病理学技术复习题.doc

1.何谓超薄切片？由于电镜电子束穿透能力的限制，必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用，这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50至70nm。 2.透射电镜标本取材的基本要求有哪些？为了使细胞结构尽可能保持生前状态，必须做到快、小、准、冷：(1)动作迅速，组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投2.5%戊二醛固定液。(2)所取组织的体积要小，一般不超过1mm1mm1mm。也可将组织修成1mm1mm2mm大小长条形。因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。(3)机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。(4)操作最好在低温(04)下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。(5)取材部位要准确。3.电镜标本的固定与普通光镜标本的固定有何不同？一）.常用固定剂有1、四氧化锇:有强烈的电子染色作用，用它固定的样品图象反差较好。2戊二醛:优点是对糖原、糖蛋白、微管、内质网和细胞基质等有较好的固定作用，对组织和细胞的穿透力比四氧化锇强，还能保存某些酶的活力，长时间的固定(几周甚至12个月)不会使组织变脆。缺点是不能保存脂肪，没有电子染色作用，对细胞膜的显示较差。二）.组织块固定常规采用戊二醛锇酸双重固定法。分预固定和后固定，中间用磷酸缓冲液漂洗。固定完毕，用缓冲液漂洗20分钟后进行脱水。电镜光镜固定剂，四氧化锇、戊二醛。10%福尔马林或4%甲醛固定方法戊二醛-锇酸双重固定法。蒸汽固定、灌注固定。目的除了一般光学标本固定目的外，还有电子染色作用。将组织结构尽量接近与它生前的状态。标本1mm1mmmm厚度3-4mm左右4.电镜标本包埋操作中应注意的事项有哪些？包埋操作中应注意以下几点：(1)所有试剂要防潮，最好存放在干燥器中；(2)所用器皿应烘干；(3)配包埋剂时，每加入一种试剂要搅拌均匀；(4)包埋 时动作要轻巧，防止产生气泡；(5)皮肤尽量不要接触包埋剂，以免引起皮炎；(6)盛放过包埋剂的容器要及时用丙酮清洗干净。5.超薄切片观察前进行半薄切片光学显微镜观察的目的是什么？半薄切片进行光学显微镜观察的目的：(1) 定位：通过光学显微镜观察，确定所要观察的范围，然后保留要用电镜观察的部分，修去其余部分。(2)便于对同一组织的同一部位进行光学显微镜和电镜的对比观察。6.电镜标本为什么要染色，染色方法及常用的染色剂分别是什么？未经染色的超薄切片，反差很弱。因此，要进行染色处理，以增强样品的反差。一般是用重金属盐与组织细胞中某些成分结合或被组织吸附来达到染色的目的。重金属的原子对电子束形成散射，从而提高图象的反差。 常用的染色剂有醋酸铀和柠檬酸铅。染色方法有两种：1组织块染色： 2切片染色7.电子显微镜在病理学中主要用于哪些方面？病理学中的应用 1.肾脏疾病(肾小球肾炎)及肌病中应用：轻微病变性肾小球肾炎、弥漫性膜性肾小球肾炎、膜性增生性肾小球肾炎 2 肿瘤中的应用：电镜检查能够发挥最大诊断潜能的、电镜检查能提供多半诊断性信息的8.在哪些情况下电镜检查在病理诊断中能够发挥最大诊断潜能电镜检查能够发挥最大诊断潜能的：1）.通过发现所谓的神经分泌型致密核心颗粒，证明肿瘤的（神经）内分泌性质。2.）评估具有颗粒状胞浆（嗜酸性细胞，颗粒细胞，内分泌细胞）的肿瘤细胞的性质。3）.确定不同类型肿瘤中的上皮分化（包括腺体和鳞状分化）。4）.通过检测黑色素小体证明肿瘤的黑色素细胞性质。5.通过检测Birbeck颗粒，证明病变属于朗格罕细胞组织细胞增生症范畴。6.通过发现大量的滑面内质网和具有管泡状嵴的线粒体，证明肿瘤由来自肾上腺皮质和性腺的产生类固醇的细胞组成。