circ_0013958靶向miR-532-3p调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭.pdf

中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY第 32 卷第 3 期2023 年 6 月Vol.32.No.3June.2023收稿日期2022-11-12 修回日期2023-06-05基金项目重庆市江津区科委科技攻关项目 Y2019046作者简介秦丽娟，女（1988 年），土家族，硕士研究生，主管药师*通讯作者(To whom correspondence should be addressed)：circ_0013958 靶向 miR-532-3p 调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭秦丽娟1，王凡2，贺小艳1*（1重庆大学附属江津医院药学部，重庆 402260；2重庆大学附属江津医院肿瘤科，重庆 402260）摘要目的 探讨 circ_0013958 靶向 miR-532-3p 在结直肠癌进展中的作用。方法 RT-qPCR 分析 circ_0013958 和 miR-532-3p在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达。用脂质体转染法分别将si-NC、si-circ_0013958、pcDNA、pcDNA-circ_0013958、miR-NC、miR-532-3p mimics、si-circ_0013958+anti-miR-NC、si-circ_0013958+anti-miR-532-3p转染 SW620 细胞，通过 CCK-8法和平板克隆实验评估细胞活力和克隆能力，通过划痕愈合和Transwell侵袭实验估细胞迁移和侵袭能力。利用Circular RNA Interactome网站预测circ_0013958与miR-532-3p的关系，并通过双荧光素酶报告基因法进一步验证。结果 与癌旁组织相比，结直肠癌组织中 circ_0013958 表达上调，miR-532-3p 表达下调。转染 si-circ_0013958 可上调 miR-532-3p 表达，降低细胞活力和划痕愈合率，并减少克隆形成数和侵袭力。转染 pcDNA-circ_0013958 可下调 miR-532-3p 表达；转染 miR-532-3p mimics可降低细胞活力和划痕愈合率，并减少克隆形成数和侵袭力。circ_0013958 和 miR-532-3p 直接结合。转染 anti-miR-532-3p可显著减弱转染 si-circ_0013958 对 SW620 细胞活力、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数的影响。结论 干扰 circ_0013958 通过促进 miR-532-3p 表达来抑制结直肠癌细胞增殖、迁移侵袭，从而抑制结直肠癌进展。关键词结直肠癌；circ_0013958；增殖；侵袭；迁移；miR-532-3p中图分类号R365 文献标识码A DOI：10.16705/ki.1004-1850.2023.03.002Circ_0013958 targeting miR-532-3p to regulate the proliferation,migration and invasion of colorectal cancer cellsQin Lijuan1,Wang Fan2,He xiaoyan1*(1Pharmaceutical Department,Chongqing university Jiangjin hospital,Chongqing 402260,China;2Oncology department,Chongqing university Jiangjin hospital,Chongqing 402260,China)AbstractObjective To study the function of circ_0013958 targeting miR-532-3p in the progression of colorectal cancer.Methods The expression of circ_0013958 and miR-532-3p in colorectal cancer tissues and adjacent tissues was examined by RT-qP-CR.si-NC,si-circ_0013958,pcDNA,pcDNA-circ_0013958,miR-NC,miR-532-3p mimics,si-circ_0013958+anti-miR-NC,si-circ_0013958+anti-miR-532-3p were respectively transfected into SW620 cells,and cell viability and cloning ability were evaluated by CCK-8 method and plate cloning assay,and abilities of cell migration and invasion were detected by scratch healing and Transwell assays.Circular RNA Interactome website was used to predict the interaction between circ_0013958 and miR-532-3p,which was fur-ther confirmed by Dual-Luciferase reporter assay.Results circ_0013958 was up-regulated,while miR-532-3p was down-regulated in colorectal cancer tissues.Transfection of si-circ_0013958 could