绪论临床免疫学和病原学检查-.ppt

1实验诊断学的概念以临床检验学为基础，将检验学提供的结果或数据，由医师结合临床病史/家族史、症状/体征、影像资料/病例检查等，应用于临床诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断；也可以为科学研究、预防疾病、健康普查和遗传咨询等提供实验依据。基础医学向临床医学过度的桥梁课程2实验诊断学的应用范围和局限性应用范围：随着医学模式由疾病诊治单一模式向多方向转化而逐渐拓宽和不断充实 1.为临床医学服务：（1）确定诊断：白血病的血细胞和骨髓象检查 病毒的核酸和某些抗体的检查 寄生虫查到虫卵/成虫 （2）鉴别诊断：细菌和病毒感染的鉴别等 （3）辅助诊断：肝、肾、内分泌功能的检查 （4）疗效观察、预后判断和复发监测等 3实验诊断学的应用范围和局限性应用范围：2.为预防医学服务：通过流行病学调查、及时发现传 染源，制定预防和控制措施 3.为健康普查服务：早期发现、早期诊断、早期治疗 4.为遗传咨询服务：优生优育、杜绝遗传性疾病4实验诊断的影响因素实验诊断学的影响因素1.实验（分析）前的影响因素（75%以上）生理因素：人种、民族、性别、年龄等 生活状态：运动、体位、进食等 环境因素：居住条件、地区和海拔高度等 标本的采集、保存和运送 药物的影响2.实验（分析）中的影响因素3.实验（分析）后的影响因素5实验诊断学的质量管理室内质量控制：控制精密度，由实验室自己实施 针对实验室内部影响质量的所有环节室间质量评估 控制准确性、可比性，由权威机构组织全面质量控制 就建立全面的质量管理体系 参加实验室认可：15189，CAP6分析前的质量管理患者的准备标本的控制7标本因素对检验质量的影响标本的类别 1.血标本：全血、血浆和血清等。全血：临床血液学检查 血浆：血栓和止血检查 血清：生化和免疫检查 静脉血、动脉血和毛细血管血，分别适合不同的检测 真空采血管 8标本因素对检验质量的影响标本的类别 2.尿液标本：尿液检验的检查结果是否准确与标本正 确收集直接相关 随机尿：门急诊患者的常规检验 首次晨尿：浓缩尿，细胞和管型等形态完整，适合有形成分的检测 24小时尿：定量分析 中段尿：培养用的尿液 3.粪便：应新鲜、干净的容器以免污染，常规510g，寄生虫留取全部或24小时粪便，培养应留取可疑阳性 部分9标本因素对检验质量的影响标本的类别 4.脑脊液：收集三份于无菌小瓶中，每瓶12ml 第一瓶常混有血液：培养 第二瓶做化学检查 第三瓶做细胞检查 5.浆膜腔液：胸腔、腹腔、心包腔和关节腔等 6.羊水：不同的检查目的采取不同的穿刺时间和量 诊断胎儿性别和遗传病：1620周，2030ml 了解胎儿成熟度：晚期妊娠，1020ml10标本因素对检验质量的影响标本的类别 7.前列腺和精液：8.痰液和支气管灌洗液 9.其他：胃及十二指肠液等 11标本因素对检验质量的影响标本的采集 1.患者的准备及患者身份识别：饮食状态，精神状态，运动状态等 条形码，身份证等 2.采集时间 清晨空腹标本：受各种因素影响小，减少昼夜节律影响，重复性好 随机或急诊标本：无法限定时间；体内代谢比较稳定、影响因素少 指定时间标本：糖耐量、培养等12标本因素对检验质量的影响标本的采集 3.采血的体位：当人体从卧位到直立或者坐位时会导 致液体从血管内向组织间隙扩散约12%，许多指标影 响较大 4.止血带的使用 13标本因素对检验质量的影响标本的采集 5.正确使用添加剂 6.采集标本的顺序：通常血常规的管子是最后采集的 排除EDTAK2对生化检查的污染 7.充分混匀 8.