7.通过检测WeibelPalade小体，证明肿瘤的血管内皮细胞性质。8.通过检测各个系统的细胞浆微丝，确认骨骼肌和平滑肌细胞。9.通过检测中轴突和其他特征，确认神经鞘细胞。10.通过检测特征性的有界膜的晶体，证明腺泡状软组织肉瘤。11.确认GIST家族肿瘤中平滑肌，神经或其他类型的分化。9.电镜检查的局限性有哪些？1.无论在哪一点取样，用于研究的只是肿瘤的一小部分。2.缺少真正的特异性超微结构特征，因为专属于一种细胞或组织类型的细胞器或其他结构的数量很少。3.可能将混杂在肿瘤中的非肿瘤性成分误认为肿瘤。应当承认，任何技术均有这种可能性，但在电镜检查时尤为突出，因为在一块小的组织样本中评估空间关系是困难的。4.无法鉴定同一细胞类型的反应性病变、良性肿瘤和恶性肿瘤之间。5.电镜检查费用昂贵。 应用电镜检查最好的时机是，病理医师已在光镜水平将肿瘤的鉴别诊断确定在2或3种肿瘤之间，只有当超微结构特征与光镜特征紧密联系时，诊断性的电镜观察才能提供完整的信息，正如光镜表现与大体病理和临床特征相结合时才具有完整的意义一样。流式细胞术复习题1. 什么是流式细胞术？试述流式细胞术样本制备的基本原则。流式细胞术是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术，是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数;与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。流式细胞术样本制备的基本原则。1.用于FCM的样本是单细胞悬液 ;2.使各种体液和悬浮细胞样本新鲜 ;3.针对不同的细胞样本进行适当的洗涤，酶消化或EDTA处理；4.新鲜实体瘤组织可选用或联用酶消化法、机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液。 2.什么是流式细胞仪的基本结构? 1.传感系统:包括样本递送系统、样品池、检测系统、电子传感器和激光源等;2.计算机系统 ;3.电路、光路和水路系统 :有电源、光学传导和滤片、鞘液循环和回收部分等。 3.流式细胞术临床常应用于哪些领域?1.外周血细胞的免疫表型测定和定量分析；2.某一特定细胞群的筛选和细胞收集；3.细胞耐药基因的检测；4.癌基因和抑癌基因的检测；5.细胞凋亡的定量研究、细胞毒功能检测；6.细胞内某些蛋白质和核酸的定量分析。 （一）在肿瘤学中的应用：协助肿瘤早期诊断 。FCM可精确定量DNA含量的改变，作为诊断癌前病变发展至癌变中的一个有价值的标志，能对癌前病变的性质及发展趋势作出估价，有助于癌变的早期诊断 。（二）在细胞免疫中的作用：FCM通过荧光抗原抗体检测技术对细胞表面抗原分析，进行细胞分类和亚群分析。用FCM还可以监测肾移植后病人的肾排斥反应。（三）在血液病诊断和治疗中的应用：FCM通过对外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析，对各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着举足轻重的作用。(1) 白血病的诊断和治疗；（2）造血干细胞移植技术。 4.什么是基因芯片? 目前基因芯片主要应用于哪些领域?1）基因芯片又称DNA芯片(DNAcMp)，是指固着在固相载体上的高密度的DNA 微点阵。具体地说就是将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地，高密度地排列在如硅片、玻璃片、聚丙烯或尼龙膜等载体上，这就是基因芯片。 （2）目前基因芯片主要应用于哪些领域?（1）测 序：基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列。