳鲍特菌：接种,BG,培养基，,37,培养,2-5,天，挑取可疑菌落涂片、血清学试验,临床标本的细菌学检验,第27页,临床意义,呼吸道标本有正常菌群,用于检测呼吸系统，鼻咽部感染。,与临床联络，找到病原菌。,临床标本的细菌学检验,第28页,患者王某，男，,63,岁，入院后经气管插管手术,48,h,后出现发烧、咳嗽、咯痰，,X,线检验显示有较新炎症病灶，初步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检验。病人痰液呈砖红色似果酱样，粘稠。请问该病人可能是何种病原菌感染？将怎样判定？,临床标本的细菌学检验,第29页,某医院检验科微生物室收到一痰液标本，色黄、粘稠。该检验科工作人员收到标本登记后，将其用,40,g/L NaOH,消化处理后，进行抗酸染色，镜检未见抗酸阳性杆菌，遂发出初步汇报：“,标本经抗酸后未见结核分枝杆菌”。请问该工作人员做法是否存在问题？假如是你将怎样进行检验？,临床标本的细菌学检验,第30页,脑脊液,标本采集,医师以最严格无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时，应保温送检或床边接种后，马上孵育,临床标本的细菌学检验,第31页,检验方法,显微镜检验：,-,脑脊液外观：结核性膜炎常为毛玻璃样。,其它细菌引发化脓性脑膜炎，脑脊液都显著浑浊。,-,涂片镜检：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色，镜检。无色透明脑脊液,应以,3000r/min,离心,10-15,分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜检，依据染色反应及形态特征，可初步提出感染细菌种类。,临床标本的细菌学检验,第32页,检测方法,显微镜检验：,革兰阴性双球菌,革兰阳性双球菌,革兰阴性小杆菌,革兰阳性小杆菌,临床标本的细菌学检验,第33页,分离培养,用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于,BA,或,CA,平皿上，置,35,5%CO2,环境中培养,18-24,小时，检视有没有细菌生长。依据菌落特点及染色后镜检特征，初步判断细菌种类，并深入做生化判定及血清学检验加以判定，并作出汇报。,临床标本的细菌学检验,第34页,临床意义,细菌性脑膜炎病原学诊疗,判别诊疗病毒性脑膜炎,治疗疗效评定,临床标本的细菌学检验,第35页,脓液及创伤分泌物,标本采集,封闭性脓肿：注射器抽取,开放性脓肿：,烧伤创面：,临床标本的细菌学检验,第36页,检验方法,涂片：,革兰染色镜检,放线菌挑取硫磺颗粒镜检,临床标本的细菌学检验,第37页,检验方法,分离培养,-,普通细菌培养：分别接种于,BA,或,EMB,平皿上，置,37,培养,18-24,小时，检视有没有细菌生长。依据菌落特点及染色镜检特征，初步判断细菌种类，并深入做生化判定,-,厌氧培养：接种,BA,，或增菌后,8020,分钟加热后移种,BA,，,37,培养,18-24,小时，挑取可疑菌落染色镜检，并深入做生化试验、动物试验。,临床标本的细菌学检验,第38页,临床意义,检测细菌性创伤感染,检测气性坏疽,检测烧伤创面感染,临床标本的细菌学检验,第39页,患者黄某，男，,48,岁，为北方某林区管理员，在一次例行林区巡视时发觉有大量老鼠死亡，回家,2,日后出现发烧、头痛、淋巴结肿大伴疼痛，马上到当地县城医院就诊，后转送市中心医院,ICU,隔离病房。对患者淋巴结穿刺液涂片染色镜检，查见革兰阴性两端浓染短小杆菌。请问该患者可能为何种细菌感染？怎样深入进行检验？,临床标本的细菌学检验,第40页,患者赵某，女，,63,岁，患有糖尿病，晚期伴毛细血管病变。一日因足部不慎被玻璃划伤到小区医院进行了常规伤口处理，但伤口经久不愈，并出现化脓性感染。遂到小区医院复诊，医生进行了伤口清洗处理，并给予口服抗生素治疗。两周后伤口仍不愈合，并出现发黑、发臭，有黑色脓血渗出，又到某三级医院治疗。临床采集了伤口附近坏死组织，并送检验科微生物室检验，请判断可能是由何种细菌感染，并说明该怎样进行检验。,临床标本的细菌学检验,第41页,生殖道标本,标本采集,医师采集，女性采集尿道口、阴道、子宫颈或直肠（怀疑淋球菌感染）男性采集尿道口分泌物及前列腺等分泌物标本。用棉花拭子采集标本，搜集于无菌试管内送检。,临床标本的细菌学检验,第42页,检验方法,显微镜检验,普通细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检验：制成涂片，干后进行革兰氏染色，镜检发觉有革兰氏阳性或阴性细菌，即可依据形态做出汇报。,梅毒螺旋体做暗视野或镀银染色检验,假丝酵母：,临床标本的细菌学检验,第43页,检验方法,分离培养,普通细菌及淋病奈瑟氏菌培养：普通情况下可用,BA,，,35,孵育。若培养淋病奈瑟氏菌则应增加,1,个,CA,，置,5,10%CO2,环境孵育。,厌氧培养,支原体培养：,临床标本的细菌学检验,第44页,临床意义,诊疗泌尿生殖系统炎症,性病诊疗,临床标本的细菌学检验,第45页,眼、耳、口腔标本,标本采集,-,采取标本时,耳,鼻,咽拭子会被皮肤或粘膜上正常菌群污染,采取和分离时应注意。,-,采取眼分泌物时,应先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭子拭干,再以无菌棉拭子采集。,-,沙眼衣原体用无菌小刀刮取穹隆部或眼结膜上皮细胞。,临床标本的细菌学检验,第46页,检验方法,显微镜检验,普通细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检验：制成涂片，干后进行革兰氏染色，镜检发觉有革兰氏阴性双球菌。,沙眼衣原体：,真菌,临床标本的细菌学检验,第47页,检验方法,普通培养,真菌培养,其它,临床标本的细菌学检验,第48页,临床意义,诊疗细菌性眼炎、结膜炎、泪囊炎、角膜炎,新生儿眼炎,临床标本的细菌学检验,第49页,谢谢,临床标本的细菌学检验,第50页,