PBS缓冲液的配制.doc

PBS缓冲液的配制
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是总结： 
母液的配制： 
0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：
0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 
若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。 
另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：
pH       0.2M NaH2PO4（ml）         0.2M Na2HPO4（ml）
5.7             93.5                          6.5
5.8             92                             8            
5.9             90                             10
6.0             87.7                          12.3
6.1             85                             15
6.2             81.5                          18.5
6.3             77.5                          22.5
6.4             73.5                          26.5
6.5             68.5                          31.5
6.6             62.5                          37.5
6.7             56.5                          43.5
6.8             51                            49
6.9              45                           55
7.0              38                           62
7.1              33                           67
7.2             28                            72
7.3              23                           77
7.4              19ml                         81ml
7.5              16                           84
7.6              13                           87
7.7             10.5                          0.5
7.8              8.5                          91.5
7.9             7                              93
8.0             5.3                           94.7

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PBS是磷酸缓冲液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释，原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是首选。 PBS也不是万能的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分，维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。

文献查得：磷酸缓冲液（PBS）：NaCl 8.0g，KH2PO4 0.2g，
Na2HPO4 2.9g，KCl 0.2g，重蒸水1000mL，调pH至7.4。
【求助】关于PBS配方及浓度的问题
字体: 小 中 大 | 打印发表于: 2012-11-03 15:28    作者: nut6694    来源: 分析测试百科网
查看完整版本请点击这里：
【求助】关于PBS配方及浓度的问题

我看到有不少关于PBS的配方，愈加迷惑：
1、《分子克隆》上的PBS配方——NaCl 8g，KCl 0.2g, Na2HPO4 1.44g, KH2PO4 0.24g,是指多大浓度的PBS？0.15M、0.05M还是0.01M?是指哪几种离子的浓度????
2、看见过一种0.01M PBS的配方:NaCl 17.5g， NaH2PO4 .2H2O 2.96g, Na2HPO4.12H2O 29g,是否正确????
查看完整版本请点击这里：
【求助】关于PBS配方及浓度的问题

我也来说两句查看全部回复
最新回复
· u234 (2012-11-03 15:28:25)

1.指的是0.01M的，就磷酸根而言的，10mM Na2HPO4+2mM KH2PO4
2.磷酸根的浓度是19mM NaH2PO4 .2H2O ＋8mM Na2HPO4.12H2O ，而且没有K，

应该《分子克隆》上的配方是没问题的，我一直这么配的，用得很好
· rxcc33 (2012-11-03 15:46:32)

请问0.01M的磷酸盐缓冲液怎么配，做免疫组化用的，谢谢！急！！！
· 66小飞侠 (2012-11-03 15:47:07)
很简单，我做过不少组化了。如下：
Nacl 8 g/L,
Kcl 0.2 g/L,
Na2HPO4 1.44 g/L (若为Na2HPO4*12H2O 则2.9g/L ),
青、链霉素各100 u/ml,
Hcl调节PH至7.2分装，消毒
· kuohao17 (2012-11-03 15:47:27)
你说的分子克隆上面的PBS指的时0.01M,它指的是溶液的浓度
· hold住 (2012-11-03 15:47:52)

啊，各位大侠，请问一下，司徒镇强主编的细胞培养怎么和上面的不一样，
NaCl 8g，KCl 0.2g, Na2HPO4 1.５６g, KH2PO4 ０.２g
· bling (2012-11-03 15:48:22)
谈谈我对这个问题的看法：
我觉得里面的盐是为了保持一个恒定的渗透压，所以它的组成其实并不是很重要，也无所谓是钠盐还是钾盐 ，当然关于缓冲液的浓度，取决于起到缓冲作用的离子的浓度，也就是HPO4, H2PO4 的浓度了，如二层楼主所言。
· qqq111 (2012-11-03 15:49:24)

我们实验室是这样配的：
1. 先配好0.1M的PB1000ml。（磷酸二氢钠2.96g,磷酸氢二钠 28.7g,加双蒸水至1000ml）
2.称取40g多聚甲醛，放如广口瓶中，加入适量的0.1M的PB，摇晃后放入微波炉中，用微火加热两分钟，然后拿出摇匀，如没有熔化，再放如加热两分钟，直到融化为止。（瓶子一定要用牛皮纸包好，不然很难闻。一定要用温火，不要煮沸了。）
3.冷却后用滤纸过滤，最后用0.1M的PB定容至1000ml,既为4%的多聚甲醛。
*.如果双蒸水没有，配0.1M的PB时也可以用去离子水，我们实验室都是这摸配的，没有任何问题。 

现在博士德和中山公司都有配好的粉末出售，买来直接加到1000ml双蒸水就行了，非常方便！！大家可以试一试！
GOOD LUCK！！
· orangecake (2012-11-03 15:49:58)

PBS母液配方

29332602.snap.jpg
· orangecake (2012-11-03 15:50:18)

0.1的PBS

70050866.jpg
· PINK (2012-11-03 15:51:01)

我曾经也碰到过这样的一个问题，
关于磷酸盐缓冲液的浓度，其实就是磷酸根缓冲对的浓度，也就是溶液中的Na2HPO4以及NaH2PO4中磷酸根的浓度。另外，还有NaCl的浓度也很重要。主要是调节渗透压的作用。
关于具体的配方，其实有很多种。我整理了一下，觉得下面的两种还是比较不错的。

0.01 M PBS工作液 所需原料   5000ml   1000ml
Na2HPO4•12H2O磷酸氢二钠 克   13.42g   2.684
NaH2PO4•2H2O 磷酸二氢钠 克   1.95g    0.39
NaCl 克   42.5g   8.5
三蒸水 毫升   5000ml   1000

是工作浓度，根据自己的要求配浓缩液，关键是pH，一定要调在7.4左右，pH可以用NaOH和盐酸调。

我在实验中用了很多次还是挺不错的。
· jujuba (2012-11-03 15:52:18)
NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4•H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g 倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。

只是说10X PBS的浓度0.1 M是一个存储浓度，而0.01 M 应该就是工作浓度。即是说你在使用时要稀释10倍。不是说所有的10X 的PBS 的浓度都是0.1M。