乙型肝炎疫苗.doc

重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）
外文名称Recombinant Hepatitis B Vaccine (Saccharomyces cerevisiae)
剂 型注射剂
批准文号S20100002
药品类型生物制品
规 格每1次人用剂量1.0 ml/60μg
目录
1基本信息
2成分和性状
3接种对象
4作用与用途
5规格
6免疫程序与剂量
7不良反应
8注意事项
9贮藏
10包装
11有效期
12执行标准
13批准文号
1基本信息

为使更多的人群免受乙肝病毒的侵害，解决低无应答人群按常规免疫剂量接种乙肝疫苗后没有产生保护性抗体的问题，60μg/1.0ml/支规格的重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）可用于低无应答人群的免疫预防。
2成分和性状

本品系由重组酿酒酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）经纯化，加氢氧化铝佐剂制成。为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不含任何防腐剂。
有效成分：乙型肝炎病毒表面抗原。
辅料：氢氧化铝、氯化钠。
3接种对象

本疫苗适用于对乙型肝炎疫苗常规免疫无应答的16岁及以上年龄的乙型肝炎易感者。
以上所述“无应答者”系指按照常规免疫剂量和程序接种3剂乙型肝炎疫苗后，经采血确认其抗体水平未达到阳转者（≥10mIU/ml为阳转标准）。
4作用与用途

接种本规格疫苗后，可刺激对常规剂量和程序接种无应答人群的机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力。用于预防乙型肝炎。[2]
5规格

每支1.0 ml。每1次人用剂量1.0 ml，含HBsAg 60μg。
6免疫程序与剂量

（1）于上臂三角肌肌内注射。
（2）根据目前临床研究结果，推荐无应答者接种1剂（60μg），经采血确认其抗体水平仍未达到阳转者再考虑接种第2剂，两剂间隔至少4周以上。
7不良反应

基于国内已完成的1105例16岁以上无应答者的临床试验结果汇总分析（详见【临床试验】），60μg（445例）、30μg（439例）和10μg（221例）疫苗组不良反应总体发生率分别为33.03%、31.21%、29.86%。所观察到的不良反应均以1级不良反应为主，未发生3级以上不良反应，所有不良反应均在7日内恢复。
常见不良反应：局部反应表现为注射局部疼痛、硬结、红斑、肿胀、皮疹、瘙痒等；全身反应表现为发热、头痛、疲倦乏力、变态反应、肌肉痛；偶见不良反应有恶心、呕吐、腹泻和咳嗽等。一般不需特殊处理，可自行缓解，必要时可对症治疗。
尽管本疫苗临床试验中未发现以下罕见不良反应，但接种时应注意密切观察：过敏性休克、神经脱髓鞘病变、过敏性皮疹、血小板减少性紫癜、神经系统疾病、急性肾小球肾炎和肝、肾疾病。
如出现以上未提及的不良反应，应及时与医生取得联系。
8注意事项

（1）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者。
（2）对于处于乙型肝炎潜伏期的患者尚不明确接种本品能否预防乙型肝炎；本品不推荐用于暴露后的免疫预防（如针刺损伤等）。
（3）由于皮内注射和臀部肌肉注射不能达到最佳免疫效果， 应避免这些途径接种；但因为肌肉注射可使血小板减少症和出血性疾病患者发生出血，在此例外情况下这些患者可皮下注射。本品在任何情况下都不能静脉注射。
（4）注射前应充分摇匀；疫苗容器开启后应立即使用。
（5）疫苗有摇不散的块状物、疫苗容器有裂纹、标签不清或过期失效者，均不得使用。
（6）应备有肾上腺素等药物，以防偶有严重过敏反应发生时使用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
（7）本品严禁冻结。
（8）注射本品第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，一般不再注射第2针。
（9）特殊人群的使用：
孕妇：目前尚无此人群的相关研究数据，应充分权衡利弊后决定是否使用本品。
哺乳期妇女：目前尚无此人群的相关研究数据，应充分权衡利弊后决定是否使用本品。
（10）药物的相互作用：
与其他疫苗同时接种：本品尚未进行同期（先、后或同时）接种其他疫苗对本疫苗免疫原性影响的临床研究。目前没有数据可以评估本品与其他疫苗同时接种的影响。
免疫抑制药物：包括免疫抑制剂、化疗药、抗代谢药物、烷化剂、细胞毒素类药物、皮质类固醇类药物等，可能会降低机体对本品的免疫应答。
正在接受治疗的患者：为避免可能的药物间相互作用，建议咨询医生。
9贮藏

