DB 14∕ T 1591-2018 草莓脱毒原原种苗制备技术规程.pdf

ICS 65.020.20 B 05 DB14 山西省地方标准 DB 14/ T 15912018 草莓脱毒原原种苗制备技术规程 2018 - 01 - 10 发布 2018 - 03 - 10 实施 山西省质量技术监督局 发 布 DB14/ T 15912018 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 外植体的选择 . 1 5 脱毒与检测 . 1 6 茎尖的初代培养 . 2 7 组培苗的继代扩繁 . 2 8 组培苗的生根诱导 . 2 9 组培苗的驯化移栽 . 3 附录 A（资料性附录） 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 . 4 附录 B（资料性附录） 草莓脱毒原原种苗出圃登记表 . 5 DB14/ T 15912018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：山西省农业科学院果树研究所。 本标准主要起草人：刘伟、樊新萍、王国平、陈冲、霍辰思、曹贵寿、史华平、尚勇进。 DB14/ T 15912018 1 草莓脱毒原原种苗制备技术规程 1 范围 本标准规定了草莓脱毒原原种苗制备的术语和定义、外植体的选择、脱毒方法、茎尖的初代培养、组培苗的继代扩繁、生根诱导及驯化移栽。 本标准适用于草莓脱毒原原种苗的制备。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 406 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 草莓脱毒原原种苗 脱毒的草莓组培苗移栽于无草莓病源、虫源的隔离区内成活的植株。 3.2 微茎尖脱毒 从匍匐茎上切取约0.2 mm茎尖分生组织接种至培养基中，分化出的组培苗可有效脱除病毒。 4 外植体的选择 4.1 选择标准 选取健壮、无病、开花结果正常的草莓植株作为母株，采集刚抽出且叶片未展开的匍匐茎作为外植体材料。 4.2 采集时期 外植体宜在结果后期匍匐茎大量抽生阶段进行采集。 5 脱毒与检测 5.1 脱毒方法 DB14/ T 15912018 2 采用微茎尖脱毒法对草莓匍匐茎外植体材料进行脱毒处理。 5.2 病毒检测 依据NY/T 406 的要求执行。 6 茎尖的初代培养 6.1 初代培养基的选择 草莓茎尖初代培养的培养基为MS+ 0.5 mg/L1.0 mg/L 6-BA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。 6.2 外植体消毒方法 切取匍匐茎顶端2 cm左右作为外植体进行消毒，流水冲洗0.5 h2 h。在超净工作台下，用75%酒精将外植体浸泡30 s，再用1.0%次氯酸钠消毒10 min15 min或0.1%升汞溶液消毒5 min10 min，无菌水冲洗35次。所用消毒液与外植体体积的比例约为10:1。 6.3 茎尖分生组织切取 将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。 在解剖镜下用镊子将外植体顶端一层一层小心剥开， 直至露出茎尖分生组织部分，用锋利的解剖刀切取约0.2 mm的茎尖，接种于初代培养基中。 6.4 初代培养条件 初始接种的茎尖暗培养2 d， 之后转置于常规培养条件下培养， 培养温度25 ， 光照强度3 000 Lux5 000 Lux，光照时间每天14 h16 h，相对湿度70%75%。茎尖组织在该培养条件下生长约5060 d形成幼小无根植株后即可转至继代培养阶段。 7 组培苗的继代扩繁 7.1 继代培养基的选择 适宜草莓继代扩繁的培养基为MS + 0.1 mg/L0.3 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。 7.2 继代过程的条件控制 草莓组培苗继代培养条件为： 培养温度25 ， 光照强度3 000 Lux5 000 Lux， 光照时间每天14 h16 h，相对湿度70%75%。继代培养每隔3040 d 需继代一次。用于制备脱毒原原种苗的组培苗在继代次数上应控制在7次以内，总继代培养时间不宜超过一年。即草莓组培苗应在每年重新制备。组培生产过程应参照附录A.1进行详细登记。 8 组培苗的生根诱导 8.1 生根培养基的选择 诱导草莓生根的培养基为1/2MS + 0.1 mg/L NAA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。 DB14/ T 15912018 3 8.2 生根过程的条件控制 用生长健壮且无明显变异的组培苗进行生根诱导。 选择高度在2 cm以上的组培幼苗接种至生根培养基进行生根。一般无根苗转接至生根培养基培养30 d左右即有多条根系产生，此时即达到驯化移栽的条件。生根阶段的培养条件与继代过程相同。 9 组培苗的驯化移栽 9.1 组培苗的炼苗措施 将达到驯化移栽条件的组培苗移至温室， 在自然光条件下炼苗7 d左右， 控制温室内温度 30 ， 每天10：0015：00需进行适当遮荫，避免日光曝晒。采用闭盖炼苗2 d、松盖炼苗2 d、开盖炼苗3 d的方式使组培苗逐渐适应瓶外环境。 9.2 移栽基质的准备 移栽基质的成分配比草炭:蛭石:珍珠岩=4:3:1， 添加复合肥料 （N:P2O5:K2O =20:10:20） 200 g/m3。移栽容器采用50 孔育苗穴盘，提前装好基质并浇透水备用。 9.3 组培苗移栽及栽后管理 9.3.1 移栽时间与方法 组培苗炼苗后叶片舒展变成深绿色且出现表皮毛， 此时即可进行移栽。 移栽适宜在晴天的傍晚或阴天进行。 移栽时需将幼苗用镊子小心地从瓶中夹出， 用清水将根部的培养基清洗干净， 然后将幼苗在75%百菌清可湿性粉剂8001 000倍液浸泡杀菌10 min。杀过菌的幼苗即可移栽至育苗穴盘，移栽时应注意使根系保持舒展直立的状态，以利于新根的发生与幼苗的成活。 9.3.2 移栽后管理 移栽后将育苗穴盘整齐摆放于温室，然后需立即浇水，并搭建小拱棚外覆薄膜保湿。第一遍水需浇透，以利于迅速发根，以后每天上下午需各浇水一次。移栽后需仔细观察幼苗状态，及时控制温室内环境条件。移栽一周内温室内温度应控制在25 30 ，湿度70%以上，并且晴天的10：0015：00需特别注意遮阴。移栽一周后草莓植株挺立且有新叶发生则证明移栽成活。 9.4 脱毒原原种苗出圃 脱毒原原种苗达到3叶1心时即达到出圃标准。出圃的草莓脱毒原原种苗应参照附录B.1中的出圃登记表进行严格登记，实行可追溯管理。 DB14/ T 15912018 4 A A 附 录 A （资料性附录） 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 表A.1 给出了草莓脱毒原原种苗组培生产过程中需要登记记录的内容。 表A.1 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 接种时间 品种名称 继代次数 接种数量（瓶） 备注 DB14/ T 15912018 5 B B 附 录 B （资料性附录） 草莓脱毒原原种苗出圃登记表 表B.1 给出了草莓脱毒原原种苗出圃销售过程中需要登记的内容。 表B.1 草莓脱毒原原种苗出圃登记表 出圃时间 品种名称 苗龄（天） 出圃数量（株） 出圃去向 备注 _