（2）基因表达水平的检测：用基因芯片进行的表达水平检测可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况。（3）基因诊断：从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱；从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱；通过比较、分析这两种图谱，就可以得出病变的DNA信息。（4）药物筛选：利用基因芯片分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达的差异,从基因水平解释药物的作用机理。 5.什么是组织芯片? 组织芯片的特点 组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列 (tissue microarray)；是将数十个至数百个小的组织片整齐地排列在某一载体上而成的微缩组织切片；组织芯片的特点：体积小，信息量大，能高效、快速和低消耗地进行各种原位组织学的研究和观察，并有较好的内对照及实验条件的可比性。 免疫组化复习题1.试述免疫组化的基本原理及主要优点。应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中某些化学成分进行原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。主要优点：1.原位的化学 。2.呈色反应。3.形态、代谢、功能三结合。4.方法上一通百通。5.定性可靠、定位准确、定量可靠（特异性强，敏感性高）。6.跨学科的广泛应用。2.常用的免疫组化方法有哪些？按标记物质： 1.免疫荧光法； 2.放射免疫法；3.酶标法；4.免疫金银法。按染色步骤： 直接法； 间接法按结合方式： 抗原-抗体结合（PAP法）亲和连接（ABC法、SP法）3.简述免疫组化在病理诊断和研究中的作用。1.确定细胞类型 ； 2.辨认细胞产物 ； 3.了解分化程度4.鉴定病变性质 5.发现微小病灶 ； 6.探讨肿瘤起源或分化表型 ；7.确定肿瘤分期 8.指导治疗和预后； 9.辅助疾病诊断和分类； 10.寻找感染病因4.免疫组化中组织固定的目的是什么？组织固定应注意哪些问题?为更好保持细胞和组织原有形态结构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定。固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固,终止或抑制外源性和内源性酶活性,更重要的是最大限度地保存细胞和组织的形态结构和抗原性,使水溶性抗原转变为非水溶性抗原,可有效防止组织自溶坏死、抗原丢失弥散。组织固定应注意哪些问题?1.标本离体后30分钟内应进入固定液或贮存于液氮罐内或-70冰箱内低温保存。2.空腔器官需依照规范方法剪开后固定。3.实质性器官须由器官背面，沿长轴每间隔2cm纵向平行剖开，切成数片再固定。4.微小组织和液体沉淀物，须先用拭纸或滤纸妥为包裹后固定。5.为什么要进行抗原修复？抗原修复方法有哪些？因为部分抗原在甲醛固定过程中发生蛋白之间的交联及醛基的封闭作用而遮蔽抗原决定簇，使免疫组化标记敏感性明显降低。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定簇重新暴露。抗原修复方法有：化学方法：酶消化方法，常用有胰蛋白酶及胃蛋白酶； 物理方法：热引导抗原决定簇修复，常用有单纯加热、微波处理和高压加热。6.免疫组化染色中一般应设置哪些对照？免疫组化染色中对照片设置非常重要，它是判断染色是否成功的关键依据，而且也是检测每一个抗体的质量标准，没有对照的免疫组化结果是毫无意义的。包括阴性对照、阳性对照和自身对照。替代对照，回收实验阴性对照。阴性对照 一抗由PBS或非免疫血清取代。阳性对照 用已知含有检测抗原的切片作阳性对照。