避免溶血 14标本因素对检验质量的影响标本的运送 尽早送检，特殊样本还需冰浴，不能及时检测应妥善保存标本的保存 不同的检测项目采用不同的保存条件 大多项目在4 可保存三天，20 可保存1个月，80 或液氮可保存3个月以上，甚至长期保存标本的及时分离和检测 15分析中的质量控制 方法的选择 标准操作规程的的制定和执行室内质控室间质评 16分析后的质量控制 分析后的质量管理是检验全面质量管理的最终环节，是检验结果转化为临床诊疗信息的过程数据的处理：制式的改变，图形的处理等 检验结果的审核：复查、危急值的处理等报告单的发放：应注意疫情、患者的隐私临床咨询、报告解释和抱怨处理等，持续改进的输入 17实验诊断的临床应用和评价正确选择实验室检查项目 1.满足临床诊断、治疗和预防的需求（筛选、诊断、鉴别诊断、特异性、敏感性）2.符合询证医学和实验项目优化组合的要求 3.减轻患者的负担和痛苦 4.必须在详细询问病史、全面的体格检查的基础上18实验诊断的临床应用和评价诊断性实验的评价指标（如定性和细菌培养等）金标准 疾病 非疾病 a（真阳性）b（假阳性）a+b 诊断性实验 c（假阴性）d（真阴性）c+d 总数 a+c=n1 b+d=n2 n1.1.敏感度或者真阳性率：金标准诊断为有病的人中，诊断性试验阳性者的比例：敏感度或者真阳性率：金标准诊断为有病的人中，诊断性试验阳性者的比例：a/(a+c)a/(a+c)2.2.特异度或者真阴性率：金标准诊断为无病的人中，诊断性试验阴性者的比例：特异度或者真阴性率：金标准诊断为无病的人中，诊断性试验阴性者的比例：d/(b+d)d/(b+d)3.3.阳性预测值：诊断性试验阳性者中有病者所占的比例，即患者诊断性试验阳性，其患阳性预测值：诊断性试验阳性者中有病者所占的比例，即患者诊断性试验阳性，其患病病 的可能性。的可能性。a/(a+b)a/(a+b)4.4.阴性预测值：诊断性试验阴性者中，无病者所占的比例，即诊断性试验为阴性时，不阴性预测值：诊断性试验阴性者中，无病者所占的比例，即诊断性试验为阴性时，不患患 病的可能性。病的可能性。d/(d+c)d/(d+c)19实验诊断的临床应用和评价常用诊断性实验的评价指标 1.诊断灵敏度 指某检验项目对某种疾病具有鉴别、确认的能力，为所有病人中获得真阳性结果的百分数。2.诊断特异性 指某检验项目确认无某种疾病的能力，为非病人中 获得真阴性结果的百分数 20实验诊断的临床应用和评价常用诊断性实验的评价指标 3.诊断准确度 指某检验项目在实际使用中，所有检验结果中诊断 准确结果的百分比。4.使用检验项目临床性能评价的ROC曲线寻找最佳判 断限界及其诊断灵敏度和特异性 21实验诊断的临床应用和评价ROC曲线的临床应用 ROC为“信号接受特性图”（receiving operating charateristics)，是最常用有效的对检验项目临床性能评价的定量资料进行归纳分析的统计学方法。1.病人和非病人的定量数据以分布图形式表示 2.所有数据列表以不同的的限值为判断限，计算各组数据的真阳性率 和假阳性率。3.假阳性率为横坐标、真阳性率为纵坐标，将数据点于图上并连接各 点，绘制ROC曲线。4.常用于两种以上诊断性检验的诊断价值比较和寻找界点。22实验诊断的参考值范围与医学决定水平参考范围 参考值：是指在特定条件下（健康人群）抽样的个体进行某项目检 测所测得的值 参考范围：95%抽样所测值的平均值（x）加减其标准差（s）而构 成，影响因素多，应建立自己的参考值，或进行验证 医学决定水平 指不同于参考值的另一些限值，通过观察测定值是否高于或者低于这些限值，可在疾病诊断中起排除或确认的作用 危急值：是指某些结果出现异常，超过这一界定值可危及患者生 命，医生必须 紧急处理（报告）23实验诊断学的学习重点和方法以常见病为基础，以重点器官为中心，重点抓住反映他们的实验诊断项目学习以检验项目为中心，深入联系理论基础、广泛联系临床疾病（原理、机制、临床意义和一些重要的概念）24临床免疫学测定 前言生活水平提高改变生活方式两大新兴产业：保健（提高免疫力）和美容如何评判免疫力：太低感染、肿瘤 太高自身免疫性疾病 最主要的因素：机体的免疫系统怎样从实验室的角度来衡量？