于2～8℃下避光保存和运输。
10包装

玻璃安瓿（2支/盒或12支/盒）；预填充注射器（1支/盒、2支/盒或20支/盒）。
11有效期

36个月
12执行标准

国家药品标准YBS00512011
13批准文号

国药准字S20100002[2]

【成分和性状】本品系由重组醮酒酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)经纯化，加人铝佐剂制成.为乳白色混悬液体，WW沉淀而分层，易摇散，不含任何防腐剂。
有效成分：乙型肝炎病毒表面抗原。
辅料：应列出全部批准的辅料成分。
【接种对象】本疫苗适用于乙型肝炎易感者，尤其是下列人员：
(1) 新生儿，特别是母亲为HBsAg、 HBeAg阳性者。
(2) 从事医疗工作的医护人员及接触血液的实验人员，
【作用与用途】接种本疫苗后，可刺激机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力。用于预防乙型肝炎.
【规格】 每瓶0.5ml或1.0ml,每1次人用剂量0. 5ml,含HBsAg 5 ^ g 或l O ^ g ; 或每1 次人用剂貴1.0ml,含HBsAg 10(ig。
【免疫程序和剂量】
(1)于上臂三角肌肌内注射。
(2)基础免疫程序为3针，分别在0、 1、 6月接种.新生儿第1针在出生后24小时内注射。16岁以下人群每1次剂量为5叫，16岁或以上人群每1次剂量为lO^g,
【不良反应】
常见不良反应：
一般接种疫苗后24小时内，在注射部位可出现疼痛和触痛，多数情况下于2~3天内自行消失。
罕见不良反应：
(1) 一般接种疫苗后72小时内，可能出现一过性发热反应，一般持续1~2天后可自行缓解接种部位轻、中度的红肿、疼痛，一般持续1~2天后可自行缓解，不黹处理。
(3) 接种部位可出现硬结，一般1 ~ 2个月可S行吸收.
极罕见不良反应-
(1) 局部无菌性化脓：一般要用注射器反复抽出脓液，严*时（如出现破St) S扩创淸除坏死组织，病时较长，最后可吸收愈合。
(2) 过敏反应：过敏性皮疹、阿瑟反应。阿瑟反应一般出现在接种后10天左右，局部红肿持续时长.可用固醇类药物进行全身和局部治疗。
(4) 过敏性休克：一般在接种疫苗后1小时内发生，应及时注射肾上腺素等抢救措施进行治疗。
【禁忌】
（1〉已知对该疫苗所含任何成分，包括辅料以及甲醛过敏者，
(2) 患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者.
(3) 妊娠期妇女。
(4) 患未控制的癍痫和其他进行性神经系统疾病者.
【注意事项】
（1)以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癞痫史者、过敏体质者。
(2) 使用时应充分摇匀，如疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗瓶内有异物者均不得使用，
(3) 疫苗瓶开启后应立即使用。
(4) 应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用《接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟，
(5) 注射第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，―般不再注射第2针。对于母婴阻断的嬰儿，如注射第2、
3针应遵照医嘱，
(6) 严禁冻结。
【有效期】36个月。
重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）
Chongzu Yixing Ganyan Yimiao (CHO Xibao)
Recombinant Hepatitis B Vaccine
(CHO Cell)
本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎（简称乙肝）病毒表面抗原（HBsAg)经纯化，加人氢氧化铝佐剂制成。用于预防乙型肝炎。
2 制造
2.1生产用细胞
2.1.1细胞名称及来源
生产用细胞为DNA重组技术获得的表达HBsAg的C H O 细胞株。
2.1.2细胞库的建立及传代
应符合"生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程"规定。G株主细胞库细胞代次应不超过第21代，工作细胞库细胞代次应不超过第26代，生产疫苗的最终细胞代次应不超过第33代。
2.1. 3主细胞库及工作细胞库细胞的检定
应符合"生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程"规定。
2.1.3.1细胞外源因子检査
细菌和真菌、支原体、细胞病毒外源因子检査均应为阴性。
2.1.3.2细胞鉴别试验
应用同工酶分析、生物化学方法、免疫学、细胞学和遗传标记物等任何方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。
(1) 细胞染色体检査
用染色体分析法进行检测，染色体应为20条。
目的蛋白鉴别
采用酶联免疫法检査，应证明为HBsAg。
2.1.3. 3 HBsAg表达量
主细胞库及工作细胞库细胞HBsAg表达量应不低于原始细胞库的表达量
2.1.4保存
细胞库细胞应保存于液氮中。
2 . 2 原液
2. 2.1细胞制备
取工作细胞库细胞，«苏培养后，经胰蛋白酶消化，置适宜条件下培养。
2.2.2培养液