自身对照 如actin、CD34在正常组织中血管壁肌层应为阳性，vimentin可以间质细胞对照， desmin以血管壁及肌束为对照，S-100蛋白以神经末梢为对照等，如应为阳性的组织是阳性，则免疫组化技术正确，如为阴性，则表明染色技术或试剂质量有问题。形态学技术与方法概论复习题1.分辨力与放大倍数。分辨力：区分两点间最小距离的本领。放大倍数：用显微镜放大镜放大物体至肉眼能观察到的程度；在一定范围内（不超过分辨力），放大倍数越大，肉眼观察到的物体就越清楚。2.肉眼：肉眼能直接观察到的事物的限度为0.1mm。3.暗视野显微镜：应用：观察因反差或分辨力不足的微小颗粒，如梅毒螺旋体、细菌等微粒的运动。可分辨0.004um-0.2um微粒4.透射电子显微镜：电子束为“光源”,以电磁为透镜，分辨力为0.1nm-02nm，放大倍数80100万倍(0.1mm/0.1nm)，成像原理:电子散射不同组织结构对电子的散射能力有差别（用重金属盐-醋酸铀、硝酸铅染色可提高反差）。5.扫描电子显微镜：原理：利用从标本表面反射回来的二次电子成像特点，景深长，成像有立体感：可观察物体表面凹凸不平的细节，标本制备简单，分辨本领可达600nm。图像分析复习题一.什么是图像的定性分析和定量分析？图像的定性分析是指用肉眼、显微镜、电镜等观察图像结果后对图像的结构特点和含义所作的描述、分析、推理和判断。图像的定量分析是指用量化的方法一数字的表达形式对图像中各种结构信息的定量描述及在此基础上对图像含义所做的定量分析、推理、判断和概括。通常所说的图像分析特别是计算机图像分析一般指的都是图像定量分析.二.图像分析和图像处理有什么不同？图像分析和图像处理是有密切联系但又不同的两个概念，图像处理本质上是指对图像的修饰，通过这种修饰去除图像的缺陷或不足，将模糊图像变为清晰图像或以新的图像形式来表达原图像等。图像分析包括图像的定性分析和定量分析。三.什么是数值图像？所谓数值图像就是把图像画面划分成由数字化的像素集所构成的图像。是像素灰度值的二维数组。四.什么是形态测量学？是指定量测试和分析组织宏观或微观水平的二维和三维结构的原理、方法及其应用的一门科学。它通过有关量化指标反映组织的结构特点。五.什么是几何校正？什么是光密度校正？几何校正是将一标准尺度输入计算机图像分析系统，计算机根据该尺度就可确定出该标准尺度输入的条件下有关图像的尺度单位，及图像中每一像素所代表的实际尺寸，这一过程通常称为标定。光密度校正也称为光密度标定，它是将一套标准的光密度片通过显微镜和（或）摄像机输入图像分析系统并以此为标准对光密度参数进行校正。六.图像分割有哪些方法？它们各有什么特点？图像分割的方法有手工分割、灰度分割、和色彩分割。手工分割：通过手工方法，借助鼠标，通过勾描感兴趣的特定结构来实现图像分割，可与色彩分割相结合。灰度分割：是根据所设定的灰度阈值进行图像分割，常与手工分割联合应用。色彩分割：就是通过指定特定的颜色，并将该颜色的图像结构提取出来。这种分割方法对于特殊颜色结构的图像具有良好的分割效果。七.什么是计算机图像分析？计算机图像分析指用计算机图像分析系统对图像结构的定量测试，以及在此基础上对图像的定量描述、理解、识别和分类。八.图像定量分析的结构参数大致上可分为哪几大类？大致上可分几何参数、光密度参数、和特化参数三大类。九.什么是吸光度（光密度OD）和积分吸光度？吸光度（光密度OD）是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度I0与该光线通过溶液或物质后的透射光强度Ib比值的对数，即：OD=log(I0/Ib).）积分光密度（IOD）：又称积分吸光度，为所测范围内各像素光密度值之和。十.在测试肿瘤细胞DI（DNA指数）时，最好用什么细胞作标准二倍体对照？与肿瘤细胞同一来源的细胞。十一.计算机图像分析在肿瘤病理学上有哪些应用？主要是通过定量揭示肿瘤组织的形态结构特征来阐明肿瘤的发生、发展、诊断、分型、分类、浸润、转移、复发和预后等病理学问题。