up-regulate miR-532-3p expression,reduce cell viability and scratch healing rate,and reduce the number of clone formation and invasion.Transfection of pcDNA-circ_0013958 could down-regulate the expression of miR-532-3p.Transfection of miR-532-3p mimics could reduce cell viability and scratch healing rate,and reduce the number of clone formation and invasion.circ_0013958 directly binds to miR-532-3p.Transfection of anti-miR-532-3p could signifi-cantly reduce the effect of transfection of si-circ_0013958 on SW620 cell viability,scratch healing rate,number of clone formation,and number of invasion.Conclusion Interference circ_0013958 inhibits the proliferation,migration and invasion of colorectal cancer cells by promoting miR-532-3p expression,thereby inhibiting the progression of colorectal cancer.KeywordsColorectal cancer;circ_0013958;proliferation;invasion;migration;miR-532-3p秦丽娟等.circ_0013958 靶向 miR-532-3p 调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭第 3 期 237结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是全球癌症致死的第二位原因，仅次于肺癌1。尽管手术、放疗和化疗的进步提高了治疗疗效，但 CRC 的高转移率仍然增加了患者的死亡风险2。放化疗耐药和副作用更是CRC治疗的主要障碍。研究CRC病理进展机制对制定新的诊断和治疗策略至关重要。环状 RNA（circRNA）是哺乳动物细胞中普遍存在的共价闭合连续环型单链 RNA，其可直接结合特定 miRNA，调节其活性，进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用3。研究表明 circRNA 可调节 CRC 细胞的恶性行为，参与CRC进展和转移4。circ_0013958在肺腺癌中表达上调，具有促增殖、抗凋亡、促侵袭功能5，但 circ_0013958 与 CRC 进展相关性则未见报道。生物信息学分析显示 miR-532-3p 是 circ_0013958 的潜在靶点。miR-532-3p 在 CRC 中表达下调，上调其表达通过激活 p53 和凋亡信号通路可诱导细胞周期阻滞和早期凋亡，是 CRC 化疗的增敏剂6。此外，miR-532-3p 还能抑制 CRC 转移和上皮-间充质转化表型6。因此，本研究以 miR-532-3p 为切入点，探索 circ_0013958 在 CRC 中的作用和可能机制，旨在为临床治疗 CRC 提供有效靶点。材料与方法1 结直肠癌标本收集收集 2019 年 3 月至 2020 年 3 月在我院接受常规手术的 45 例 CRC 患者（男 25 例，女 20 例，年龄 5875 岁，中位年龄 67 岁）的癌组织和癌旁组织样本（正常结直肠黏膜组织），样本分离后立即在液氮中冷冻，后在-80 保存直到使用。所有患者术前均签署知情同意书，术前未接受化疗或放疗。本研究经我院伦理委员会批准。2 细胞和试剂CRC 细胞系 SW620 购自江苏欣润生物公司；miRNA第一链cDNA合成试剂盒、miRNA检测试剂盒购自北京安捷伦科技公司；逆转录试剂盒、Trizol试剂、SYBR Premix Ex Taq II 购自大连宝生物公司；荧光素酶报告质粒、Si-NC、Si-circ_0013958、pcDNA-circ_0013958、pcDNA、miR-NC、miR-532-3p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-532-3p 购自广州锐博生物公司；Transwell 小室购自北京明阳科华生物科技公司；CCK-8 法细胞计数试剂盒购自上海翌圣生物；兔抗 Ki-67(ab16667)、基质金属蛋白酶 2（MMP-2）（ab97779）、MMP-9（ab38898）、磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）（ab37168）一抗、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔 IgG（ab205718）及3,3-二氨基联苯胺（DAB）试剂盒购自美国 Abcam公司。3 免疫组织化学染色制备 5 m 厚度的组织切片，脱蜡封闭。然后组织切片在 4 下用抗 Ki-67 一抗工作液孵育过夜，PBS冲洗后滴加HRP-羊抗兔二抗工作液室温孵育1 h，随后 DAB 呈色，显微镜下观察拍照。4 circ_0013958 和 miR-532-3p 表 达 的 RT-qPCR分析用Trizol试剂提取总RNA后，用PrimeScript逆转录试剂盒、miRNA 第一链 cDNA 合成试剂盒逆转录成cDNA。用SYBR Premix Ex Taq II和miRNA检测试剂盒进行在LightCycler96实时荧光定量PCR仪（Roche）进行qPCR检测。