CircLRP6调节miR-125a-5p_MCL1轴对食管鳞癌顺铂耐药性的影响.pdf

实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17CircLRP6调节miR-125a-5p/MCL1轴对食管鳞癌顺铂耐药性的影响林萍萍 李富博 王东娟 郭研 董怡承德医学院附属医院肿瘤科（河北承德 067000）【摘要】目的探讨环状RNA脂蛋白受体6（circLRP6）对食管鳞癌（ESCC）顺铂（CDDP）耐药性的影响及潜在分子机制。方法建立KYSE30的CDDP抗性细胞株（KYSE30/CDDP-R），分为对照（Control）组、si-NC组、si-circLRP6组、si-circLRP6+anti-NC组、si-circLRP6+anti-miR-125a-5p组。采用RT-qPCR和Western blot检测组织/细胞中circLRP6、miR-125a-5p和髓样细胞白血病-1（MCL-1）的表达水平；CCK-8法检测KYSE30/CDDP-R细胞的CDDP敏感性；流式细胞术检测细胞凋亡。结果ESCC癌组织/细胞和CDDP耐药癌组织中circLRP6、MCL-1 mRNA水平升高，miR-125a-5p水平降低（P 0.001）；circLRP6沉默可上调miR-125a-5p，抑制 MCL-1 表达，增强体内外 CDDP 抗性 ESCC 细胞对 CDDP 的敏感性，促进 CDDP 抗性 ESCC 细胞凋亡；抑制 miR-125a-5p 可减弱 circLRP6 沉默对 CDDP 抗性 ESCC 细胞中 CDDP 耐药性和细胞凋亡的影响。circLRP6 可靶向负调控 miR-125a-5p 表达，MCL-1 是 miR-125a-5p 的靶标。结论circLRP6 沉默可能通过miR-125a-5p/MCL-1轴增强CDDP抗性ESCC细胞对CDDP的敏感性。【关键词】环状RNA脂蛋白受体6；食管鳞癌；顺铂耐药；miR-125a-5p/MCL-1轴【中图分类号】R735.1Impacts of circLRP6 on cisplatin resistance to esophageal squamous cell carcinoma by regulating miR125a5p/MCL1 axis LIN Pingping，LI Fubo，WANG Dongjuan，GUO Yan，DONG Yi.Department of Oncology，Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde 067000，ChinaCorresponding author：LIN Pingping Email： 【Abstract】Objective To investigate the impacts of circular RNA lipoprotein receptor 6（circLRP6）on cisplatin（CDDP）resistance to esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）and its relevant potential molecular mechanism.Methods CDDPresistant cell lines of KYSE30（KYSE30/CDDPR）were established and divided into a control group，siNC group，sicircLRP6 group，sicircLRP6 plus antiNC group，and sicircLRP6 plus antimiR125a5p group.The expression levels of circLRP6，miR125a5p and myeloid leukemia1（MCL1）in tissues/cells were detected by RTqPCR and Western blot.CCK8 assay was applied to detect the CDDP sensitivity of KYSE30/CDDPR cells，so was flow cytometry to detect apoptosis.Results mRNA levels of circLRP6 and MCL1 were increased，while level of miR125a5p was decreased in ESCC cancer tissues/cells and CDDPresistant cancer tissues（P 0.001）.CircLRP6 silencing was able to upregulate miR125a5p，inhibit the expression of MCL1，enhance the sensitivity