一）在肿瘤发生发展方面; 二）在病理诊断、分类、分型方面; 三)在肿瘤预后判断方面; 四）在肿瘤转移和复发方面; 五）在肿瘤免疫组化和分子病理学研究方面.十二.计算机图像分析应用中应注意哪些问题？1.设计在先、测试在后，注意有关测试所需满足的基本条件。2.注意计算机图像分析测试并不等于体视学测试，同时应注意计算机图像分析测试中的误差。 3.注意测试样本的代表性。4.注意测试方法和计算公式的使用条件。5.注意现有参数的局限性，注意新参数的开发和利用。6.注意正确理解和解释测试参数及结果的意义，注意参照空间的“陷阱”问题。7.注意多种参数的联合应用，包括形态结构参数、DNA倍体分析参数、核仁组成区参数、免疫组化和分子病理学参数。8.注意在切片上对DNA进行定量存在的不足。9.对于计算机图像定量诊断（也包括其他诊断方法），应注意应用诊断试验的评价方法和有关评价指标，如诊断的灵敏度、特异度、漏诊率、误诊率、阳性预测值、阴性预测值和准确度等进行科学的评价。9.在临床病理学应用中应在有非常可靠、充分和稳定的定量诊断和鉴别诊断结果依据的基础上逐步过渡到临床应用。10.注意将定量病理学与分子病理学结合，注意发展分子病理学。12.注意以科学的态度对待计算机图像分析的测试结果，应充分看到计算机图像分析的优点和局限性，不应仅仅站在图像定量分析的角度片面夸大计算机图像分析的作用，也不应单纯站在定性的角度而否认或排斥计算机图像分析的作用。注意定量数据与定性资料相结合，充分利用定性资料所包含的各种信息。原位杂交复习题一. 什么是原位杂交？原位杂交（In Situ Hybridization Histochemistry , ISH）是核酸分子杂交的一部分，是将组织化学与分子生物学技术相结合来检测和定位核酸的技术。它是用标记了的已知序列的核苷酸片段作为探针（probe），通过杂交直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上检测和定位某一特定的靶DNA或RNA的存在。二什么是探针？从化学和生物学意义上理解，探针是一种分子，它带有供反应后检测的合适标记物，并仅与特异靶分子反应。三.探针的种类及其优缺点比较？基因探针分类：根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针(包括荧光素和非荧光素标记:地高辛或生物素)两大类。根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。优缺点比较：1.DNA探针（包括cDNA探针）的主要优点：这类探针多克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽，制备方法简便。DNA探针不易降解（相对RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移，随机引物法，PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记。 2.RNA探针RNA探针是一类很有前途的核酸探针，由于RNA是单链分子，所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针，这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的，标记效率往往不高，且受到多种因素的制约。这类RNA探针主要用于研究目的，而不是用于检测。RNA探针和cRNA探针具有DNA探针所不能比拟的高杂交效率，但RNA探针也存在易于降解和标记方法复杂等缺点。 3.寡核酸探针由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，寡核苷酸探针可识别靶序列内1个碱基的变化，因为短探针中碱基的错配能大幅度地降低杂交体的Tm值。