2型糖尿病肾病患者血清.ppt

导导 师师 ：唐 灵 副教授 研究生研究生 ：庾更绪 专专 业业 ：内科学 2 2型糖尿病肾病患者血清中型糖尿病肾病患者血清中 MMP-9MMP-9和和TIMP-1TIMP-1的表达及意义的表达及意义提纲提纲立题依据立题依据研究内容研究内容1研究目标研究目标技术路线技术路线研究方法研究方法统计学分析统计学分析拟解决的关键问题拟解决的关键问题 预期结果预期结果可行性分析可行性分析工作进度安排工作进度安排经费预算经费预算一、立项依据糖尿病(diabetes mellitus，DM)是以高血糖为主要标志的内分泌代谢性疾病。2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus，2型DM)在糖尿病患者中所占比例最大，有资料预测到 2030年将上升到 3.66亿，患病率可达到4.4。糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常见的微血管并发症之一,是终末期肾病(ESRD)的常见原因,是糖尿病患者的主要死亡原因之一，其发生发展严重影响患者的生活质量和存活时间,但它的发病机制和发展过程尚未完全阐明。近来多数学者对DN发病机制有了新的认识,认为ECM的合成增加和降解减少并重,都可以促进肾小球进行性硬化。细胞外基质(ECM)是胰岛细胞微环境中的重要组成成分,与胰岛细胞的活力和功能密切相关。基质金属蛋白酶和组织基质金属蛋白酶抑制剂是参与ECM合成和降解的一个关键酶系。MMP-9及TIMP-1与可能与糖尿病肾病的发生、发展最为相关。MMP-9是目前所知的肾组织内活性最强的MMPs之一，具有降解多种ECM成分的强大能力，MMP-9TIMP-1表达失衡是引起ECM异常积聚的重要因素之一。而在众多MMPs家族成员中，MMP-9能够降解肾脏组织明胶和基底膜胶原,TIMP-1是MMP-9特异性的抑制因子，因此MMP-9及TIMP-1与可能与糖尿病肾病的发生、发展最为相关。近年随着研究的深入，人们发现MMP-9水平的增高并不一定会出现ECM减少的结果，MMP-9的活性受到TIMP-1水平的影响。相对于MMPs，ECM与MMPs/TIMP-1比值的关系更为密切。目前，MMPS、TIMPS在糖尿病肾病中的作用越来越受到关注，对MMP一9/TIMP一1的深入研究将有助于阐明糖尿病肾病的发病机制，并为新的糖尿病肾病药物的开发提供研究方向。二、研究内容 2型糖尿病肾病中型糖尿病肾病中MMP-9和和 TIMP-1的的表达及意义表达及意义 现在认为ECM的合成增加和降解减少并重,都可以促进肾小球进行性硬化,甚至后者的作用更大,因此ECM降解过程备受人们重视。MMP-9TIMP-1表达失衡是引起ECM异常积聚的重要因素之一。三、研究目标研究验证MMP-9、TIMP-1与DN（糖尿病肾病）的发生、发展的相关性。糖尿病肾病的发病机制错综复杂，至今仍未能完全阐明。MMP一9和TIMP一1的表达变化尤其是MMP一1/TIMP一1比值的变化影响了糖尿病时肾脏细胞外基质的降解，参与了DN的发生与发展过程。研究对象研究对象NC组组2型糖尿病患者型糖尿病患者NA组组(UAER200g/min)检测血清检测血清MMP-9、TIMP-1、FPG、CRP、HbA1C、Cr、BUN、Fins、C-P水平水平试验数据统计学处理、比较、分析试验数据统计学处理、比较、分析撰写并发表论文撰写并发表论文四、技术路线四、技术路线五、研究方法(1)收集2012年11月2013年6月在桂林医学院附属医院住院及门诊的75例2型糖尿病患者，所有病例诊断符合1999年WHO糖尿病诊断及分型标准。以上人员均除外近期（1个月）有急性损伤、感染及风湿等炎症反应性疾病，并排除原发性肾病、高血压病及心力衰竭等疾病。各组间年龄、性别、体重指数（BMI）、血压等参数经方差分析差异无显著性，具有可比性。(2)根据24小时尿白蛋白排泄率(UAER)分为三组：正常白蛋白尿组(NA组)25例(UAER 200g/min)。另选健康体检者25例为正常对照组（NC组）。(3)所有入选者测量血压、腰臀比（用皮尺平脐水平环绕一周测量腰围，环绕臀部最宽处一周测量臀围，求得腰臀比），以身高、体重计算体重指数（BMI），即BMI=体重（Kg）/身高(m)2。均于空腹10小时后采集静脉血液5ml，肝素抗凝，采血前避免剧烈活动及应激等，血标本保存于-70冰箱中待测血清MMP-9和TIMP-1浓度。同时抽血应用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（FPG）、应用全自动生化分析仪测血清C反应蛋白（CRP）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血肌酐（Cr）、尿素氮(BUN)。应用放射免疫分析法测血胰岛素（Fins）、C-肽（C-P）。采用稳态模式评估法评价胰岛素抵抗程度，即HOMA-IR=FPG FINS/22.5。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清MMP-9、TIMP-2浓度。六、统计学分析所有数据均应用SPSS13.0统计软件处理，结果用均值标准差（）表示。计数资料比较用2检验，多组计量资料分析采用方差分析，多组间两两比较采用SNK检验。方差不齐时作秩和检验。所有检验均采用双侧检验，以P0.05为差异有统计学意义。计算Pearson相关系数，判断两个变量的相关关系。影响血清MMP-9、TIMP-1浓度的多因素分析采用多元线性逐步回归分析。七、拟解决的关键问题通过合理的实验设计，对合并有糖尿病肾病改变的2型糖尿病患者进行血清MMP-9、TIMP-1以及其他相关指标的检测，观察血清MMP-9、TIMP-1与糖尿病肾病的关系，进一步探讨糖尿病肾病发生的多重机制，对DN的诊断及防治提供更充分、更可靠和更有利的依据，为临床延缓糖尿病肾病的进展提供一个新思路。八、预期成果（1）本课题若能顺利完成，将有助于了解MMP-9、TIMP-1在糖尿病肾病中的作用，对糖尿病肾病的发病机制的研究提供新的思路。为以后糖尿病肾病更进一步的实验以及临床研究提供实验依据。（2）预期研究成果在该研究领域达到国内先进水平，填补此领域的研究空白，成果以科学研究论文形式在国内刊物上公开发表论文1-2篇。九、可行性分析本课题负责人唐灵副教授在临床、科研、教学上经验丰富，先后参与了多项省厅级的科研课题，科研能力强，水平高，是确保本课题研究工作顺利进行的有力保障。课题其他组成人员有内分泌学教授、副教授、硕士研究生及其他科研技术人员，技术力量雄厚，保证了本科研课题的科学性、合理性及可行性，以上是本课题能够顺利进行的坚实基础。十、工作进度安排准备阶段：（准备阶段：（2012-6-1至至2012-10-31）完成实验条件、试验设备，以及所需物品的配备、人员分工准备工作。病例采集阶段：（病例采集阶段：（2012-11-1至至2013-6-30）主要完成病例采集。实施阶段：（实施阶段：（2013-7-1至至2013-7-31）完成各项指标的检测、数据的收集和整理以及统计学处理。总结阶段：（总结阶段：（2013-8-1至至2013-10-31）进行讨论分析、论文撰写及发表。十一、经费预算实验前准备、实验室使用费：500元实验药品、试剂盒、实验材料购置费：5000元文献查阅、打印以及论文发表：2000元 其它费用：500元 合计：8000元