病理学作业.doc

2014年南方医科大学研究生课程班实用病理学课程考试试卷
（云南教学点）
考试方式：计算机试卷应答
考试要求：独立完成
试卷责任教师：申洪
学员姓名：毛龙 学号 71300306 成绩
试题：
1．述常规病理学制样的技术关键。（10分）
1、病理标本的接收:是在取材、固定组织前首先要做的第一步工作，它是临床与病理科交接的一个重要环节，它为开展病理学检查、病理档案的保存奠定了基础。
2、组织固定：活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织化学改变，并导致形态学上可见的细胞器变化和细胞组织的形态改变直至腐败自溶。固定的目的就是要通过使用化学和物理的方法，尽可能地保存组织细胞离体时具有的生理和病理形态结构及生物化学和免疫化学成分。
良好的固定是制作优秀病理切片的基础，也是特殊染色、组织化学、免疫组织化学和组织原位分子杂交等技术方法赖以成功的基础。
因此，在病理技术工作中必须高度重视固定的质量。
3、取材：是将送检标本进行客观描述并将病变部位组织切成厚薄适度的小片后装入小盒(进入组织脱水程序)，取材至关重要。
4、组织脱水:组织经固定后会有大量水分，组织脱水是用某些溶剂逐渐将组织内的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡的渗入。
5、包埋：组织块经过固定、脱水、透明、浸蜡等处理后，用包埋剂(如石蜡、树脂、塑料等)将其包制成含组织块的蜡块或塑料块等的过程称为包埋。不同的包埋方法有不同的要求，经包埋后，组织可达到一定的硬度和韧度，有利于切成理想的薄片。
6、组织石蜡切片：组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。
7、常规染色：苏木精(hematoxylin)和伊(eosin)染色方法，简称HE染色方法，是生物学、细胞学与组织学最广泛应用的染色方法。在病理科称为常规染色方法。病理学的诊断都是以HE方法为基础的。染色的目的是把组织切片或细胞涂片等浸入染料及其他染色剂配成的染色液中，经过适当的时间和处理，使组织或细胞及其他成分染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，从而便于光学显微镜下进行观察和研究。
8、封片：封片是将组织切片封固保存于载玻片与盖玻片之间，使之不与空气发生接触，防止其氧化、褪色，利于镜检观察及保存。
2. 试述免疫组化技术基本原理及在临床医学中的应用。（10分）
一、 免疫组化技术的基本原理
应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
二、免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面
⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；
⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位；
⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型； ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；
⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。
⑹为临床提供治疗方案的选择。
3. 何为阳性单位？如何测试？测试分析中应注意哪些问题。（15分）
将排除了切片或涂片本底因素后的纯免疫组化反应程度按灰度图像分为0(白)到100(黑)个等级,每一等级定义为1个阳性单位。PU 值大小与反应强度成正比, PU 最大值为100、理论最小值为0。从实际测试应用考虑,我们进一步发展了免疫组化染色定量测试方法,导出适于境界明显或边界模糊不清的阳性反应区域的 PU 测算新公式,并使之能适于两种截然不同的灰度设定状态时的测试,公式如下：
PU=(|G_α-G_β|)/(G_(max))×100
(1)PU=(|G_A-G_β|)/(A_(Aα)·G_(max))×100
(2)PU=(|G_A-G_b|)/((1-A_(Aβ)·G_(max))×100
(3)PU=(|G_α-G_A|)/(A_(Aβ)·G_(max))×100
(4) PU=(|G_a-G_A|)/((1-A_(Aα)·G_(max))×100
(5) 式中 G、G 和 G_A 分别为不考虑灰度设定方法但在相同灰度设定时待测阳性产物α、背景β和由α、β区构成的 A 区域范围的平均灰度,A_A 为相在 A 区域中的面积密度,A_(Aα)=n/(m+n),A_(Aβ) =m/(m+n),G_(max)为测试仪器的最大灰度分级。根据 G、G,或据测试区域 A 的灰度级 G_A 和 A 区域的面积(m+n)及阳性反应产物α相的灰度级 G _α及其面积面积 n(或背景相的灰度级 G 及其背景面积 m)即可求得 PU。本法灰度测试无需考虑灰度设定方法,只需在同一灰度设定条件下测试即可。式(1)适于测算境界明显的粒子,式(2)、 (3)、(4)、(5)对境界明显或边界模糊不清的反应区均适宜。本法对组织学切片和细胞学涂片的免疫组化显色反应的定量测试均适宜。本法还可用于其它组织化学、细胞化学和原位分子杂交反应显色程度的定量。