一次可大量合成寡核苷酸探针（110mg），使得这种探针价格低廉，与克隆探针一样，寡核苷酸探针能够用酶学或化学方法修饰以进行非放射性标记物的标记。最常用的寡核苷酸探针有1840个碱基，目前的合成仪可有效地合成至少50个碱基的探针。 四.原位杂交组织化学技术的操作流程。 由于核酸探针的种类和标记物的不同，在具体应用的技术方法上也各有差异，但其基本操作流程和应用原则大致相同。大致可分为：杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等；杂交；杂交后处理：洗涤显示（visualization）：包括放射性自显影和非放射性标记的显色。五组织预处理有哪些？它们的作用？ （一） 固定 1.保持细胞结构2.最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平；3.使探针易于进入细胞或组织。（二）玻片和组织切片的处理 1玻片的处理.应用粘附剂预先涂抹在玻片上，干燥后待切片时应用，以保证在整个实验过程中切片不致脱落。2.增强组织的通透性和核酸探针的穿透性，提高杂交信号，3.减低背景染色， 4防止RNA酶的污染 在整个杂交前处理过程都需戴消毒手套。常规病理切片复习题1.常规石蜡切片及染色流程：新鲜标本固定洗涤脱水透明浸蜡包埋切片烤片脱蜡染色脱水透明封固. 1）、固定：将需要观察的组织构造尽量接近于它生前的正常状态。a.固定要及时，否则细胞内的酶分解蛋白质氨基酸渗出细胞或病原微生物繁殖而腐败组织结构破坏b.原理：使蛋白质沉淀或凝固c.固定剂的量：不少于组织体积的4倍d.固定时间：根据温度、组织大小、及各种固定剂的穿透力e.固定容器不能过小f.固定种类：化学固定剂、微波（1970年Mayers首次应用）g.固定剂兼有硬化作用 .常用固定剂： 固定剂分为简单（单纯）和混合固定液.甲醛：a又称福尔马林，其英文为（Formeldehyde）。市售最高为浓度为40%，用于固定的为4%，按1：9配制，d.甲醛渗透力强，对组织收缩较少，能使组织硬化，增加韧性e.甲醛容易氧化变成甲酸，使溶液变成酸性；放置久后可产生白色沉淀（三聚甲醛）f.经甲醛固定的陈旧组织（以多血的脏器如脾、肝等）会产生黑色沉淀称福尔马林色素g.甲醛是一种还原剂乙醇：a.又称酒精，为无色液体，能与水在任何比例下混合b.既有固定作用，也有脱水作用，用来固定的浓度在80%95%c.能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但沉淀的核蛋白能溶于水，故d.渗透力弱，对组织收缩大，能硬化组织特别在高浓度酒精中时间长能使组织变脆e.70%乙醇是组织的保存剂f.50%以上浓度的乙醇可以溶解脂肪及类脂体 醋酸；a.有刺激味的无色液体，温度低于15时结成冰状，故又称冰醋酸b.常用浓度不大于5%c.不能沉淀白蛋白、球蛋白，但能沉淀核蛋白d.穿透力强，但易使组织膨胀f.很少单独用，都与其它固定剂配合使用 丙酮；a.无色，易燃，易挥发之液体b.能与水、乙醇等多种溶液混合c.渗透力强，组织收缩剧烈d.广泛应用在组织化学中酶的固定，免疫组化冰冻切片的固定 中性甲醛液：此液固定组织效果较好 AF液;此液兼有脱水作用，Bouin液:渗透力强，对组织收缩小 2.染色（苏木素-伊红染色，简称HE染色） 染色方法: a.切片脱蜡至水，入苏木素液5分钟b.水洗，分化，蓝化。 c.入伊红液数秒，水洗，脱水透明封固 d.结果：细胞核蓝色，其他红色四、特殊染色 一）、胶原纤维染色：1.Van Gieson染色（苦味酸酸性复红法1889年，简称VG）操作方法：石蜡切片脱蜡至水洗；Weigert铁苏木素5min，水洗、分化、蓝化、DW洗；加VG液15min，倾去染液，95%乙醇速洗；无水乙醇、二甲苯、中性树胶封固。结果：胶原纤维红色、肌纤维、胞质、红细胞黄色、核蓝褐色。注意：1.铁苏木素甲乙两液若预先混合，易氧化沉淀而失去染色能力。2.若胶原纤维较少时，VG液中甲：乙=1：7。