DB 14∕ T 1618-2018 转基因抗旱棉花鉴定技术规范.pdf

ICS 65.020.01 B 05 DB14 山西省地方标准 DB 14/ T 16182018 转基因抗旱棉花鉴定技术规范 2018 - 01 - 10 发布 2018 - 03 - 10 实施 山西省质量技术监督局发 布DB14/ T 16182018 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 抗旱性鉴定 . 1 5 抗旱性判定规则 . 5 DB14/ T 16182018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草 本标准由山西省农业科学院提出并归口 本标准起草单位：山西省农业科学院生物技术研究中心、山西省农业科学院棉花研究所。 本标准主要起草人：吴慎杰、张换样、李静、秦丽霞、李盛。 DB14/ T 16182018 1 转基因抗旱棉花鉴定技术规范 1 范围 本标准规定了转基因棉花抗旱性鉴定方法及判定规则。 本标准适用于转基因棉花的抗旱性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程发芽试验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 对照品种 转基因材料的受体材料。 4 抗旱性鉴定 4.1 发芽试验鉴定 4.1.1 将供试种子置于 0.1%氯化汞溶液中，灭菌消毒 10 min15 min。 4.1.2 在直径 9 cm 培养皿内放 4 张定性滤纸，加入 10% PEG6000（聚乙二醇）溶液 10 mL，每皿 1 个材料，均匀摆放整齐健康籽粒 15 粒，受体材料种子为对照，重复 34 次。 4.1.3 将培养皿放入发芽箱内，25 发芽 7 d。 4.1.4 分别在萌发后第三天和第七天，测定种子的发芽势和发芽率，评定转基因材料的抗旱性。同时可以测定根长等，反映材料的抗旱性强弱。 4.2 苗期抗旱性鉴定 4.2.1 旱棚要求 苗期抗旱性鉴定可在旱棚进行。鉴定采用顶部有棚的鉴定池。旱棚顶部离地面高 2.5 m 以上，透光率在 85%以上，防雨不遮光，四周平时有利于通风，下雨时能自动降下帘子而不飘雨；鉴定池子为池长20 m，宽 2 m，池深 0.5 m，有底不透水。 DB14/ T 16182018 2 4.2.2 试验设计 将转基因纯合系和受体对照种植于旱棚中，随机区组设计，三个小区重复，每个小区种4行，小区长3 m,宽1.2 m，行距0.30 m,株距0.15 m。从 3 叶期开始干旱胁迫，当土壤含水量降低到3%时，停止胁迫进行复水，反复三次，最后调查存活的苗数，以幼苗存活率表示供试材料的抗旱性。 4.2.3 播种管理 适期播种，播种前浇水达到种子在大田播种出苗所需的水份，定期管理，使棉苗生长健壮一致，待棉苗长至三叶期，定苗，然后进行干旱胁迫处理。 4.2.4 干旱处理方法 叶片卷叶时为目测指标， 叶片卷叶时开始进行连续拍照记录叶片萎蔫程度和土壤水分连续测定， 拍照直到能区分开转基因材料和受体的表型（种子量小胁迫可以到此为止，复水便于收获到种子），水分测定直到土壤水分降至3%时再进行复水处理。 4.2.5 抗旱性评价方法 4.2.5.1 抗旱性直接观察 通过直接观察拍照记录的转化事件和受体对照的表型，初步了解该基因对于受体材料抗旱性的影响。 4.2.5.2 相对成活苗率计算 反复干旱3次后调查成活苗数，以生长点的死活为成活标准，生长点死的为死苗，生长点活的为活苗，并计算成活苗率和相对成活苗率。依据以下公式计算： 100%每个处理总苗数成活苗数）成活苗率（1） 100%受体对照成活苗率各转化事件成活苗率）相对成活苗率（2） 4.3 花铃期抗旱性鉴定 花铃期抗旱性鉴定可在旱棚、本地大田适期遮雨和新疆大田适期控水进行。 4.3.1 试验设计 将试验区划分为两片区域，用于正常灌水和干旱胁迫。种植转基因纯合系和受体对照，随机区组设计，三个小区重复，每个样本小区面积18 （3.6 m 5 m，行长5 m不含走道0.5 m），平均株距 行距=0.125 m 0.30 m。适期播种，种植后浇一次出苗水，然后实行正常灌水和花铃期断水胁迫。依次进行拍照记录、田间调查、收获、最终进行考种和测产。 4.3.2 胁迫处理 花铃期胁迫组不灌水，胁迫10 d后，胁迫组复水，此后正常灌水。 