以GAPDH或U6为内参，采用 2Ct公式计算基因相对表达量。circ_0013958上游引物5-TTC AAC CCA CAG GAG GTC TT-3、下游引物 5-ATA GCT GGG GGT TCC ACT CT-3，GAPDH 上游引物 5-TGT TCG TCA TGG GTG TGA AC-3、下游引物 5-ATG GCA TGG ACT GTG GTC AT-3，miR-532-3p 上游引物 5-ATA ATC CTC CCA CAC CCA AGG-3、下游引物5-CTC AAC TGG TGT CGT GGA-3，U6 上游引物 5-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3，下游引物 5-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3。5 细胞培养和分组SW620 细胞接种于含 10%胎牛血清、1%青链霉素的 DMEM 培养液中，37 C、5%CO2培养箱中孵育。将对数生长期细胞接种 6 孔板，当生长到约 60%融合度时用脂质体转染法将 Si-NC、Si-circ_0013958、pcDNA、pcDNA-circ_0013958、miR-NC、miR-532-3p mimics、Si-circ_0013958+anti-miR-NC、Si-circ_0013958+anti-miR-532-3p 分 别 转染 SW620，分别记为 Si-NC 组、Si-circ 组、pcDNA组、pcDNA-circ 组、miR-NC 组、miR-532-3p 组、Si-circ+anti-miR-NC组、Si-circ+anti-miR-532-3p组。转染48 h后收集各组细胞，RT-qPCR分析circ_0013958或 miR-532-3p 水平以验证转染效果。中国组织化学与细胞化学杂志238第 32 卷6 细胞活力 CCK-8 法检测将 2103/孔转染细胞接种 96 孔板，培养 48 h。各孔加入 10 L CCK-8 溶液，培养 2 h 后，利用酶标仪测定 450 nm 处光密度（OD）值，评估细胞活力。7 平板克隆实验将 5102/孔转染细胞接种 6 孔板，培养 14 d 直到出现细胞集落。细胞集落用 4%多聚甲醛固定后，用 0.1%结晶紫染色。在显微镜下计数大于 50 个细胞的克隆数。8 划痕愈合实验收集转染48 h后的SW620细胞。将1104/孔转染细胞接种 6 孔板，当生长到 80%融合度时用移液管尖端刮伤细胞单层。用含 2%胎牛血清的 DMEM培养细胞，倒置显微镜下24 h观察细胞的迁移情况，测定划痕距离。划痕愈合率=（0 h划痕距离-24 h划痕距离）/0 h 划痕距离 100%9 Transwell 侵袭实验SW620 细胞转染后 48 h，收集细胞并用无血清DMEM 重悬。将 200 L 细胞悬液（含 5104个细胞）加入包被基质胶的 Transwell 上室，将 600 L 完全培养液加入下室。37 孵育 24 h 后，用 4%多聚甲醛固定Transwell膜下表面侵袭细胞，0.1%结晶紫染色。倒置显微镜下随机选择 5 个视野计数，以细胞数均值表示其侵袭数量。10 蛋白质印迹分析用 0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤转染细胞 3 次，加入细胞裂解液提取总蛋白，100 孵育5 min 使其变性。将 30 L 蛋白样品通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，并转移到聚偏氟乙烯膜上。膜用 5%牛血清白蛋白阻断 1 h 后，加入相应的一抗在 4 孵育 10 h。次日，膜与 HRP 标记的羊抗兔二抗室温孵育 1.5 h。最后，膜用 ECL 显影，GelDoc 2000 凝胶成象仪（Bio-Rad，美国）成像拍照，采用 Image lab 软件分析测量目的条带的光密度值，以 GAPDH为内参计算相对表达量。11 双荧光素酶报告实验将 circ_0013958 野生型序列及其突变片段分别克隆到 pGL3 载体上，构建荧光素酶报告质粒 WT-circ_0013958、MUT-circ_0013958。SW620 细胞接种24孔板，将WT-circ_0013958与miR-532-3p mimics、WT-circ_0013958 与 miR-NC、MUT-circ_0013958 与miR-532-3p mimics、MUT-circ_0013958 与 miR-NC分别转染 60%融合度细胞。培养 48 h 后，裂解细胞并使用 Dual-Glo 双荧光素酶报告检测系统（普洛麦格，美国）进行荧光素酶活性检测。12 统计学方法用SPSS 20.0软件进行统计分析，所有实验均独立重复 3 次，每次设计 3 个平行。数据均以sx 表示，两组之间的差异分析采用独立样本 t 检验，两组以上的差异分析采用单因素方差分析和 SNK_q 检验，P0.05 为差异有统计学意义。结 果1 Ki-67、circ_0013958 和 miR-532-3p 在结直肠癌组织中异常表达免疫组织化学分析显示，Ki-67在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织（图 1）。RT-qPCR 检测显示，circ_0013958在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织，而 miR-532-3p 表达水平显著低于癌旁组织（表 1）。2 干扰 circ_0013958 表达抑制结直肠癌 SW620 细胞增殖SW620细胞分别转染Si-circ_0013958或Si-NC，通过平板克隆实验和CCK-8实验分析细胞的增殖能图 1 Ki-67 在结直肠癌组织和癌旁组织中表达水平的免疫组织化学检测。比例尺，100 mFig.1 Immunohistochemical analysis of Ki-67 expression in colorectal cancer and paracancer tissues.Scale bar,100 m秦丽娟等.circ_0013958 靶向 miR-532-3p 调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭第 3 期 239力。