of CDDPresistant ESCC cells to CDDP in vitro and in vivo，and promote the apoptosis of CDDPresistant ESCC cells.Inhibition of miR125a5p weakened the effects of circLRP6 silencing on CDDP resistance and apoptosis in CDDPresistant ESCC cells（P 0.05）.circLRP6 could target and negatively regulate the expression of miR125a5p，and MCL1 was the target of miR125a5p.Conclusion CircLRP6 silencing may enhance the sensitivity of CDDPresistant ESCC cells to CDDP through the miR125a5p/MCL1 axis.【Key words】circular RNA lipoprotein receptor 6；esophageal squamous cell carcinoma；cisplatin resistance；miR125a5p/MCL1 axis食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）是食管癌的主要亚型，顺铂（cisplatin，CDDP）是治疗ESCC的首选药物1-2。然而，耐药性限制了CDDP 的实际效果与临床应用3。环状 RNA（circRNA）为一种参与 CDDP 耐药的非编码基因4。环状 RNA 脂蛋白受体 6（circular RNA lipoprotein receptor 6，circLRP6）是 ESCC 中的一种新型致癌circRNA，其表达水平在ESCC中增加，可促进ESCC基 础 研 究doi：10.3969/j.issn.1006-5725.2023.17.006基金项目：河北省自然科学基金（编号：H2021406013）通信作者：林萍萍 E-mail：2183实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17肿瘤发生5。然而，circLRP6对ESCC化疗耐药的影响和机制尚未完全阐明。通过生物信息学数据库对circLRP6的靶miRNA进行预测，发现circLRP6序列与多种miRNA 存在互补的结合位点，通过对比既往的文献报道，筛选其中与“CDDP耐药”、“食管癌”、“ESCC”相关的靶miRNA，最终miRNA-125a-5p（miR-125a-5p）被选定为circLRP的靶基因。因为miR-125a-5p已被证实参与多种肿瘤的CDDP耐药，包括宫颈癌6、口腔鳞状细胞癌7和ESCC8。据报道，miR-125a-5p在ESCC中呈低表达，过表达miR-125a-5p可增强ESCC细胞对CDDP的敏感性8。此外，生物信息学预测显示，miR-125a-5p 与髓样细胞白血病-1（myeloid cell leukemia-1，MCL-1）的 3-UTR 区存在结合位点。MCL-1高表达是癌细胞逃避化疗试剂诱导的细胞死亡的关键因素9-10。在 ESCC 中靶向下调MCL-1可恢复其对CDDP 化疗的敏感性11。本研究旨在阐明这三个分子在 ESCC 的 CDDP 耐药中的调控网络，以期为ESCC的耐药机制研究和靶向治疗提供参考。1材料与方法1.1临床样本收集2019年1月至2022年1月在本院接受切除手术的 ESCC 患者，共获得 60 对ESCC组织样本（ESCC组，其中、期36例，期24 例；CDDP 耐药 27 例，CDDP 敏感患者 33 例）及癌旁组织样本（对照组），组织立即在液氮中冷冻，然后储存在-80 冰箱中用于mRNA提取和分析。年龄范围为 50 72 岁，平均为（60.1 7.5）岁，所有患者均接受CDDP治疗。CDDP耐药患者为基于CDDP 的化疗期间肿瘤复发，CDDP 敏感患者为基于CDDP的化疗期间没有肿瘤复发。纳入标准：（1）经病理检查确诊为ESCC者；（2）患者均为在本院初诊初治的行CDDP规范化疗的病例；（3）有完整的临床资料，可进行随访（包括肿瘤复发时间和总生存期）。排除标准：（1）合并心脑卒中、免疫缺陷病或自身免疫疾病、血液系统疾病者；（2）术前接受过除CDDP外的其他抗肿瘤治疗；（3）合并食管外恶性肿瘤者。本研究经医院伦理委员会批准（审批号：201901003），并获得所有患者的知情同意。1.2细胞培养人正常食管上皮细胞株Het-1A购自上海烜雅生物科技有限公司（XY-XB-1467），人ESCC细胞株（KYSE-150、KYSE-30、TE-1和EC109）购自武汉普诺赛生命科技有限公司（CL-0638、CL-0577、CL-0231、CL-0077）。