医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,医学微生物学试验综合性试验三,空气细菌学检验结果分析,手指皮肤细菌学检验结果分析,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第1页,空气细菌学检验,组号,时间,地点,菌落形成单位(CFU),1,15,2,15,3,15,4,15,5,15,6,15,7,15,8,15,9,15,10,15,CFU/m,3,50,000NAT 86N(直径7cm平板）,N：平板上菌落数 A：平板面积(38.5cm2),T：采样时间(15分钟)CFU：colony forming unit,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第2页,WHO推荐医院各部门空气细菌标准,级别,cfu/m,3,适用范围,级区,10,器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液试验室,级区,200,无菌室、手术室、供给室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房,级区,200500,普通病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第3页,我国公共场所空气卫生细菌学标准,（GB9663,9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）,撞击法cfu/m,3,沉降法个/皿,适用范围,1000,10,35星级宾馆、饭店,1500,20,2星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店,2500,30,普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱,4000,40,音乐厅、影剧院、录像厅（室）、游艺厅、舞厅、剪发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）,7000,75,展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第4页,液体或固体标本菌落总数测定,可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。,分别取1ml注入直径9cm灭菌平皿内。,倾注46营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37培养48小时。,选择菌落数在30300之间平板作为菌落总数,测定标准,。,将计数得到菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第5页,1,3,2,4,1,3,2,4,手指皮肤细菌学检验,第1格为洗手前，,第2格为洗手后，,第3格为消毒后，,第4格空白对照。,2人1块平板,上:甲、丙常规洗手,下:乙、丁标准洗手,甲（丙）,乙（丁）,丙,丁,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第6页,手指皮肤细菌学检验结果分析,第1格为洗手前：,+,第2格为洗手后,常规(甲、丙)洗手方法：,?,标准(乙、丁)洗手方法：,?,第3格为消毒后：,？,第4格空白对照：,-,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第7页,医学微生物学试验综合性试验一,脓汁和粪便标本中病原菌检测（三）,菌落特征观察P,11,细菌纯培养P,10,脓汁和粪便标本检验（录像）,油镜使用方法（讲解）,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第8页,细菌在固体培养基中生长现象,菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见细菌集团。,菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。,菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）。,菌苔：指多个菌落融合在一起形成细菌堆积物。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第9页,菌落特征P,11,大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。,形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。,边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。,表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。,溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。,色素：普通为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第10页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第11页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第12页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第13页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第14页,细菌溶血现象,依据细菌对血平板中红细胞溶解能力可分为以下三种溶血类型,（甲型）溶血:,产生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周围有12mm半透明草绿色溶血环。,（乙型）溶血:,呈完全性溶血，在血平,板,上菌落周围有24mm宽，界限分明，无色透明溶血环。,（丙型）溶血:,不产生溶血素，在血平,板,上菌落周围无溶血环。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第15页,细菌纯培养,挑选单菌落:,脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落色素是脂溶性，是细菌本身颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。,粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性，不是细菌本身颜色，颜色产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色含有金属光泽、大而隆起、不透明菌落；菌落直径2,3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红颜色，很淡粉红色，半透明，直径12mm,。,选择平板上相同菌落数多、经典、轻易挑取单菌落，进行接种。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第16页,37培养24小时,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第17页,37培养24小时,紫黑色,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第18页,通常描述菌落直径和颜色是特指培养18,24小时，菌落分布比较稀少区域、经典菌落。,若培养物放置时间过长，或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生酸。大肠杆菌菌落可能会由原来紫黑色变成粉红色，和致病菌颜色一样。,不要在菌落密集区域挑选菌落，它可能是菌落形成单位（CFU），不是,单菌落,，很轻易选错。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第19页,37培养,36,小时,由紫黑色,变成粉红色,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第20页,斜面接种法P,10,（1组4支）,甲普通平板,黄色,菌落1支斜面,乙普通平板,白色,菌落1支斜面,丙伊红美蓝,紫黑,菌落1支斜面,丁伊红美蓝,粉红,菌落1支斜面,斜面标识：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。