结果显示 Si-circ_0013958 组细胞 circ_0013958表达水平、细胞活力以及克隆形成数显著低于Si-NC组（图 2 和表 2），这表明 circ_0013958 敲低可以抑制 SW620 细胞的增殖。3 干扰 circ_0013958 表达抑制结直肠癌 SW620 细胞迁移侵袭划痕愈合实验和 Transwell 侵袭实验显示：Si-circ_0013958 组结直肠癌 SW620 细胞划痕愈合率和侵袭数较 Si-NC 组细胞显著降低（图 3，表 3）。Western blot 检测显示：Si-circ_0013958 组结直肠癌 SW620 细胞中参与肿瘤侵袭转移的 MMP-2 和MMP-9 水平较 Si-NC 组细胞显著降低（图 4）。由此表明，circ_0013958 敲低可以抑制 SW620 细胞的迁移和侵袭。4 circ_0013958 靶向调控 miR-532-3p 的表达Circular RNA Interactome 预测显示，circ_00139 58 和 miR-532-3p 存在互补的核苷酸序列（图 4）。双荧光素酶报告基因分析显示：与 miR-NC 相比，miR-532-3p mimics 能够显著降低 WT-circ_0013958载体的相对荧光素酶活性（表 4）；RT-qPCR 检测显示：过表达circ_0013958显著抑制miR-532-3p表达，沉默 circ_0013958 表达则上调 miR-532-3p 表达（表5）。由此表明，miR-532-3p 的表达受 circ_0013958图2 干扰circ_0013958表达对结直肠癌SW620细胞增殖影响的抑克隆形成实验分析。A，Si-NC；B，Si-circ_0013958Fig.2 Colony formation assay of the effect of knocking down expression of circ_0013958 on proliferation of the colorectal cancer SW620 cells.A,Si-NC;B,Si-circ_0013958表 2 干扰 circ_0013958 表达抑制结直肠癌 SW620 细胞的增殖Tab.2 Inhibitory effect of circ_0013958 interference on proliferation of CRC cell SW620 分 组Groupncirc_0013958 水平circ_0013958 levelOD 值（450nm）OD value(450nm)克隆形成数Number of colony formationsi-NC91.000.001.030.0798.417.28si-circ_001395890.330.030.530.0445.624.15t67.00018.60518.899P0.0000.0000.000表 3 干扰 circ_0013958 表达对结直肠癌 SW620 细胞迁移侵袭影响的定量分析Tab.3 Quantitative analysis of effect of knocking down circ_0013958 expression on the migration and invasion of the colorectal cancer SW620 cells 分 组Groupn划痕愈合率（%）Scratch healing rate(%)侵袭细胞数Number of invasion cellsSi-NC968.016.24118.7612.29Si-circ_0013958927.132.6554.075.01t18.09014.623P0.0000.000表1 circ_0013958和miR-532-3p在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达水平比较Tab.1 Comparison for the expression levels of circ_0013958 and miR-532-3p in CRC and the paracancer tissues分 组GroupnRNA level of cancerous tissue(Fold over paracence)circ_0013958 levelmiR-532-3p level癌旁组织Adjacent tissues451.000.081.000.11结直肠癌组织CRC tissues453.930.290.400.04t65.33634.387P0.0000.000中国组织化学与细胞化学杂志240第 32 卷图 3 干扰 circ_0013958 表达对结直肠癌 SW620 细胞迁移和侵袭能力的影响。A，代表性划痕愈合实验结果；B，代表性 Transwell 侵袭实验结果Fig.4 Effect of silence of circ_0013958 expression on the migration and invasion ability of the colorectal cancer SW620 cells.A,representative results of scratch healing assay;B,representative results of Transwell invasion assay图 5 circ_0013958 与 miR-532-3p 结合位点预测。二者之间存在互补核苷酸序列Fig.5 Prediction of the binding site of circ_0013958 and miR-532-3p.There are complementary nucleotide sequences between circ_0013958 and miR-532-3p图 4 干扰 circ_0013958 表达对结直肠癌 SW620 细胞细胞迁移侵袭相关蛋白 MMP-2 和 MMP-9 水平的影响。