细胞均用含 10%胎牛血清（FBS）、100 U/mL青霉素和100 g/mL 链霉素的 RPMI-1640 培养基，在 37、5%CO2的培养箱中培养。1.3CDDP抗性细胞系的建立KYSE30的CDDP抗性细胞（KYSE30/CDDP-R）是通过在6个月内逐渐增加浓度的CDDP（从0.2 10 mol/L）建立的。在RPMI-1640培养基中加10%FBS，将处于对数期的 KYSE30 细胞以 0.2 mol/L 的初始浓度暴露于CDDP。48 h 后，用 PBS 洗涤处理过的 KYSE30 细胞3次，并在不含CDDP的RPMI-1640培养基中培养。在达到70%80%汇合时，ESCC细胞以较高浓度暴露于CDDP（每代增加10%20%）。重复上述处理直至达到 10 mol/L 的浓度，得到对 CDDP具有抗性的KYSE30细胞。1.4主要试剂与仪器靶向circLRP6的小分子干扰 RNA（circLRP6 siRNA，si-circLRP6）、miR-125a-5p mimic 和 miR-125a-5p inhibitor 及其阴性对照（si-NC、miR-NC 和 inhibitor-NC）购自广州 RiboBio公司；SYBR Green Premix Ex Taq 荧光定量试剂盒（RR820A）、PrimeScript逆转录试剂盒（RR037A）购自日本TAKARA公司；miRNA逆转录试剂盒（LM-130957）和miRNA荧光定量PCR试剂盒（LM-0132）购自上海联迈生物工程公司等。1.5实时荧光定量 PCR（RTqPCR）检测组织/细胞中circLRP6、miR125a5p和MCL1 mRNA表达从组织/细胞中提取总 RNA，逆转录合成cDNA 后进行 PCR 扩增，检测 circLRP6、miR-125a-5p和MCL-1表达，GAPDH、U6为内参。为了验证circLRP6 在 KYSE30/CDDP-R 细胞中的稳定性，总RNA（2 g）在37 下孵育30 min，用或不用3 U/g RNase R处理KYSE30/CDDP-R细胞以验证circRNA的环状特征。基因的相对表达量由2-Ct法计算。引物序列见表1。1.6KYSE30 细胞和 KYSE30/CDDP-R 细胞对CDDP的敏感性检测将KYSE30细胞和KYSE30/CDDP-R 细胞消化后重悬并接种到 96 孔板（2 103个细胞/孔）。用不同剂量（0、1、2、5、10 和15 mol/L）的 CDDP 处理 48 h。每孔加入 10 L CCK-8 溶液并再孵育 2 h。在酶标仪上检测各孔在450 nm处的吸光度（A）值，计算细胞活力。通过相对存活曲线分析CDDP的半数抑制浓度（IC50）。细胞活力（%）=（CDDP 处理组 A 值/对照组 A 值）100%。1.7Western blot检测细胞中MCL1蛋白表达 从细胞中提取总蛋白，将等量蛋白质（50 g/泳道）通过10%SDS-PAGE分离并转膜，封闭膜2 h，与一抗MCL-1（1 1 000）、GAPDH（1 10 000）在4 下孵育过夜。室温下将二抗（1 5 000）添加到膜2184实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17中孵育2 h。显影，Image J 1.8.0版软件用于灰度分析；GAPDH为内参。1.8流式细胞仪分析细胞凋亡转染后用10 mol/L CDDP 处理各组细胞48 h，然后收集、洗涤和重悬各组细胞，加入 5 L Annexin V-FITC 和 5 L PI，避光孵育15 min以染色细胞。用流式细胞仪分析凋亡细胞。1.9统计学分析数据表示为均值标准差，使用GraphPad Prism 8.0 进行分析。两组间比较采用t 检验，单向方差分析和 SNK-q 检验用于多组间比较（两组以上）。circLRP6 和 miR-125a-5p、miR-125a-5p 和 MCL-1 以及 miR-125a-5p 和 circLRP6 之间的相关性是通过Pearson相关性分析来确定的。P 0.05为差异有统计学意义。2结果2.1CircLRP6 的结构稳定性验证CircLRP6 来源于LRP6基因的外显子2，其剪接成熟序列长度为394 bp（图1A）；然后发现circLRP6相对于线性LRP6 mRNA可显著抵抗RNase R降解（图1B），表明circLRP6比LRP6更稳定。2.2CircLRP6 在 ESCC 组织和细胞中的表达与对照组相比，ESCC组癌组织中circLRP6、MCL-1 mRNA水平升高，miR-125a-5p水平降低（P 0.001）（图2）。根据RT-qPCR 确定的circLRP6表达水平的平均值将ESCC患者分为两组，高于或低于平均值的 circLRP6 表达分别被认为是高或低表达，发现 circLRP6 表达与 CDDP 敏感性、TNM 分期和淋巴结转移相关（P 0.05，表2）。