25临床常用免疫学和病原学检查 福建医科大学附属协和医院26 随着现代免疫学理论和技术的飞速发展，临床免疫学的检测项目也日趋增多。某些检测项目可为临床诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断提供特异的和敏感的信息，以下就一些常用的免疫学检查作一些介绍。27第一节 体液免疫检查一、免疫球蛋白的检测一、免疫球蛋白的检测（一）概念：免疫球蛋白是指具有抗体活性和/或抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。按其重链性质分为IgG、A、M、D和E五大类，在血清中IgG、A、M的含量为g/L水平，而IgD、IgE和血清以外的IgG、A、M仅为mg/L，因此不同类的免疫球蛋白需要选择不同敏感度的方法。（二）常用的检测方法（二）常用的检测方法 1 1单向琼脂单向琼脂扩散法扩散法：2 2免疫免疫比浊法比浊法：3 3酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISAELISA法法）：）：28（三）免疫球蛋白的分类1.1.IgG:IgG:为为人体中含量最多和最主要的免疫球蛋白，占人体中含量最多和最主要的免疫球蛋白，占总总免疫球蛋白的免疫球蛋白的70708080，属再次免疫，属再次免疫应应答抗体；也是答抗体；也是唯一能通唯一能通过过胎胎盘盘的的IgIg，新生儿可被，新生儿可被动获动获得免疫。得免疫。2.2.IgA:IgA:分分为为血清型和分泌型。分泌型的血清型和分泌型。分泌型的IgAIgA（S IgAS IgA）由）由呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴样组织样组织合成，参合成，参与与这这些部位的些部位的局部免疫局部免疫。3.3.IgMIgM：初次免疫：初次免疫应应答反答反应应中的中的IgIg，最早出，最早出现现的抗体，的抗体，也是分子量最大的也是分子量最大的IgIg。29（三）免疫球蛋白的分类4.4.IgEIgE：是血清中含量最少的一种：是血清中含量最少的一种IgIg，与，与变态变态反反应应、寄生、寄生虫感染及皮肤虫感染及皮肤过过敏等有关。敏等有关。5.5.IgD IgD：妊娠末期和吸烟者含量升高：妊娠末期和吸烟者含量升高6.M6.M蛋白：或称蛋白：或称单单克隆免疫球蛋白，是一种克隆免疫球蛋白，是一种单单克隆克隆B B细细 胞增殖胞增殖产产生的具有相同生的具有相同结结构和构和电电泳迁移率的免疫球蛋泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片断，白分子及其分子片断，见见于于多多发发性骨髓瘤、巨球蛋白性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重血症、重链链病和病和轻链轻链病等病等30（三）、检测的临床意义（三）、检测的临床意义 1低Ig血症 （1）先天性低Ig血症 见于体液免疫缺陷和联合免疫缺陷。如先 天 性无丙种球蛋白血症，IgG1g/L，A和M仅为正常值的 1%。