A，MMP-2 和 MMP-9 水平的代表 Western blot 检测；B，MMP-2 和 MMP-9 水平的定量分析（与 Si-NC 组相比，*P 0.05；n=3）Fig.3 The effect of interfering circ_0013958 expression on the levels of cell migration and invasion related proteins MMP-2 and MMP-9 in the col-orectal cancer SW620 cells.A,representative Western blot detection of levels of MMP-2 and MMP-9;quantitative analysis of the levels of MMP-2 and MMP-9(*P 0.05 vs Si-NC group；n=3)秦丽娟等.circ_0013958 靶向 miR-532-3p 调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭第 3 期 241的负调控。5 miR-532-3p 过表达抑制结直肠癌 SW620 细胞增殖迁移和侵袭在 SW620 细胞转染 miR-532-3p mimics 或 miR-NC，以评估 miR-532-3p 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果显示，miR-532-3p 组细胞 miR-532-3p 表达水平显著高于 miR-NC 组，MMP-2 和MMP-9 蛋白表达、细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数显著低于 miR-NC 组（见图 6、图 7 和表 6）。由此表明 miR-532-3p 可以抑制 SW620 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。6 抑制 miR-532-3p 表达逆转干扰 circ_0013958 表达对结直肠癌 SW620 细胞增殖迁移侵袭的抑制作用为了明确 circ_0013958 是否通过靶向 miR-532-3p 来调控 SW620 细胞的增殖、迁移和侵袭，分析了抑制 miR-532-3p 表达对沉默 circ_0013958 引起的 SW620 细胞增殖、迁移和侵袭抑制的影响。结 果 显 示，si-circ_0013958+anti-miR-532-3p 组 细胞 miR-532-3p 表达水平显著低于 si-circ_0013958+anti-miR-NC 组，MMP-2 和 MMP-9 水平、细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数显著高于 si-circ_0013958+anti-miR-NC 组（图 8、图 9 和表 7），由此证明 circ_0013958 可通过靶向 miR-532-3p 来调控 SW620 细胞的增殖、迁移和侵袭。讨 论CRC 的进展是一个复杂的过程，涉及抑癌基因失活、致癌基因激活和表观遗传失调7。circRNA是表观遗传调控的重要组成部分，近年研究表明circRNA 异常表达参与 CRC 等多种癌症的发生和发展8。Zhou等9报道circ_100859通过miR-217/HIF-1轴促进CRC细胞增殖并抑制细胞凋亡。Bian等10人发现 circ_103809 通过 miR-532-3p 参与 CRC 增殖和迁移的调控。circ_0013958是卵巢癌的致癌因子，图 6 miR-532-3p 过表达对结直肠癌 SW620 细胞迁移侵袭相关蛋白 MMP-2 和 MMP-9 水平的影响。A，MMP-2 和 MMP-9 水平的代表性Western blot 检测；B，MMP-2 和 MMP-9 水平的统计学分析（与 miR-NC 组相比，*P0.05；n=3）Fig.6 Overexpression of miR-532-3p on the levels of cell migration and invasion related proteins,MMP-2 and MMP-9,in the colorectal cancer SW620 cells.A,representative detection of the levels of MMP-2 and MMP-9;B,statistical analysis of the levels of MMP-2 and MMP-9(*P0.05 vs miR-NC group;n=3)表4 circ_0013958对miR-532-3p靶向调控的双荧光素酶报告基因分析Tab.4 Double luciferase reporter gene assay of circ_0013958 targeting to miR-532-3p 分组 GroupnWT-circ_0013958MUT-circ_0013958miR-NC91.010.071.030.08miR-532-3p90.530.041.000.06t17.8610.900P0.0000.381表 5 circ_0013958 调控 miR-532-3p 的表达Tab.5 circ_0013958 regulated miR-532-3p expression 分组 GroupnmiR-532-3ppcDNA91.000.00pcDNA-circ_001395890.440.05*Si-NC90.980.05Si-circ_001395893.090.29#F553.815P0.000与 pcDNA 比较，*P0.05；与 Si-NC 组比较，#P0.05*P0.05,compared with pcDNA;#P0.05,compared with Si-NC中国组织化学与细胞化学杂志242第 32 卷图 7 miR-532-3p 过表达对结直肠癌 SW620 细胞迁移、侵袭以及细胞克隆形成能力的影响。