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玉米浆检验操作规程

分发号：01

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玉米浆检验操作规程
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一、目 的：建立玉米浆检验操作规程，使QC检验员按本方法检验。
二、适用范围：适用于玉米浆的检验。
三、责 任 者：QC检验员。
四、正 文：
【性状】目测法 棕褐色粘稠、无异味液体。
【鉴别】取本品少量加盐酸，加热水解后并调至中性，加入茚三酮试液应显红色。
【检查】 溶解磷
1原理
各种含磷有机物经过酸的水解，使有机磷消化成为无机磷，无机磷在酸性条件下，与钼酸盐（常用的有钼酸氨或钼酸钠）反应生成磷钼酸盐络合物，如：
2H3PO4+24（NH4）2MoO4+21H2SO4 2（NH4）PO4·12MoO3+21（NH4）2SO4+24H2O
然后用还原剂处理钼酸盐络合物，使络合物中钼从高价（Mo6+）部分还原成低价（Mo4+），低价的钼再与试剂中其他Mo2-络合成为Mo(MoO4)2或Mo3O8，呈蓝黑色，称钼蓝，其颜色的深浅，在一定范围内，与磷含量成正比关系，根据比尔定律，即可应用分光光度计进行磷的定量测定。
2 仪器与设备
2.1 分光光度计
2.2离心机
2.3水浴锅（恒温）
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2.4刻度吸管：1ml，2ml,5ml
2.5容量瓶：25ml,50ml,100ml,1000ml
2.6高温炉
3试剂及其配制
3.1磷试剂Ⅰ(钼酸氨溶液)
3.1.1称取10 g钼酸氨溶于100ml纯化水中
3.1.2量取150ml浓硫酸加到100ml水中，冷却后，将3．1．1与3．1．2两溶液合并，混匀，装于棕色瓶中。
3.2磷试剂Ⅱ（Metol溶液）
3.2.1称取0.2gMetol（对—甲氨基苯酚硫酸盐），1g无水亚硫酸钠溶于少量水中（约50ml），假如4g焦亚硫酸钠或43.8g亚硫酸氢钠，用水稀释至200ml，过滤于棕色玻璃瓶中。
3.3三氯醋酸：10%
称取三氯醋酸100g，溶于1000ml 水中即得。
3.4硫酸溶液（0.1mol/L）：按照中国兽药典2000年版第一部附录157配制与标定。
标准磷基准液
准确称取KH2PO4（A.R）0.4394g（预先在105℃干燥至恒重），加入20ml硫酸溶液（0.1mol/L ）用水稀释1000ml ,摇匀，即为100ug/ml的磷溶液。
标准磷工作液
将上述标准磷基准溶液，用水稀释10倍，即为10ug/ml的磷溶液（临用前配制）。
4标准曲线绘制
取标准磷工作溶液，分别量取使含磷量为0，10，20，30，40，和50ug，各加入6只25ml容量瓶中，再加入磷酸试剂Ⅰ，Ⅱ各1ml，加水使总体积为7ml，在沸水浴上加热30分钟，冷却，加水稀释至刻度，摇匀，以纯化水为参比（空白），用1cm比色池，在650nm处，用分光光度计测定吸收度，以磷含量为横坐标，测得光密度值为纵坐标，绘制标准曲线，再制成表格，即为标准曲线表。
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注意：
（1）磷试剂Ⅰ，Ⅱ最多能储存两周，过期的须重新配制（一般贮冰箱）。
（2）每配一次磷试剂需以标准磷校正一次，或每次都标定钼酸氨的浓度，控制在18N左右。
（3）试剂瓶内涂蜡防止硅、锗等干扰。
（4）反应酸度控制在PH1.5—2.3之间。
（5）钼蓝的生成与温度，酸碱度，时间有密切关系，需严格控制。
5 溶解磷的测定
5.1 测定步骤