此外，CDDP耐药患者癌组织中 circLRP6、MCL-1 mRNA 水平高于CDDP敏感患者，而miR-125a-5p水平低于CDDP敏感患者（P 0.001，图3）。与Het-1A细胞相比，ESCC细胞株中circLRP6和 MCL-1 mRNA 水平升高，miR-125a-5p 水平降低（P 0.001），KYSE-30 细胞中 circLRP6 和 MCL-1 mRNA水平最高，miR-125a-5p水平最低（P 0.05，图4）。故选择KYSE-30细胞为后续实验对象。2.3KYSE30 细胞和 KYSE30/CDDPR 细胞对CDDP 的敏感性与 KYSE30 细胞相比，KYSE30/CDDP-R 细胞中 CDDP 的 IC50增加（表 3）。此外，KYSE30/CDDP-R 细胞中 circLRP6 表达水平 （3.06 0.27）vs.（1.02 0.14），P 0.05 和MCL-1 mRNA水平 （3.59 0.30）vs.（1.01 0.12），P 0.05 高于KYSE30细胞，miR-125a-5p水平低于KYSE30细胞（0.25 0.04）vs.（1.00 0.09），P 0.05。2.4沉默 circLRP6 对 KYSE30/CDDPR 细胞中miR125a5p 和 MCL1 表达的影响与 Control组、si-NC 组比较，si-circLRP6 组 circLRP6、MCL-1的mRNA和蛋白水平降低，miR-125a-5p水平升高（P 0.05）；与 si-circLRP6 组、si-circLRP6+anti-NC组比较，si-circLRP6+anti-miR-125a-5p 组 MCL-1 的表1RT-qPCR引物Tab.1RT-qPCR primersRNAcircLRP6LRP6miR-125a-5pMCL-1GAPDHU6Forward primer（5-3）GAGTTGGATCAACCCAGAGCTTTAGCAAACAGACGGGACTTCTGTCCCTGAGACCCTTTAACCGGCAGTCGCTGGAGATTATAGAAGGCTGGGGCTCATTTGCTCGCTTCGGCAGCACAReverse primer（5-3）TCCTCCAAGCCTCCAACTACGCCTCCAACTACAATCGTAGCCGAGGAGAAGACGGAAGAATGTGGTGGTGGTTGGTTAAGGGGCCATCCACAGTCTTCACGCTTCACGAATTTGCGTGTCRNase R-RNase R+*circLRP6LRP6GAPDH1.51.00.50.0Relative RNA expressionAB注：A，circLRP6 的外显子信息；B，qRT-PCR 分析 RNase R 处理和未处理KYSE30/CDDP-R细胞中circLRP6的表达，*P 0.05图1circLRP6的结构稳定性验证Fig.1Structural stability verification of circLRP62185实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17mRNA 和蛋白水平升高，miR-125a-5p 水平降低（P 0.05）。见图5。2.5 沉 默 circLRP6 对 KYSE30/CDDP R 细 胞CDDP 敏感性的影响与 Control 组、si-NC 组比较，si-circLRP6 组 KYSE30/CDDP-R 细胞中 CDDP的 IC50降低；与 si-circLRP6 组、si-circLRP6+anti-NC组比较，si-circLRP6+anti-miR-125a-5p 组 KYSE30/CDDP-R 细 胞 中 CDDP 的 IC50升 高（P 0.05）；见表4。2.6 沉 默 circLRP6 对 CDDP 诱 导 的 KYSE30/CDDPR细胞凋亡的影响与Control组、si-NC组比 较，si-circLRP6 组 KYSE30/CDDP-R 细 胞 凋 亡率升高（P 0.05）；与 si-circLRP6 组、si-circLRP6+anti-NC 组 比 较，si-circLRP6+anti-miR-125a-5p 组KYSE30/CDDP-R 细 胞 凋 亡 率 降 低（P 0.05）；见图6。