苋菜红检测方法确认.doc

酒类中８种合成着色剂（苋菜红）检测方法确认
一、用于合成着色剂（苋菜红）检测方法确认的标液配制记录
序号
标准物质名称
色谱校正标准母液
色谱校正标准使用液
配制人及时间
标准确认人及时间
备注
W1
取用单体量（ml）
W2
M(g)
配制体积（ml）
浓度 (v/v)
浓度 (mg/ml)
容器编号
母液取用量（ml）
配制体积（ml）
浓度（v/v）
浓度 (mg/ml)
容器编号
1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

二、选择一个空白样品（经检测不含待测物质），添加一定量的苋菜红标液到空白样品中，同时求出标准曲线回归方程，求算检测方法的方法检测限、回收率、精密度、准确度，评价检测方法是否可靠实用。
三、用于苋菜红检测方法确认的校正曲线
1、area=18.1557*amount－3.3033,相关系数＝0.99990＞0.99，满
足要求。

一、 方法检出限的求算
1、依据GB/T 5009.1-2003,色谱法的检测限：
　 检出限＝最低响应值/b　=　S/b
式中，b为标准曲线回归方程的斜率，Ｓ为仪器噪音3倍时的响应值。
2、求3S/N的信号值时，采用空白样品加标求算，即在不含待测物的样品中，加入一定量的苋菜红标准物质，当加入的量恰好使信号的峰高为基线噪音的3倍时的峰面积为最低响应值。
3、标准曲线回归方程的斜率，采用接近定量限以上的浓度，至少５个点，作曲线方程，求出曲线的斜率，上面已求出，斜率b=18.1557。
4、经实验测定，在空白样品中添加标准物质，使空白溶液中苋菜红的浓度＝0.12ug/ml时，按照检测方法进行样品处理，取10ul进样，此时产生的信号恰为仪器噪音的3倍，如下图，此时的峰面积为3.1。
空白加标样品谱图 图1：

5、在此，直接采用峰强度为噪声水平3倍时的空白样品加标浓度作为方法检出限（方法检出浓度），如上图，h1= 0.27 mAu,h2= 0.08 mAu, h1/h2≈3,此时的空白加标样品浓度为0.12ug/ml，按照检测方法进行样品处理后（取20g样品，经处理，然后浓缩到5ml,取10uL进样），此时，进样液中的待测物浓度为0.12ug/ml×4=0.48ug/ml。
6、此时，进样10ul,方法检出限为10ul×0.48×1000ng/1000ul=4.8ng,满足GB/T 5009.35标准要求的方法检出限＝6ng。
当取样量为20g,按检测方法操作步骤制样后定容至5ml，取10ul进样，此时方法检出限：

x－样品中待测物含量，单位为克每千克(g/kg)；
A-进样液中待测物质量,单位为微克(ug);
－进样体积,单位为毫升(ml);
－试样稀释总体积, ,单位为毫升(ml);
m－试样质量,单位为克(g);

二、 回收率、精密度、准确度的计算
回收率、精密度、准确度的计算应在方法测定低限（定量限）、2倍方法测定低限、10方法测定低限三个水平进行试验，本方法的方法检测限已确定，为0.12mg/kg,即0.12ug/g；方法测定低限等于3倍于方法检出限，即方法测定低限＝3×方法检出限,则最低设计浓度为0.12ug/g×3=0.36ug/g,同理2倍方法测定低限的浓度为0.72ug/g,10倍方法测定低限的浓度为3.6ug/g,选择一个空白样品，在其中添加一定量的标准物质，设计成含量分别为0.36ug/g、0.72ug/g，3.6ug/g的三个空白样品，然后按检测方法制样，每个空白加标样品平行进样6次，计算其浓度，然后计算回收率、精密度、准确度。

计算回收率、精密度、准确度在空白样品中添加苋菜红标准物质浓度表:
序号
试验水平
标液浓度(ug/ml)
加入量(ml)
定容体积(ml)
空白样中苋菜红含量
1
方法测定低限
30
0.6
50
0.36ug/g
2
2倍方法测定低限
30
1.2
50
0.72ug/g
3
10倍方法测定低限
500
0.36
50
3.6ug/g

合成着色剂检测方法（苋菜红）回收率、精密度、准确度的计算

序号
试验水平
空白样品添加浓度（ug/g）或mg/kg
平行测定浓度（ug/g）
平均回收浓度（ug/g）
回收率/%
精密度/变异系数CV%
准确度/偏差范围/%
1
2
3
4
5
6
1
方法测定低限
0.36
0.306
0.320
0.329
0.308
0.308
0.308
0.313
87.0
3.0
-13.1
2
2倍方法测定低限
0.72
0.588
0.592
0.591
0.594
0.593
0.593
0.592
82.2
0.36
-17.8
3
10方法测定低限
3.6
3.672
3.690
3.694
3.695
3.692
3.691
3.689
102.4
0.23
+2.4
计算公式

1 、
2、
3、

检测方法确认的技术要求

1、回收率范围
被测组分含量（mg/kg）
回收率范围(%)
1-100
90-110
0.1-1
80-110
＜0.1
60-120

2、实验室内变异系数范围
被测组分含量（mg/kg）
变异系数范围(%)
0.1
15
1
11
10
7.5

3、测定值与真实值的偏差指导范围
被测组分含量（mg/kg）
偏差范围(%)
0.001-0.01
-30 ～ +10
0.010-10
-20 ～ +10
10-1000
＜15

4、检测方法确认的技术要求评价
试验水平
空白样品添加浓度（ug/g）或mg/kg
回收率/%
精密度/变异系数CV%
准确度/偏差范围/%
是否满足方法确认技术要求
方法测定低限
0.36
87.0
3.0
-13.1
是
2倍方法测定低限
0.72
82.2
0.36
-17.8
是
10方法测定低限
3.6
102.4
0.23
+2.4
是