3.酸性复红易被水洗去，苦味酸易被乙醇洗去，因此VG染色后易褪色2.、Masson三色法（根据Masson1929）操作方法：石蜡切片脱蜡至水洗；Weigert铁苏本素5min，水洗，分化，蓝化，DW洗；丽春红酸性品红液510min，DW洗；1%磷钼酸5min；不水洗，加苯胺蓝液5min，DW洗；1%冰醋酸约1min，DW洗；脱水、透明、封固。结果：胶原纤维蓝色，胞质、肌纤维、红细胞红色、细胞核蓝褐色。3.应用：1.来源于间胚叶的肿瘤，如纤维瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤等都产生一定的纤维，常规染色难以区别；2. 在慢性炎症、机化和疤痕形成中，可随病理过程的发展而出现胶原纤维。如慢性肾小球肾炎的肾小球纤维化后，胶原纤维（+）；胃十二指肠溃疡愈复时，溃疡底部出现胶原纤维构成的疤痕；肝硬化时胶原纤维的增生；3. 良、恶性高血压病的区别，良性高血压，小动脉玻璃样变，胶原纤维（+），恶性高血压病，小动脉管壁为纤维素样坏死，胶原纤维（-），纤维素（+）。4.Masson和VG比较:在Masson和VG染色中都有酸性复红，在Masson染色中，将肌纤维染成红色，而在VG中，将胶原纤维染成红色，为什么？ 1. 组织、细胞间是有间隙的，间隙大小决定渗透性，间隙小，组织致密，渗透性就小，反之则大。2. 大分子量染液只能进入结构疏松，渗透性大的组织。分子量比较：苦味酸, 229.11；酸性复红, 585.58；苯胺蓝, 737.72二）.弹力纤维染色：操作方法：石蜡切片脱蜡至水洗，铁碘苏本素液1530min，自来水洗，2%Fecl3液分化1020S（弹力纤维清晰为止），水洗，95%乙醇25min（去碘，使弹力纤维更清晰），水洗，VG液复染5min，95%乙醇速洗，脱水、透明、封固，结果：弹力纤维黑色，胶原纤维红色，染色原理：铁碘苏木素对弹力纤维并无特异染色，而是通过染料的分散度和组织的结构密度以达到分不同组织的目的。应用：1.显示皮肤组织中弹力纤维的变化：当皮肤发生病变时，弹力纤维会发生增生、卷曲、变性、崩解等。2.显示与判定心血管疾病：如动脉粥样硬化时硬化斑块底部的内弹力板崩解、断裂、消失3.显示与鉴别肿瘤：如乳腺导管癌，伴随弹力纤维增生，可证明是早期浸润癌4.其它：如慢支、肺气肿等，可致弹力纤维散乱、破坏和增生、断裂。11.光学显微镜与电子显微镜比较（形态学方法概论）区别点光镜透射电镜扫描电镜照明可见光电子束电子束透镜玻璃透镜电磁透镜电磁透镜分辨率200nm0.2nm1-10nm放大倍率1000倍80-100万倍20-40万倍景深浅中等深成像原理光线吸收为主电子散射二次电子信息成像方式直接成像荧光屏成像显像管间接成像图像颜色彩色黑白黑白样品环境空气高真空高真空样品制作简便复杂较复杂12、组织脱水 ：1用脱水剂将组织中的水置换出来。2原则：缓慢，逐步进行；3.常用脱水剂：乙醇：优点是能力强，使组织硬化；缺点是组织收缩、变脆（高浓度、加热）；丙酮：优点是能力比乙醇强；缺点是组织收缩，价高；13. 组织透明 ：1.组织中的脱水剂被透明剂置换，当组织中全部为透明剂时，光线可以透过，组织呈不同程度的透明状态。2.常用透明剂：二甲苯：无色，液体易挥发，透明能力强，易使组织收缩，变脆，有毒害。 14.染色原理原理：1、化学反应；2、物理作用：渗透、吸附15.染色术语及概念：1、普通染色也称为常规染色或HE染色。2、特殊染色：是为了显示特定的组织结构或其它的特殊成分。3、单一染色：选用一种染料进行的染色。4、复染色：用两种不同性质的染料进行染色的方法16.组织洗涤 ：a.目的：把渗入到组织中的固定剂洗去。b.方法：流水冲洗24小时。c.特殊固定液洗涤：重络酸钾：流水冲液1224 h；饿酸：流水冲液1224h；苦味酸：50%70乙醇浸洗，或不洗；含汞物：0.5%碘酒（70%乙醇配）反复加入70%乙醇中，至加入的碘黄色不褪去为止，再去碘，用70%乙醇或硫酸代硫酸纳。