ESCCControl*3210ESCCControlESCCControl*circLRP61.51.00.50.0miR125a5p43210MCL1 mRNA注：与对照组相比，*P0.05图2ESCC患者癌组织中circLRP6、miR-125a-5p和MCL-1 mRNA表达比较Fig.2Comparison of circLRP6，miR-125a-5p and MCL-1 mRNA expression in cancer tissues of ESCC patients表2CircLRP6表达与ESCC患者临床特征的相关性Tab.2Correlation between CircLRP6 expression and clinical characteristics of ESCC patients临床特征性别 男性 女性年龄 3 cmTNM分期-淋巴结转移 无 有CDDP敏感性 敏感的 耐药的例数352539213228362420403327ESCC患者（n=60）circLRP6高表达（n=32）21112012191313196261121circLRP6低表达（n=28）141419913152351414226P值0.3360.8710.4570.0030.0220.0022186实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.173讨论circRNA 在肿瘤耐药性过程中发挥重要作用13。据报道，circLRP6 可促进骨肉瘤细胞生长和转移14；并可驱动ESCC的肿瘤发生5。本研究发现，circLRP6 在 ESCC 患者中的高表达与 CDDP敏感性、TNM分期和淋巴结转移相关，且circLRP6在CDDP耐药ESCC患者中的表达高于CDDP敏感患者，表明circLRP6可能与CDDP耐药相关。基于上述临床意义，笔者建立了抗CDDP的ESCC细胞系，以进一步研究 circLRP6 可能的功能机制。结果显示，敲低circLRP6后，CDDP抗性ESCC细胞对CDDP的敏感性增强，且增加了CDDP诱导细胞凋亡。CircRNA的功能部分取决于其亚细胞定位15。为了确定 circLRP6 的功能机制，笔者首先检测了它在ESCC细胞中的亚细胞定位，发现它主要位于CDDP敏感组CDDP耐药组CDDP敏感组CDDP耐药组CDDP敏感组CDDP耐药组*3210circLRP60.60.40.00.0miR125a5p43210MCL1 mRNA图3CDDP耐药/敏感患者癌组织中circLRP6、miR-125a-5p和MCL-1 mRNA表达比较Fig.3Comparison of circLRP6，miR-125a-5p and MCL-1 mRNA expression in cancer tissues of CDDP-resistant/sensitive patientsHet1AKYSE30EC109TE1KYSE150Het1AKYSE30EC109TE1KYSE150Het1AKYSE30EC109TE1KYSE150#43210circLRP61.51.00.50.0miR125a5p43210MCL1 mRNA注：与Het-1A细胞相比，*P 0.05；与KYSE-30细胞相比，#P 0.05图4不同人ESCC细胞中circLRP6、miR-125a-5p和MCL-1 mRNA表达水平比较（n=6）Fig.4Comparison of circLRP6，miR-125a-5p and MCL-1 mRNA expression levels in different human ESCC cells（n=6）表3DDP对HCT116细胞和HCT116/DDP细胞活力的影响Tab.3Effects of DDP on the viability of HCT116 cells and HCT116/DDP cells x sCDDP浓度（mol/L）01251015IC50（mol/L）细胞活力（%）KYSE30细胞100.00 0.0081.35 4.57*65.40 4.10*42.63 3.95*30.91 3.42*21.74 2.83*3.981KYSE30/CDDP-R细胞100.00 0.0097.72 9.8191.58 9.3578.30 8.22*65.45 7.16*51.20 5.94*20.300注：与对照组（0）相比，*P 0.052187实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17ControlsiNCsicircLRP6sicircLRP6+antiNCsicircLRP6+antimiR125a5pControlsiNCsicircLRP6sicircLRP6+antiNCsicircLRP6+antimiR125a5pControlsiNCsicircLRP6sicircLRP6+antiNCsicircLRP6+antimiR125a5pControlsiNCsicircLRP6sicircLRP6+antiNCsicircLRP6+antimiR125a5psicircLRP6+antimiR125a5pControlsiNCsicircLRP6sicircLRP6+antiNC#&#&40 kDa36 kDaGAPDHMCL11.51.00.50.0circLRP643210miR125a5p1.51.00.50.0MCL1 mRNA0.80.60.40.20.0MCL1 protein注：与Control组相比，*P 0.05；与si-NC组相比，#P 