4.3.3 对照处理 DB14/ T 16182018 3 全生育期正常灌水。 4.3.4 考察性状 吐絮期测定农艺性状，每个重复均调查5株，取其平均值，包括株高、始节高、始节数、铃数、有效铃数、果枝数、有效果枝数等。 纤维成熟度较好时每个重复收20朵吐絮铃调查单铃重和衣分。依据以下公式计算：2020铃籽棉重）单铃重（g（3） 100%籽棉重皮棉重）衣分（4） 4.3.5 抗旱性评价方法 4.3.5.1 抗旱性直接观察 通过直接观察拍照记录的转基因纯合系和受体对照的表型， 初步了解该基因对于受体材料抗旱性的影响。 4.3.5.2 抗旱性评价 对各项指标数据进行标准化处理，计算抗旱指数、综合抗旱系数、隶属函数值，划分抗旱级别。分析中所用公式如下： 抗旱指数 YmwYdYwYdDI（5） 单项抗旱系数 ckiXiPI （6） 综合抗旱系数 niPInRI11（7） 有效铃数单铃重单株产量 （8） 隶属函数值 minmaxmin)(PIiPIiPIiPIx（9） 上述公式中Xi为干旱胁迫条件下某性状或指标值；Cki为正常灌水条件下某性状或指标值；Yd为水分胁迫下各品种的平均单株产量；Yw为正常灌水条件下各品种的平均单株产量；Ymw为水分胁迫条件下所有品种的平均单株产量。PIimax、PIimin分别为各性状指标抗旱系数的最大值和最小值。 4.4 全生育期抗旱性鉴定 全生育期抗旱性鉴定可在旱棚和新疆自然干旱条件下进行。 DB14/ T 16182018 4 4.4.1 试验设计 将试验区划分为两片区域，用于正常灌水和干旱胁迫。种植转基因纯合系和受体对照，随机区组设计，三个小区重复，每个样本小区面积18 m2（3.6 m 5 m，行长5 m不含走道0.5 m），平均株距 行距=0.125 m 0.30 m。适期播种，种植后浇一次出苗水，然后实行正常灌水和全生育期断水胁迫。依次进行拍照记录、田间调查、收获、最终进行考种和测产。 4.4.2 胁迫处理 全生育期胁迫组不灌水。 4.4.3 对照处理 全生育期对照组正常灌水。 4.4.4 考察性状 考察农艺性状，同4.3.4。 4.4.5 抗旱性评价方法 4.4.5.1 抗旱性直接观察 通过直接观察拍照记录的转基因纯合系和受体对照的表型， 初步了解该基因对于受体材料抗旱性的影响。 4.4.5.2 抗旱性评价 对各项指标数据进行标准化处理，计算抗旱指数、综合抗旱系数、隶属函数值，划分抗旱级别。计算方法同4.3.5。 4.5 山西自然干旱条件抗旱性鉴定 4.5.1 试验设计 将试验区划分为两片区域，用于正常灌水和自然降雨。种植转基因纯合系和受体对照，随机区组设计，三个小区重复，每个样本小区面积18 m2（3.6 m5 m，行长5 m不含走道0.5 m），平均株距行距=0.125 m0.30 m。适期播种，种植后浇一次出苗水，然后实行正常灌水和全生育期断水胁迫。依次进行拍照记录、田间调查、收获、最终进行考种和测产。 4.5.2 胁迫处理 全生育期依靠自然降雨作为胁迫处理。 4.5.3 对照处理 全生育期对照组正常灌水。 4.5.4 考察性状 考察农艺性状，同4.3.4。 4.5.5 抗旱性评价方法 DB14/ T 16182018 5 4.5.5.1 抗旱性直接观察 通过直接观察拍照记录的转基因纯合系和受体对照的表型， 初步了解该基因对于受体材料抗旱性的影响。 4.5.5.2 抗旱性评价 对各项指标数据进行标准化处理，计算抗旱指数、综合抗旱系数、隶属函数值，划分抗旱级别。计算方法同4.3.5。 5 抗旱性判定规则 5.1 苗期抗旱性判定 以相对成活苗率作为判定指标，见表1。 表1 苗期抗旱性判定 相对成活苗率 高抗旱 90%以上 抗旱 75%-89% 耐旱 50%-74% 不抗旱 50%以下 5.2 花铃期抗旱性判定 以抗旱指数、综合抗旱系数、隶属函数值作为判定指标，见表2。 表2 花铃期抗旱性判定 抗旱指数 综合抗旱系数 隶属函数值 强抗 DI1.30 强抗 RI1.00 强抗 (x)0.50 抗 1.29DI1.0 中抗 0.99RI0.90 中抗 0.499 (x)0.40 中抗 0.99DI0.70 干旱敏感型 RI0.89 干旱敏感型 (x)0.399 弱抗 0.69DI0.40 不抗 DI0.39 5.3 全生育期抗旱性判定 以抗旱指数、综合抗旱系数、隶属函数值作为判定指标，见表2。 5.4 山西自然干旱条件抗旱性判定 以抗旱指数、综合抗旱系数、隶属函数值作为判定指标，见表2。 _