A，上调 miR-532-3p 对 SW620 细胞迁移影响的代表性划痕愈合实验检测。B，上调 miR-532-3p 对 SW620 细胞侵袭影响的代表性 Transwell 实验检测。C，上调 miR-532-3p 对 SW620 细胞克隆形成能力影响的代表性平板克隆实验检测Fig.7 Effect of miR-532-3p overexpression on the migration,invasion and colony formation of the colorectal cancer SW620 cells.A,representative scratch healing test of the effect of up-regulated miR-532-3p on SW620 Cell migration.B,representative Transwell test of the effect of up-regulated miR-532-3p on SW620 cell invasion.C,representative plate cloning experiment detection of the effect of up-regulated miR-532-3p on the clonogenic ability of SW620 cells表7抑制miR-532-3p表达对下调circ_0013958表达抑制结直肠癌SW620细胞迁移侵袭和细胞克隆形成的影响的统计学分析Tab.7 Statistical analysis of the effect of inhibition of miR-532-3p expression on the inhibitory effect of circ_0013958 interference on the proliferation,migration and invasion in CRC SW620 cells分组GroupmiR-532-3p 表达miR-532-3p expressionOD 值（450nm）OD value(450nm)细胞克隆形成数（个）Number of colony formation划痕愈合率（%）Scratch healing rate(%)侵袭细胞数（个）Number of invasion cellssi-circ_0013958+anti-miR-NC1.000.000.510.0444.874.6926.772.4752.985.57si-circ_0013958+anti-miR-532-3p0.250.03*0.910.07*87.947.12*59.435.18*95.697.05*t75.00014.88415.15517.07314.595P0.0000.0000.0000.0000.000注：与 si-circ_0013958+anti-miR-NC 组比较，*P0.05Note:Compated with si-circ_0013958+anti-miR-NC group,*P0.05表 6 miR-532-3p 过表达对结直肠癌 SW620 细胞增殖、迁移和侵袭的影响Tab.6 Effect of miR-532-3p overexpression on the proliferation,migration,and invasion in CRC SW620 cells分组GroupmiR-532-3p 表达miR-532-3p expression细胞活力（OD450）Cell viability(OD450)细胞克隆形成数Number of colony formation划痕愈合率（%）Scratch healing rate(%)侵袭细胞数Number of inva-sion cellsmiR-NC1.000.001.040.0699.718.9369.915.51117.0311.59miR-532-3p3.120.26*0.590.04*53.955.03*35.243.03*61.534.63*t24.46218.72113.39416.54113.341P0.0000.0000.0000.0000.000注：与 miR-NC 组比较，*P0.05Note:Compared with miR-NC group,*P0.05秦丽娟等.circ_0013958 靶向 miR-532-3p 调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭第 3 期 243图 9 抑制 miR-532-3p 表达对下调 circ_0013958 表达抑制结直肠癌 SW620 细胞迁移侵袭和细胞克隆形成的影响。A，抑制 miR-532-3p 表达对下调 circ_0013958 所致 SW620 细胞迁移抑制影响的代表性划痕愈合实验分析。B，抑制 miR-532-3p 表达对下调 circ_0013958 所致 SW620细胞侵袭抑制影响的代表性 Transwell 实验检测。C，抑制 miR-532-3p 表达对下调 circ_0013958 所致 SW620 细胞克隆形成抑制影响的代表性平板克隆实验检测Fig.9 The effect of inhibition of miR-532-3p expression on the inhibitory effect of circ_0013958 interference on the migration,invasion and colony formation in the colorectal cancer SW620 cells.A,representative scratch healing experiment analysis of the effect of inhibition of miR-532-3p expres-sion on downregulation of circ_0013958-induced inhibition of SW620 cell migration.B,representative Transwell test of the eff