0.05；与si-circLRP6组相比，&P 0.05；与si-circLRP6+anti-NC组相比，P 0.05图5各组KYSE30/CDDP-R细胞中circLRP6、miR-125a-5p和MCL-1表达水平比较（n=6）Fig.5Comparison of expression levels of circLRP6，miR-125a-5p and MCL-1 in KYSE30/CDDP-R cells in each group（n=6）表4沉默circLRP6对KYSE30/CDDP-R细胞CDDP敏感性的影响Tab.4Effects of silencing circLRP6 on CDDP sensitivity of KYSE30/CDDP-R cells x sCDDP浓度（mol/L）01251015IC50（mol/L）细胞活力（%）Control100.00 0.0095.80 9.6488.75 9.2077.43 8.15*64.92 6.83*50.75 5.42*20.114si-NC100.00 0.0096.20 9.5792.16 9.1480.25 8.56*67.10 7.08*51.33 5.65*21.325si-circLRP6100.00 0.0075.71 8.05*61.43 7.02*49.25 6.01*41.96 4.86*32.52 3.74*4.982si-circLRP6+anti-NC100.00 0.0079.99 8.02*64.36 6.15*48.28 5.64*37.53 5.01*30.41 3.69*4.854si-circLRP6+anti-miR-125a-5p100.00 0.0092.35 9.1881.64 8.20*69.50 6.93*54.71 5.82*43.62 5.01*12.150注：与对照组（0）相比，*P 0.05100 101 102 103 104FITCControl104103102101100PIsi-NC100 101 102 103 104FITC104103102101100PIsi-circLRP6100 101 102 103 104FITC104103102101100PIsi-circLRP6+anti-NC100 101 102 103 104FITC104103102101100PIsi-circLRP6+anti-miR-125a-5p100 101 102 103 104FITC104103102101100PI注：与Control组相比，*P 0.05；与si-NC组相比，#P 0.05；与si-circLRP6组相比，&P 0.05；与si-circLRP6+anti-NC组相比，P 0.05图6各组KYSE30/CDDP-R细胞凋亡情况（流式细胞术）Fig.6Apoptosis of KYSE30/CDDP-R cells in each group（flow cytometry）2188实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17细胞质中，这与之前的研究5一致。对于细胞质circRNA，充当海绵miRNA是circRNA 调节化疗相关靶基因常见和重要的转录后机制16。在宫颈癌中，miR-125a-5p 可通过下调 LIM 激酶 1 使宫颈癌细胞对CDDP敏感，从而增加CDDP的抗癌功效6。在本研究中，ESCC标本中miR-125a-5p与circLRP6呈负相关，且与CDDP敏感患者相比，在CDDP耐药患者中miR-125a-5p表达水平降低；表明circLRP6与 miR-125a-5p 之间可能存在结合。此外，RIP 分析显示circLRP6与miR-125a-5p在ESCC细胞中占据相同的 Ago2 位点形成 RNA 诱导的沉默复合物（RISC），表明它们的相互作用可能影响下游mRNA的表达。此外，抑制miR-125a-5p减弱了circLRP6沉默对CDDP抗性ESCC细胞中CDDP耐药性和细胞凋亡的影响。提示，沉默 circLRP6 可能通过靶向上调miR-125a-5p提高ESCC中CDDP的敏感性。MCL-1是一种关键的抗凋亡蛋白，据报道，MCL-1通过充当miR-148a-3p的靶标来抑制ESCC的进展17。YU等11揭示了MCL-1在ESCC中增加，敲低其表达可增强 ESCC 细胞对 CDDP 诱导的细胞凋亡。在本研究中，MCL-1 在 CDDP 抗性 ESCC 组织和细胞中升高，且 CDDP 耐药患者中 MCL-1 的表达水平高于CDDP敏感患者。综上所述，本研究首次探讨了 circLRP6 在CDDP 抗性中的作用。这些结果揭示了 circLRP6敲低通过miR-125a-5p/MCL-1轴增强了CDDP抗性ESCC细胞对CDDP 的敏感性。本研究为ESCC靶向治疗提供了新的思路，对于全面了解肿瘤细胞耐药机制具有重要意义。然而，本研究存在一定的局限性。