气虚生物学相关基础及补气药干预研究.ppt

,目 录,1.,研究目标,2.,研究内容,3.,研究结果,4.,下阶段研究工作,PART 1,研究目标,1,.,用数据挖掘的方法研究补气类中药的化学成分基础及作用靶标。,2,.,通过动物实验,观察气虚模型动物生物学功能的变化规律,，试图阐明,“,气,”,的物质基础。,4,.,考察人参、黄芪等经典补气药对气虚,动物,的干预作用。,3,.,通过代谢组学及蛋白组学寻找气虚动物差异化合物及差异蛋白。,12,味,补气中药,：,人参，西洋参，太子参，党参，黄芪，灵芝，刺五加，白术，山药，白扁豆，甘草，大枣,选,自,中华本草,所有补气中药,化合物,及其靶标,从中药系统药理学数据库,(TcmSP,TM,，,http,:/),和中药综合数,据库,（,TCMID，http/megabionet.,org/tcmid/),中获得,。,使用,计算机,软件,Cytoscape,建立关联及,Pajek,软件查找,补气中药的共同成分及,靶标，查找重要,靶标（在补气中药中出现,次数,8,）,一、补气中药的共同成分及靶标的研究,二、气虚动物生物学指标的研究,1.,动物分组,空白组,模型组,人参,高剂量组（,0.162g/kg）,人参低剂量组,（,0.324g/kg,）,黄芪高剂量组,（,0.54g/kg,）,黄芪低剂量组,（,1.08g/kg,）,2.,气虚模型造模方法,：,过度疲劳饮食失节,（每天上午,8,：,00,、下午,6,：,00,将大鼠置于恒温水槽（,231,，水深,32cm,）中尾部负重（,8%,）石头进行力竭游泳，并隔日喂食（隔日禁食，隔日按,100g/kg/d,饲料量饲养），连续,14d，,第,15d,处理。,二、气虚动物生物学指标的检测,3.,检测指标,免疫方面：动物体重及免疫,器官胸腺指数和脾,指数,疲劳程度,方面,：,大鼠力竭游泳时间的变化,骨髓,造血方面：骨髓有核细胞,数量，外,周血象及血流变指标,能量代谢,方面：琥珀酸脱氢酶（,SDH,）及,Na,+,-K,+,-ATP,酶活性,检测,三、气虚动物代谢组学及蛋白组学的研究,3.1,血浆代谢组学,3.1.1,血浆前处理,（前期工作检测了,模型组与空白组血浆）,3.1.2,色谱条件,色谱柱,:Agilent Zorbax Extend-C18(2.1,100mm,3.5-Micron 80A),流动相,:0.1%,甲酸水,(A),、乙腈（,B,）,流速,:0.4ml/min,进样量,:2,L,柱温,:35,运行,13min,。梯度洗脱条件如下,：,3.1.2,质,谱条件,：,离子源模式,：ESI,正离子模式；毛细管电压,:4000V,；雾化器压力,:40psing,；干燥气流速,:10L/mim,干燥气温度,:350,全扫描监测得血浆总离子流图,(TIC),提取质谱信息。,3.1.3,数据分析：,MPP,软件分析：筛选化合物条件为,组间出现概,75%,、组内出现概率,100%,；,后与代谢组学数据库匹配,，,峰形较好的化合物,MS/MS,二级谱分析,，与,metlin,数据库匹配结果，确定生物标记物。,3.1,骨骼肌蛋白组学,PART 2,研究结果,一、补气中药共同成分及靶标的研究结果,12,味补气药的无共同成分，有一共同靶标：,Calmodulin（,钙调蛋白）,查找的重要靶标包括：,GABA,受体，一氧化氮合酶，,乙酰胆碱酯酶,，,干扰素,，,转录因子,p65，,单胺氧化酶,A/B，,凝血酶，前列腺素合酶,1/2，,促葡萄糖转运蛋白，维甲酸,RXR-,受体，等。,共同靶标,重要靶标,二,、,气虚动物生物学指标的研究结果,1.,免疫方面,1.1,体重变化情况：,1.2.,免疫器官指数：,3.,骨髓造血方面,3.1,有核细胞数量,演示设计交易平台,3.2.,外周血象指标,3.3,血液流变学指标,7.,能量代谢方面,三、气虚动物代谢组学结果,总离子流图,红色：空白组,黑色：模型组,QC,图（红色为模型组，,蓝色为空白组）,火山图，红色为有差异物质,吲哚丙烯酸（,Indoleacrylic acid,）是必须氨基酸色氨酸的代谢产物，色氨酸作为人体必需氨基酸之一,参与蛋白质的生物合成和维持机体内环境的稳定；,烟酰胺（,Niacinamide,）是烟酸的酰胺形式，参与氧化,-,还原反应,干预能量代谢等生理过程，在维持细胞的正常生命活动中发挥重要作用。,PART 3,下阶段研究工作,1.,继续完成代谢组学工作；,2.,继续完成蛋白组学工作；,3.,通过代谢组学、蛋白组学差异物质及生物学功能的变化与数据挖掘相联系，试图阐明,“,气,”,的物质基础；,4.,通过补气药干预的物质的变化，试图阐明补气药的作用及其作用机制。,下阶段的工作,感谢聆听,