培养液为含有适量灭能新生牛血淸的DMEM液。新生牛血清的质量应符合要求（附彔31 D ) .
2.2.3细胞收获
培养适宜天数后，弃去培养辩，换维持液继续培养，当细胞表达HBsAg达到1.0mg/L以上时收获培养上清液。根据细胞生长情况，可换以维持液继续培养，进行多次收获。应按规定的收获次数进行收获。每次收获物应逐瓶进行无菌检査。收获物应于2~81C保存。
2.2.4对照细胞病毒外源因子检査
依法检査（附录C),应符合规定。
2.2.5收获物合并
来源于同一细胞批的收获物经无菌检査合格后可进行合并。
2.2.6纯化
合并的收获物经澄清过滤，采用柱色谱法进行纯化，脱盐，除菌过滤后即为纯化产物。
2.2.7纯化产物检定
按3.1项进行。
2.2.8纯化产物保存
过3个月。
2.2.9纯化产物合并
同一细胞批来源的HBsAg纯化产物检定合格后，经除菌过滤后可进行合并。
2.2.10甲醛处理
合并后的HBsAg纯化产物中按终浓度为20(Vg/ml）加人甲醛，置37TC保温72小时，
2. 2.11除菌过滤
甲醛处理后的HBsAg经超滤、浓縮、除菌过滤后即为原液（亦可在甲醛处理前进行除菌过滤）。
2.2.12原液检定
按3 . 2项进行。
2 . 3 半成品
2.3.1配制
按最终蛋白质含量为lOftg/ml或2(Vg/ml进行配制。加人氢氧化铝佐剂吸附后，可加人适量硫柳汞作为防腐
剂，即为半成品。
2.3.2半成品检定
按3 . 3项进行。
2 . 4 成品
2.4.1分批
应符合"生物制品分批规程"规定。
2.4.2分装
应符合"生物制品分装和冻干规程"规定，
2.4.3规格
每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂！:为0. 5ml,含HBsAg 10Mg;每1次人用剂量为1.0ml,含HBsAg 10^g
或20雄。
2.4.4包装
符合"生物制品包装规程"规定。
3 检定
3.1纯化产物检定
3.1.1蛋白质含量
应为100 (附录W B第二法），
3.1.2特异蛋白带
采用还原型SDS"聚丙烯酰胺凝胶电泳法（附录IVC),分离胶胶浓度15%,浓縮胶胶浓度5%，上样量为5Mg,银染法染色。应有分子质量23kl)、 27kD蛋白带，可有30kD蛋白带及HBsAg多聚体蛋A带。
3.1.3纯度
采用高效液相色谱法（附录IE B ) 测定， 用S E C -HPLC法：亲水树脂体积排阻色谱柱，排阻极限1000kD,孔径100nm，粒度17戶，直径7. 5mm，长30cm;流动相为O.05mol/L PBS (pH6.8);检測波长280nm，上样量100fJ 积归一化法计算HBsAg纯度，应不低干95.0%。
3.1.4细菌内毒素检査
每lOptg蛋白质应小于10EU (附录M E凝胶限度试验〉
3.2原液检定
3.2.1无菌检査
依法检査（附录XI A),应符合规定。
3. 2.2支原体检査
依法检査（附录M B),应符合规定。
3.2.3蛋白质含量
应在100~200ng/ml (附录M B第二法），
3.2.4特异蛋白带
按3.1.2项进行.
3.2.5牛血淸白蛋白残留景
应不髙于50ng/剂（附录W 1)。
3.2.6纯度
按3.1.3项进行。
3.2.7 CHO细胞DNA残留量
应不高于10pg/剂（附录K B第一法)。
3.2.8 CHO细胞蛋白质残留量
采用酶联免疫法測定，应不高于总蛋白质含量的。.05%。
3.2.9细菌内毒索检査
每10^蛋白质应小于10EU (附录M E凝胶限度试验〉。
3. 2.10 N端氨基酸序列（每年至少测定1次）
用氨基酸序列分析仪测定，N端氨基酸序列应为：Met-Glu-Asn-Thr^Ala-Sei^Gly^Phe-Leu-Gly-Pro-1-eul^
eu-Val-I^eu,
3.3半成品检定
3.3.1无菌检査
依法检査（附录M A),应符合规定。
3.3.2细菌内毒素检査
应小于10 EU/剂（附录M E凝胶限度试验)。
3-4成品检定
3.4.1鉴别试验
采用酶联免疫法检査，应证明含有HBsAg。
3 . 4 . 2 外观
应为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物，
3 . 4 . 3 装i t
依法检査（附录I A)，应不低于标示量。
3.4.4化学检定
3. 4. 4. 1 p H值
应为5.5~6.8 (附录V A ) .
3.4.4.2铝含量
应不高于0.43mg/ml (附录\I F )。
3.4.4.3琉柳汞含量
如加硫柳汞，应不髙于60pg/ml (附录\I B ) .
3-4.4.4游离甲醛含量
应不高于50(xg/ml (附录M L ) .
3.4.5效价测定
将疫苗连续稀释，每个稀释度接种4 龄未孕雌性NIH或BALB/c小鼠20只，每只腹腔注射1. 0 m l ,用参考疫苗做平行对照，4 嗨联免疫法或其他适宜方法測定抗-HBs,计算EDso,供试品Efto(稀释度）/参考疫苗EDb„ (稀释度）之值应不低于1. 0。
3. 4.6无菌检査
依法检査（附录M A),应符合规定。
3.4.7异常毒性检査
依法检査（附录M F),应符合规定，
3.4.8细菌内毒素检査
应小于10EU/剂（附录M E凝胶限度试验)。
3.4.9抗生索残留量
生产过程中加人抗生素的应进行该项检査。采用酶联免疫法检测，应不高于50ng/剂。
4 保存、运输及有效期
于2~8t避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
5 使用说明
应符合"生物制品包装规程"规定和批准的内容。