先天性IgA缺乏症患者容易反复呼吸道感染、IgG缺乏 易患化脓性感染，而IgM缺乏易引起革兰氏阴性杆菌败血症 （2）获得性低Ig血症 淋巴肉瘤、肾病综合征、中毒性骨髓瘤等 可造成血清中Ig明显降低。2高Ig血症 （1）非特异性多株峰免疫球蛋白增高症 慢性细菌感染、结核、慢性支气管炎、风湿时IgG升高，急性感染早期可IgM升高，自身免疫性疾病、胶原病、类风湿、关节炎、SLE可见IgG、A、M升高，肝病和肝硬化时可呈现IgG、A升高。（2）特异性单株峰免疫球蛋白增高症(巨球蛋白血症IgM升高）31 3 3IgD IgD 妊娠末期和吸烟者含量升高。妊娠末期和吸烟者含量升高。IgDIgD骨髓瘤骨髓瘤 患者血清患者血清IgDIgD水平比正常人高水平比正常人高1000010000倍，是唯倍，是唯 一明确可作为确诊的证据。一明确可作为确诊的证据。4 4血清总血清总IgE IgE 对特异性疾病的诊断、治疗和探对特异性疾病的诊断、治疗和探 索发病机制有重要意义。寄生虫感染时索发病机制有重要意义。寄生虫感染时IgEIgE升升 高。特异性哮喘、过敏性鼻炎等患者血清中高。特异性哮喘、过敏性鼻炎等患者血清中 IgE IgE含量升高与发病和缓解呈平行关系。含量升高与发病和缓解呈平行关系。32二、二、补补体的体的检测检测（一）概念：（一）概念：补补体是人或体是人或动动物血清中的一物血清中的一组组具有具有酶酶活性活性 的蛋白的蛋白质质，在机体免疫系，在机体免疫系统统中中发挥发挥抗感染和免疫抗感染和免疫 调节调节的作用，也参与免疫病理反的作用，也参与免疫病理反应应。33（二）常用的（二）常用的检测检测方法和方法和临临床意床意义义 1 1血清血清总补总补体溶血活性（体溶血活性（CH50CH50）测测定：定：主要反主要反应补应补体体经经典激活途径的溶血功能，其典激活途径的溶血功能，其结结果与果与 C1-C9 C1-C9各各组组分的量和活性均有关，但并非完全相关，一分的量和活性均有关，但并非完全相关，一 般以般以5050溶血作溶血作为检测终为检测终点，因此又称点，因此又称为为CH50CH50。此方。此方 法不能法不能测测定定补补体蛋白的体蛋白的绝对值绝对值，也不能，也不能测测定定备备解素系解素系 统统中的成分。中的成分。临临床意床意义义：CH50 CH50增高增高见见于急性于急性肾肾炎、炎、组织损伤组织损伤、恶恶性性肿肿瘤瘤 等；而降低等；而降低见见于急性于急性肾肾小球小球肾肾炎、炎、SLESLE活活动动期、期、类风类风 关、关、亚亚急性急性细细菌性心内膜炎、菌性心内膜炎、严严重肝病尤其是肝坏死重肝病尤其是肝坏死 CH50 CH50降低甚至降低甚至测测不出来，有助于判断肝受不出来，有助于判断肝受损损的程度。的程度。342补体成分C3、C4的测定 C3 C3、C4C4是是补补体体级联级联反反应应的关的关键键成分，其中成分，其中C3C3是是补补体系体系统统中含量最高的中含量最高的 （1 1）C3C3、C4C4的含量的含量测测定：定：单单向向琼琼脂脂扩扩散法和免疫比散法和免疫比浊浊法法 （2 2）C3C3、C4C4的活性的活性测测定：免疫溶血法定：免疫溶血法 （3 3）临临床意床意义义：补体 C3、C4 减低常见于：补体合成能力下降：慢性活动性肝炎、肝硬化、肝坏死等；消耗或丢失过多：大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、狼疮性肾炎患者，还见于大面积烧伤、活动性SLE和类风湿关节炎活动期等；合成原料不足，如儿童营养不良性疾病；先天性补体缺乏。35第二节 细胞免疫检查 人体的淋巴细胞分为T、B和NK等细胞群，它们又可以分为若干个亚群，各有其特异的表面标志和功能。临床上各种免疫疾病均可出现不同群淋巴细胞数量和功能上的变化，对它们进行检测可以判断细胞免疫功能。