禾谷镰刀菌 基因敲除 FgACl 致病性.doc

禾谷镰刀菌论文：小麦赤霉菌FgAC1基因敲除及功能研究

【中文摘要】小麦赤霉病是一世界性真菌病害,该病由多种镰刀菌引起,禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是引发该病的优势种之一。由于该病原菌侵染使得小麦严重减产,除侵染小麦外,它还侵染大麦、玉米、高粱等其他禾谷类作物,给人类带来了严重的经济损失。不仅如此,小麦赤霉菌产生的真菌毒素还严重危害人、畜的健康。近年来全球对禾谷镰刀菌开展了大量的研究工作,并取得了一系列重大进展。目前,对禾谷镰刀菌的研究逐步从传统的植物病理学水平上升到功能基因组学水平上来,其研究热点逐渐集中在探索其致病机理和发现新的药物作用靶点。本研究中,作者采用基因敲除技术运用同源重组原理,敲除小麦赤霉菌(Fusarium graminearum)致病相关基因FgAC1,并对其功能进行了分析。首先采用Split Marker法构建基因敲除盒,对野生型菌株PH-1原生质体进行转化,获得大量转化子,经潮霉素初筛后再对转化子进行单孢分离,将分离得到的单孢子再进行PCR检测,然后再进行Southern杂交验证,最终获得两个缺失突变株。以该基因缺失株为研究对象,禾谷镰刀菌野生型PH-1菌株为对照,通过菌落形态观察、生长速度测定、孢子形态观察、...
【英文摘要】Fusarium Head Blight (FHB) disease is caused mainly by Fusarium graminearum. This pathogen causes the loss of production not only wheat, but also barley, corn, sorghum and any other kinds of cereal plants, thus causes serious economic loss. Moreover, the mycotoxins produced by this fungus endanger animal and human’s health seriously. In recent years, a great deal of studies about Fusarium graminearum were carried out and a series of significant progress were get. Nowadays, the functional genomics research a...
【关键词】禾谷镰刀菌 基因敲除 FgACl 致病性
【英文关键词】Fusarium graminearum gene knockout FgACl pathogenesis
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【目录】小麦赤霉菌FgAC1基因敲除及功能研究

中文摘要

4-5

ABSTRACT

5

1 绪论

10-20

1.1 小麦赤霉菌研究概述

10-14

1.1.1 小麦赤霉菌的生物学特性

10-11

1.1.2 小麦赤霉病概述

11-13

1.1.3 小麦赤霉菌的次生代谢物---真菌毒素

13-14

1.2 小麦赤霉菌FgAC1基因研究背景

14-16

1.3 小麦赤霉菌的功能基因组学研究进展

16-18

1.4 本研究的目的和意义

18-20

2 FgAC1基因敲除盒的构建

20-32

2.1 实验材料

20-23

2.1.1 材料和试剂

20

2.1.2 培养基和主要试剂配方

20-23

2.1.3 仪器

23

2.2 实验方法

23-29

2.2.1 小麦赤霉菌PH-1菌株基因组DNA的提取——CTAB法

23-24

2.2.2 质粒pCB1003的制备

24-25

2.2.3 FgAC1基因敲除盒的构建—Split Marker法

25-29

2.3 结果与分析

29-31

2.3.1 PH-1菌株基因组DNA的获得

29

2.3.2 质粒pCB1003的获得

29-30

2.3.3 Split Marker法构建FgAC1基因敲除盒

30-31

2.4 讨论

31-32

3 FgAC1基因敲除和转化子的鉴定

32-42

3.1 实验材料

32-34

3.1.1 材料和试剂

32

3.1.2 培养基和主要试剂配方

32-33

3.1.3 实验器材

33-34

3.2 实验方法

34-38

3.2.1 PH-1原生质体的制备与转化

34-35

3.2.2 敲除突变体的筛选和鉴定

35-38

3.3 结果与分析

38-40

3.3.1 原生质体的转化

38

3.3.2 筛选鉴定获得2个FgAC1缺失突变体

38-40

3.4 讨论

40-42

4 FgAC1敲除突变体表型观察和致病力检测

42-52

4.1 实验材料

42

4.1.1 材料和试剂

42

4.1.2 培养基和主要试剂配方

42

4.1.3 实验器材

42

4.2 实验方法

42-44

4.2.1 菌落形态观察

42

4.2.2 菌落生长速度测定

42-43

4.2.3 分生孢子形态观察

43

4.2.4 产孢量的测定

43

4.2.5 菌株培养滤液颜色观察

43

4.2.6 玉米丝侵染实验

43-44

4.2.7 蕃茄果实侵染实验

44

4.2.8 自交实验

44

4.2.9 外源加入cAMP对菌落形态和生长的影响

44

4.3 结果与分析

44-50

4.3.1 菌落形态变化

44-45

4.3.2 菌落生长速度测定

45

4.3.3 分生孢子形态变化

45-46

4.3.4 产孢量测定

46-47

4.3.5 菌株培养滤液颜色变化

47

4.3.6 FgAC1敲除突变体致病力检测

47-49

1. 玉米丝侵染实验.

48

2. 蕃茄果实侵染实验

48-49

4.3.7 自交实验

49

4.3.8 外源加入cAMP对菌落形态和生长的影响

49-50

4.4 讨论

50-52

5 全文结论

52-53

参考文献

53-58

致谢

58-59

攻读硕士期间发表论文

59-60

附录

60-64