4. 何谓定量病理学？请提供中文及英文定量病理学方面的研究论文各1篇，并用中文摘要报告论文。（15分）
定义：用各种定量手段和分析方法在定性研究的基础上进一步定量的阐明疾病的病因、发病机制、发生发展规律及病变的形态、机能和代谢的一门学科，是传统病理学学科的
进一步发展、完善和补充。
1、Quantitatitive Molecular Pathological Techniquesuing and Developing
摘要：目的 结合近年来分子病理学技术的发展,探讨定量分子病理学技术在糖尿病研究中的应用.方法 联合应用RT-PCR、ISH、IHC、FCM及图像分析技术进行糖尿病分子发病机理的研究.结果 分别证实了联合微量营养素上调胰岛β细胞胰岛素转录与翻译水平的表达并保护胰岛正常结构,拮抗糖尿病的发生发展.结论 不断改进与发展定量分子病理学技术,有利于提高糖尿病分子发病机理的研究水平.。
2、症肺炎模型定量病理学研究
摘 要：目的用体视学方法定量研究SD（SpragueDawley）大鼠细菌性重症肺炎模型病理的三维形态结构特点及变化规律。方法SD大鼠随机分为模型组、观察组和对照组（每组分为3小组，前两组每小组8只，对照组每小组4只）。真中，模型组和观察组分剐接种相同浓度不同剂量的肺炎克雷伯菌菌液，对照组接种与模型组剂量相同的生理盐水。分剐于接种后的第2、4、6天分批处死动物。留取肺组织标本，HE染色，每张切片随机取3—4个视野，用Image—Pro图像分析软件分别测试肺实质红细胞体积密度、支气管残余管腔体积密度、肺泡体积密度。结果随着接种时间的延长，模型组、观察组的肺实质红细胞体积密度的变异系数逐渐增大，尤以模型组增大明显；模型组、观察组的支气管残余管腔体积密度变异系数逐渐减小，尤以模型组明显；模型组、观察组肺泡体积密度的变异系数逐渐变小，尤以模型组明显。对照组则无明显变化。结论随着接种时间的延长，模型组、观察组病变逐渐加重，尤以模型组更为明显。在病理体视学上表现为：红细胞在整个肺组织中的体积增加；支气管残余管腔与原始管腔的比积减小；肺泡腔与整个肺实质体积比减小。
5. 试比较透射电子显微镜与光学显微镜生物样品制样技术的相似及
不同之处。（20分）
光学显微镜是以可见光为照明源，将微小的物体形成放大影像的光学仪器；而电子显微镜则是以电子束为照明源，通过电子流对样品的透射或反射及电磁透镜的多级放大后在荧光屏上成像的大型仪器。它们的不同在于： ①照明源不同：光镜的照明源是可见光，电镜的照明源是电子束；由于电子束的波长远短于光波波长，因而电镜的放大率及分辨率显著高于光镜。 ②透镜不同：光镜为玻璃透镜；电镜为电磁透镜。 ③分辨率及有效放大本领不同：光镜的分辨率为0.2μm左右，放大倍数为1000倍；电镜的分辨率可达0.2nm，放大倍数106倍。 ④真空要求不同：光镜不要求真空；电镜要求真空。 ⑤成像原理不同：光镜是利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化成像；而电镜则是利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差成像。 ⑥生物样品制备技术不同：光镜样品制片技术较简单，通常有组织切片、细胞涂片、组强压片和细胞滴片等；而电镜样品的制备较复杂，技术难度和费用都较高，在取材、固定、脱水和包埋等环节上需要特殊的试剂和操作，还需要制备超薄切片。
6. 设计一研究课题，将常规病理学技术、电子显微镜技术、免疫组化技术及图像分析技术应用在课题研究方法中。（30分）
持续恒压组织扩张术的基础理论及临床应用研究

目的：
研制恒压灌注泵模型机和微电脑便携式恒压灌注仪。研究持续恒压快速扩张技术。论证持续恒压扩张术的效果。
方法：
用HY—Ⅰ型恒压灌注泵和白色小家猪制作持续扩张动物模型。用微电脑图象分析技术、组织病理学技术、电子显微镜技术、生物化学测定法、免疫组织化学和分子生物学技术研究皮肤软组织对持续扩张术的种种反应。
结果：
HY—恒压灌注泵性能稳定、完全附合动物实验标准。用垂直小切口埋植扩张器的手术方法适合于持续快速扩张术。在5.3kPa的灌注压下，6天时间可以完成注水扩张。持续皮肤扩张术的组织形态学改变与常规扩张术相似。扩张后表皮增厚，真皮变薄，胶原纤维结构松散，弹力纤维和网状纤维增生，但纤维囊厚度明显低于常规扩张法。扩张刺激可增强细胞的增殖和凋亡，也能促进胶原蛋白的合成与分解，但最终结果是上皮增厚、真皮成纤维细胞和血管密度增加，胶原总量增加。对比分析证明，持续扩张术对刺激细胞增殖和胶原合成更为有效，常规扩张后真皮成纤维细胞密度增加9.10％，持续扩张增加17.00％。常规扩张后胶原蛋白增长10.41％，持续扩张后增长9.17％，而持续扩张后1月胶原蛋白增长69.25％，故扩张皮瓣转移后的胶原合成比扩张中的胶原合成更有意义。测量结果显示，相同的扩张器作相同量的注水扩张，扩张器内压力稳定，皮肤软组织无血运障碍。持续扩张术和常规扩张术可获得相同面积的局部额外皮肤，但持续扩张术的皮肤净增面积较小。持续扩张术和常规扩张术的皮肤复合组织即时回缩率相同，持续扩张后皮瓣移植后早期有明显回缩，但4周后皮瓣宽度完全舒展到正常对照皮瓣宽度。持续扩张后皮瓣和常规扩张后皮瓣的存活能力也完全相同。用HY—3型微电脑灌注仪对10例皮肤疤痕患者作持续扩张治疗，近期效果满意，主要并发症为扩张区夜间疼痛。
结论：
持续恒压扩张术是一种操作简单、安全有效的快速扩张法，可以在临床上推广应用。