例如，circLRP6可能靶向多个miRNA，且 miR-125a-5p 可能与多个基因的 3-UTR 结合；circLRP6对CDDP耐药性的影响是否有其他miRNA/mRNA参与，仍需进一步证实。【Author contributions】LIN Pingping performed the experiments and wrote the article.LI Fubo performed the experiments.WANG Dongjuan and GUO Yan revised the article.DONG Yi designed the study and reviewed the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.参考文献1 王静，杨雅阁，郑晓永，等.安罗替尼单药在晚期食管鳞癌患者后线治疗中的疗效及安全性 J.实用医学杂志，2022，38（7）：893-899.2 ZHOU T，FU H，DONG B，et al.HOXB7 mediates cisplatin resistance in esophageal squamous cell carcinoma through involvement of DNA damage repair J.Thorac Cancer，2020，11（11）：3071-3085.3 YAJIMA S，SUZUKI T，NANAMI T，et al.Randomized phase II study to comparing docetaxel/nedaplatin versus docetaxel for 5-fluorouracil/cisplatin resistant esophageal squamous cell carcinoma J.Ann Thorac Cardiovasc Surg，2021，27（4）：219-224.4 MU Q，LV Y，LUO C，et al.Research progress on the functions and mechanism of circRNA in cisplatin resistance in tumors J.Front Pharmacol，2021，12：709324.5 WANG J，ZHU W，TAO G，et al.Circular RNA circ-LRP6 facilitates Myc-driven tumorigenesis in esophageal squamous cell cancer J.Bioengineered，2020，11（1）：932-938.6 XU Y，ZHENG Y，DUAN Y，et al.MicroRNA-125a-5p targets LIM kinase 1 to inhibit cisplatin resistance of cervical cancer cellsJ.Oncol Lett，2021，21（5）：392.7 LIU X，ZHAO T，YUAN Z，et al.MIR600HG sponges miR-125a-5p to regulate glycometabolism and cisplatin resistance of oral squamous cell carcinoma cells via mediating RNF44 J.Cell Death Discov，2022，8（1）：216.8 ZHAO Y，MA K，YANG S，et al.MicroRNA-125a-5p enhances the sensitivity of esophageal squamous cell carcinoma cells to cisplatin by suppressing the activation of the STAT3 signaling pathway J.Int J Oncol，2018，53（2）：644-658.9 QI Y，DING Z，YAO Y，et al.Apigenin induces apoptosis and counteracts cisplatin-induced chemoresistance via Mcl-1 in ovarian cancer cells J.Exp Ther Med，2020，20（2）：1329-1336.10MICHELS J，OBRIST F，VITALE I，et al.MCL-1 dependency of cisplatin-resistant cancer cellsJ.Biochem Pharmacol，2014，92（1）：55-61.11YU X，LI W，XIA Z，et al.Targeting MCL-1 sensitizes human esophageal squamous cell carcinoma cells to cisplatin-ind