精密称取供试样品约3g，置于100ml容量瓶中，加水约50ml，摇匀，于沸水浴中加热30分钟，冷却后，加纯化水至刻度，离心（或澄清）5分钟，取上清液5ml于50ml容量瓶中，加10%三氯乙酸10ml，于室温放置5分钟，稀释至刻度，摇匀，用滤纸过滤（或离心5分钟），吸滤液2ml于25ml容量瓶中，加磷试剂Ⅰ，Ⅱ各1ml，加水使总体积为7ml，在沸水浴上加热30分钟，取出冷却后，稀释至刻度，摇匀，在650nm处，用分光光度计测定消光值，查表求得单位。同时以纯化水做一空白。
5.2 计算 u
u/g =
m×5/100×2/50×W干物质
式中：u—由标准曲线表查得样品溶液含磷量（u）。
m—样品重量（g）。
5/100×2/50—样品溶液稀释倍数。
W—干物质
粗蛋白
1简述
1.1本法适用于含氮有机物的含氮量测定。
1.2原理：本法系将供试品在硫酸及催化剂作用下，经强热分解使有机氮转化为硫酸
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氨，再经强碱碱化使氨馏出并吸收于硼酸液，最后用盐酸滴定液滴定，求出氮含量。
反应式：RCHNH2COOH＋2H2SO4 2CO2+2SO2+2H2O+NH3+RH
2NH3+H2SO4 （NH4）2SO4
40%氢氧化钠的作用：
（NH4）2SO4+2NaOH 2NH4OH+Na2SO4
加热
NH4OH NH3 +H2O
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
1.3氮测定分第一法与第二法。应按中国兽药典该品种项下的规定选用。
2 仪器与试药
2.1仪器
2.1.1常用定氮仪由500ml凯氏烧瓶、氮气球和冷凝管组成。
2.1.2半微量定氮仪由1000ml 圆底烧瓶，连有氮气球的蒸馏器和直形冷凝管等组成。
2.1.3天平：万分之一天平。适用于精密称取0.1g以上者；十万分之一天平，适用于精密称取0.1g以下者。
2.1.4消化和蒸馏可用电炉或煤气加热。
2.1.5蒸馏连接用的乳胶管或橡胶管，应用氢氧化钠试液煮沸20分钟，洗去碱液后用水煮沸，洗净，晾干。
2.2试药
2.2.1试剂均为化学纯
2.2.2滴定液的配制与标定应符合中国兽药典2000年第一部附录157规定
2.2.3试液，指示剂的配制应符合中国兽药典2000年第一部附录144、155规定
2.2.4硫酸铜用作消化催化剂；硫酸钾用以提高硫酸的沸点，也可以将硫酸钾与硫酸铜按10：1比例混合研匀使用。
3 操作方法
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本操作法采用《中国兽药典》2000年版第一部附录44页，半微量法（第二法）。
3.1称样：取供试品1g（约相当于含氮量1.0～2.0mg）。精密称定，置干燥的30～50ml凯氏烧瓶中。
3.2消化：在烧瓶中加硫酸钾3g与硫酸铜0.5g，再沿瓶壁用吸管加硫酸15ml ,并加玻璃珠1—2粒，在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使消化液保持在沸点下，并使小火保持在液面下，等爆沸停止，溶液由黑色变为棕黄色，强热至沸，待溶液成澄明绿色后，除另有规定外，继续加热，总消化时间2.5小时。消化完毕，放冷，移至100ml容量瓶中，加水至刻度。