,在平皿底部玻璃上，画个大圈选菌落，同组同学认可，才能挑取。,培养时间不得超出18小时。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第21页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第22页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第23页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第24页,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第25页,斜面接种法P,10,甲黄色,乙白色。,丙紫黑,丁粉红。,标识：组号，颜色,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第26页,安全警告,接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。,气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um经过呼吸道直接抵达肺泡。,Pike博士对试验室感染统计分析结果发觉，不明原因感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引发。,试验时应坐着，,在酒精灯半径20厘米范围内操作，,保持平静、有序，尽可能少说话、少走动，,以免感染病原菌,。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第27页,奥林巴斯 CX21型 生物显微镜,（,试验柜内，,每人一台）,注意：只能横放，不得竖放。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第28页,奥林巴斯 CX21型 生物显微镜,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第29页,使用须知,显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。,在搬运显微镜时，请按右图所表示，以双手抓住镜臂孔两侧，小心搬运。,假如拿住载物台和镜筒等部位搬运话，有可能会造成损坏。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第30页,显微镜各部件名称,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第31页,开关与调整光强,开或关之前，必须将亮度调整旋钮按箭头,相反,方向转动到,最小位置,，以免损坏灯泡。,电源开关拨到侧为开，拨到侧为关闭。,按箭头方向转动亮度调整旋钮变亮，相反方向转动则变暗。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第32页,放置标本,按箭头方向转动粗调旋钮降下载物台。,按箭头方向拉开载物台标本夹，自前向后将标本片放入平台，标本夹 轻轻放回原位。,转动上侧垂直移动杆和下侧水平移动杆，移动标本至光路中间。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第33页,载物台位置刻度,载物台上刻度方便确定标本位置，标本移动后能够快速回到原位。,水平刻度标识位置以机械载物台位置来读取。,垂直刻度标识线以位置来读取。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第34页,聚焦,从显微镜侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮，使物镜尽可能,靠近,标本。一边看目镜，一边慢慢,逆,箭头方向转动粗调旋钮，使载物台,下降,。,看到标本以后，用微调旋钮来正确对焦。,10倍物镜,工作距离,（WD，从物镜到标本 距离）为10.5mm。,油镜WD为0.13mm。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第35页,调整瞳距,调整瞳距是调整双目间距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能预防观察时疲劳。,方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右视野一致。,标识位置表示瞳距。请记住自己瞳距值，方便下次观察时调整。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第36页,调整屈光度数,调整观察者左右视力。,以右眼看右侧目镜，旋转,粗微调,旋转盘，对好焦距。,以左眼看左侧目镜，旋转,屈光度,调整环，对好焦距。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第37页,调整聚光镜位置和孔径光阑,用聚光镜上下移动旋钮，将聚光镜转到最上面。,在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应倍率放到正面。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第38页,转换物镜,旋转物镜转盘，将希望使用物镜（10倍、100倍）转到标本上方。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第39页,100倍浸油物镜使用方法,油镜放入光路之前，一定要在标本观察部位上加一滴浸油。,旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。,假如浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜往返经过1,2次浸油，排除油内气泡。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第40页,显微镜油镜使用P,13,10物镜标本位置滴加香柏油100油镜浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）细调整调焦，观察物像统计结果关闭电源。,油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。,显微镜罩上防尘罩,横放,在试验柜内。,(顺德校区）试验台两侧电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近电源插座。,（校本部）试验台中间，三个位插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧插座。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第41页,细菌显微镜检验法,显微镜：光学显微镜,目镜：10倍,物镜：油镜头（90或100倍）,放大倍数：1090或100900或1000,镜油：香柏油或石蜡油,香柏油折射率（n1.515），玻片折射率（n1.52），石蜡油（n1.46），空气（n1.00）。,油,镜使用完成必须擦拭,油,镜头。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第42页,油,透镜,光线,载玻片,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第43页,思索题,在微生物学试验中,怎样才能防止杂菌污染?,空气卫生标准要求怎样?,你试验结果说明了什么问题?,怎样从医务人员手指上分离和判定金黄色葡萄球菌?,菌落特征主要描述哪几方面问题？任何挑选单菌落？,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第44页,医学微生物学试验综合性试验三、一,空气、手指皮肤细菌学检验结果分析,脓汁和粪便标本中病原菌检测,菌落特征观察P,11,细菌纯培养P,10,（纯培养不得超出18小时）,油镜使用方法（讲解）,脓汁标本检验（录像）,肠道致病菌分离判定（录像）,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第45页,惯用器材摆放次序：电源插座试管架酒精灯污物盘。,试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机次序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。,器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第46页,试验室器材 整齐有序,医学微生物学脓汁和粪便标本中病原菌的检测,第47页,