重组乙型肝炎疫苗（汉逊酵母）
Chongzu Yixing Ganyan Yimiao(Hanxun Jiaomu)
Recombinant Hepatitis B Vaccine(Hansenula polymorpha)
本品系由重组汉逊酵母表达的乙型肝炎（简称乙肝）病毒表面抗原（HBsAg〉经纯化，加人铝佐剂制成„于预防乙型肝炎。
1 基本要求
生产和检定ffl设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合"凡例"的有关要求。
2 制造
2.1生产用菌种
2.1.1名称及来源
以DNA重组技术构建的表达HBsAg的重组汉逊酵母工程菌株。菌种号为HBsAgU35-16-9或其他批准的重组汉逊酵母工程菌株。
2.1.2种子批的建立
应符合"生物制品生产检定用菌毒种管理规程"规定。原始种子批HBsAgU35-16-9在酵母完全培养基上连续扩增2代为主种子批.主种子批连续扩增2代为工作种子批.
2.1.3种子批菌种的检定
主种子批及工作种子批应进行以下全面检定，
2.1.3.1 HBsAg基丙序列测定
HBsAg基因序列应与原始种子批保持⋯致。
2.1. 3.2 HBsAg外源基因和酵母MOX基因的检定
扩增得2 条P C R 产物的D N A 电泳条带长度应为：H B s A g 外源基因D N A 7 6 1 b p , 酵母M O X 基因DNA 2072bp。
2.1. 3. 3外源基因整合于宿主染色体中的检定
种子批菌种基因组DNA应无游离质粒DNA电泳条带,扩增的PCR产物中应有HBsAg外源基H DNA电泳
条带。
2-1.3.4 HBsAg外源基丙拷贝数检定
种子批菌种采用杂交法检测，整合HBsAg外源基因拷W数应在30个以上。
2.1.3.5整合基因稳定性试验
种子批菌种培养160小时，应符合2.1. 3. 4项要求。
2.1.3.6培养物纯度
将菌种接种至酵母完全培养基中，于33"培养1418小时后，将培养物分别接种于胰酪胨大豆肉汤培养基与液体琉乙醉酸盐培养基，于30~35 养7天，应无细菌和其他真菌检出。
2.1-4菌种保存
种T批应于液缀中保存，工作种子批于-701C保存时应不超过6个月
2.2.1发酵
取工作种子批菌种，于适宜温度和时间，经锥形瓶、种子雉和生产讎进行三级发酵，收获汉逊酵母。
2.2.2培养物的检定
2.2. 2.1 HBsAg外源基因拷贝数检定
按2.1. 3. 4项进行。
2.2.2.2培养物纯度
将培养物分别接种于胰酪胨大豆肉汤培养基与液体硫乙醇酸盐培养基，于30 养7天，应无细菌和其他真菌检出。
2 . 2 . 3 纯化
采用适宜的方法破碎汉逊酵母，离心除去细胞碎片，用硅胶吸附.柱色谱法和漠化钾密度梯度离心法或其他
适宜方法纯化HBsAg后，进行除菌过滤，即为原液。
2.2.4原液检定
按3.1项进行。
2.2.5原液保存
应不超过3个月。
2 . 3 半成品
2. 3.1甲醛处理
原液中按终浓度为10(Vg/ml加人甲醛，于371C保温适宜时间。
2.3.2铝吸附
将蛋白质和铝剂以一定比例混合，置适宜温度下吸附一定时间，经洗涤后即为铝吸附产物。
2.3.3配制
用无菌生理氣化钠溶液按最终蛋白质含量为ZOpg/ml稀释铝吸附产物，可加人适宜浓度的硫柳汞防腐剂，即为半成品。
2. 3.4半成品检定
按3. 2项进行。
2 . 4 成品
2 . 4 . 1 分批
应符合"生物制品分批规程"规定。
2.4.2分装
应符合"生物制品分装和冻千规程"规定。
2.4.3规格
0.5ml,每1 JJcAffl剂量0.5ml.含HBsAg 10p<g。
2.4.4包装
应符合"生物制品包装规程"规定。
3 检定
3.1原液检定
3.1.1无|S检査
依法检杏（附录M A),应符合规定。
3.1.2蛋白质含量
应为100 (附录VI B第二法）。
3.1.3特异蛋白带
采用还原型SDS"聚丙烯酰胺凝胶电泳（附录]V C ) ,分离胶胶浓度15%,上样量为O.S^g.银染法染色。应有分子质量为20~25kD的蛋白带；可有多聚体蛋白带。
3.1.4纯度
采用分子排阻色谱法（附录ID D),亲水甲基丙烯酸树脂体积排阻色谱柱；排阻极限lOOOOkD;孔径lOOnm;粒度17fmM流动相为含0.05%叠氮钠的lmmol/L PBS(pH7. 0),上样量10fJ:检测波长280nm，按面积归一化法计箅，HBsAg含ft应不低于99.0%
3.1.5细菌内毒索检査
应小于5EU/ml (附录M E凝胶限度试验）„
3.1.6宿主细胞DNA残留量
应不髙于lOng,/剂（附录K B第--法）。
3.1.7宿主细胞蛋白质残留量
应不超过总蛋白质含量的1.0% (附录1XE
3. 1.8 N端氨基酸序列测定（每年至少测定1次）
用氨基酸序列分析仪测定，N端氨基酸序列应为：
(Met)-Glu-Asn-Ile-Thi-SeK;irPh^Leii-Gly-Pro-Leu-Leu-Val-Leu
3.1.9聚山梨酯20残留量
应不高于lOpgZZOfig蛋白质（附录W H )。
3.2半成品检定
3. 2.1无菌检査
依法检査（附录SI A),应符合规定。
3. 2.2 p H值
应为5.5 ~7.0(附录V A )。
3 . 2 . 3 铝含S
应为0. 45~0. 60mg/ml (附录W F)。
3. 2.4硫柳汞含量
应不高于2. O^g/ml (附录、1 B ) .
3.2.5细菌内毒索检査
应小于5EU/ml (附录M E凝胶限度试验)。
3. 2.6吸附完全性试验
将供试品干6500g离心5分钟取上清液，依法测定(附录X A)参考品、供试品及其上清液中HBsAg含量。以参考品HBsAg含ft的对数对其相应吸光度对数作直线回归，相关系数应不低于0.99,将供试品及其上清液的吸光度值代人直线回归方程，计算其HBsAg含量，再按下式计算吸附率，应不低于95%。