3.3蒸馏：按药典附图连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示剂数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠和沸石数粒。将连有氮气球的蒸馏器和直形冷凝管用水加热蒸汽淋洗；并使水自冷凝管尖端反冲洗2～3次，从加样口淋洗一次，洗涤液排出蒸馏管。吸2%硼酸溶液10ml置100ml锥形瓶中，加甲基红—溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端浸入液面下，吸取容量瓶中的稀释液5ml，经漏斗移入连有氮气球的蒸馏器中，用少量的水淋洗凯氏烧瓶及漏斗2—3次，每次约3—5ml，再加入40%氢氧化钠溶液10ml 。用少量水洗涤漏斗一次，关闭漏斗（加少量水封闭出口）进行蒸馏（蒸馏时不宜泡沸过高，以免溅至氮气球）。至硼酸液由酒红色变为兰绿色起，继续蒸馏约10分钟，将100ml锥形瓶下移至冷凝管尖端提出液面，使整齐继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。
3.4滴定：馏出液用盐酸液（0.01mol/L）滴定至溶液由兰绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白实验（空白馏出液的容积应与供试品馏出液的容积基本相等）校正。每1ml的盐酸液（0.01mol/L）相当于0.1401mg的N。
4 注意事项
4.1蒸馏装置连接后应严密。
4.2消化时若发现瓶壁上有黑点，可适当转动烧瓶，使硫酸回流时将黑点冲下，以保证消化完全。
4.3消化液应放冷后，再沿瓶壁缓缓加水，防止供试液局部过热爆沸冲出瓶外。
4.4蒸馏过程中若无黑点CuO析出，说明加入碱量不足，应补充碱量或重新实验。
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4.5配制40%氢氧化钠溶液时，宜边加边振荡，避免未溶解部分沉积于容器底部而难于
溶解。
4.6约80%以上的氨在最初1—2分钟内蒸出，初蒸速度不宜太快，以免氨蒸出后未能及时被吸收而逸失。
4.7锥形瓶中加入硼酸和指示剂后应显酒红色，如显绿色，说明锥形瓶有碱性物质污染。蒸馏出的氨接收液应尽快滴定，以免放置时间过长，影响测定结果。
5 记录与计算
5.1记录供试品与试液的名称，规格及用量，滴定液的名称，F值及消耗量（ml）。
5.2计算 （V－VO）×C×0.014
蛋白质含量% = ×100%×6.25
m×5%×W干物质
式中 C—盐酸的浓度（mol/L）
V—供试品滴定时盐酸滴定液消耗体积（ml）
VO—空白实验滴定时盐酸滴定液消耗体积（ml）
m—为供试品的重量（g）
W－所测玉米浆的干物质 （%）
供试品测定两份，相对偏差不得过0.5%；空白2份，极差不得大于0.05ml 。
6 附注
6.1酰胺碱性水解法不属于本测定范围。
6.2空白值常为0.02—0.3ml，空白值为0ml亦属正常。
6.3操作环境应避免氨的干扰。
6.4一般供试品称样量规定为：玉米淀粉为0.3克，酵母粉、豆饼粉、花生饼粉，黄豆粉均为0.3克，蛋白胨为0.15克，玉米浆为1.0克。
干物质
1取已充分搅匀的样品1—2g，置于已恒重的称量瓶中，精密称定重量，在水浴上蒸干后，于105℃干燥箱中干燥至恒重。取出放入干燥器中，与室温平衡后，称其重量。
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2计算：
干固体重m
干物质 = ×100%
样品重M
酸度 1 仪器
250 ml容量瓶
25 ml移液管
150 ml三角瓶
25 ml碱式滴定管
2试剂
1%酚酞指示剂
0.1mol/L氢氧化钠滴定液
3操作步骤
精确称取2g玉米浆样品于50ml小烧杯中。然后无损地倒入250mL容量瓶中，再加纯化水至刻度，摇匀，静止后备用。
从上面的溶液中用移液管吸取25mL液体于150mL三角瓶中，加3滴酚酞指示剂，用0.1 mol/LNaOH滴定液滴定至液体呈浅粉色即为终点。
6.4计算
V×C×0.0365
酸度% = ×100%
m×25/250×W干物质
式中：m—所称样品的重量
V—消耗NaOH的体积数
C—NaOH滴定液的摩尔浓度
W－干物质