式中P为吸附率，％;
C%为供试品上淸液的HBsAg含量，（xg/ml;
ct,为供试品的HBsAg含量.；zg/ml.
3.2.7渗透压摩尔浓度
应为280m(—)smol/kg±65mOsmol/kg (附录V H )。
3.3成品检定
3.3.1鉴别试验
采用W联免疫法检査，应证明含有HBsAg。
3.3.2外观
应为乳白色混ft液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。
3.3.3装量
依法检査（附录I A)，应不低于标示量。
3. 3.4化学检定
3.3.4.1 p H值
应为5.5 (附录V A )。
3.3.4.2铝含量
应为0.45 (附录M F)。
3.3.4.3硫柳汞含量
应不高于2. Of^/ml (附录VI B)。
3.3.4.4游离甲醛含fi
应不髙于15fxg/ml (附录W L)。
3.3.4.5聚乙二醇6000残留量
应小于ZOOpg/ml (附录VI G)。
3.3.5体外相对效力测定
应不低于1.0 (附录X A )。
3.3.6无菌检查
依法检査（附录M A),应符合规定。
3.3.7异常毐性检査
依法检査（附录M F)，应符合规定。
3.3.8细菌内毒素检査
应小于5EU/ml ( 附录E 凝胶限度试验) 。
4保存、运输及有效期
运输。自生产之日起，有效期为36个月，
5 使用说明
应符合"生物制品包装规程"规定和批准的内容。