36一、T淋巴细胞的检测（一）数量的检测：1花环形成实验 2T细胞分化抗原测定：CD3 CD3：总总T T细细胞；胞；CD4 CD4：辅辅助性助性T T细细胞胞 CD8 CD8：抑制性：抑制性T T细细胞胞 检测检测方法：方法：免疫免疫荧荧光法光法和流式和流式细细胞胞检测检测法法（二）功能的检测：淋巴细胞转化试验 1 形态学方法 23H-TdR掺入法37（三）（三）临临床意床意义义 1 1降低：降低：见见于免疫缺陷性疾病，如于免疫缺陷性疾病，如恶恶性性肿肿瘤、免疫瘤、免疫 性疾病、某些病毒感染、大面性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤积烧伤等。等。2 2升高：升高：见见于甲亢、甲炎、重症肌无力、慢活肝、于甲亢、甲炎、重症肌无力、慢活肝、SLE SLE活活动动期和器官移植排斥反期和器官移植排斥反应应等。等。3 3CD3CD3降低：降低：见见于自身免疫性疾病如于自身免疫性疾病如SLESLE、类风类风湿湿 关关节节炎等；炎等；CD4 CD4降低：降低：见见于于恶恶性性肿肿瘤、瘤、爱爱滋病、滋病、遗传遗传性免疫性免疫 缺陷症、缺陷症、应应用免疫抑制用免疫抑制剂剂等。等。CD4/CD8CD4/CD8减低常减低常见见于于爱爱滋病，而在器官移植滋病，而在器官移植时时 CD4/CD8 CD4/CD8增高增高预预示可能示可能发发生排斥反生排斥反应应。38二、二、B B淋巴淋巴细细胞的胞的检测检测（一）数量的（一）数量的检测检测 1 1B B细细胞膜表面免疫球蛋白胞膜表面免疫球蛋白测测定：定：免疫免疫荧荧光法和光法和 (SmIg)(SmIg)流式流式细细胞胞检测检测法法 2 2B B细细胞分化抗原胞分化抗原检测检测：CD19/20/22CD19/20/22（二）功能的（二）功能的检测检测 1 1溶血空斑溶血空斑试验试验 2 2抗体的抗体的检测检测（三）（三）临临床意床意义义 1 1降低降低见见于各种原于各种原发发性和性和继发继发性免疫缺陷病性免疫缺陷病 2 2升高升高见见于淋巴增殖性疾病如慢粒和多毛于淋巴增殖性疾病如慢粒和多毛细细 胞白血病等。胞白血病等。39三、自然杀伤（三、自然杀伤（NKNK）细胞免疫检测）细胞免疫检测 NKNK细胞是一种异质性、多功能的细胞是一种异质性、多功能的T T细胞亚群，细胞亚群，NKNK细胞细胞介导天然免疫应答，并不依赖抗体和补体，是人体抵介导天然免疫应答，并不依赖抗体和补体，是人体抵御外来侵略的第一道防线。御外来侵略的第一道防线。NK NK细胞的测定包括活性测定和抗体依赖性细胞介导的细胞的测定包括活性测定和抗体依赖性细胞介导的细胞毒测定细胞毒测定 NK NK细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一，减低见于肿瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些标之一，减低见于肿瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染；病毒感染；增高见于宿主抗移植物反应。增高见于宿主抗移植物反应。40四、四、细细胞因子胞因子检测检测 细胞因子是一类由免疫细胞和相关细胞产生的具有调节细胞功能的高活性、多功能和低分子的分泌性蛋白质，细胞因子的检测是判断机体免疫功能的一个重要指标。1.IL-2：由活化T细胞产生，是具有多向性作用的细胞因子，在机体的免疫应答和抗病毒感染中起重要作用。2.TNF：分为TNF和TNF 两型，前者来源于单核细胞和吞噬细胞，后者来源于T淋巴细胞。两型的结构虽然不同，但生物活性类似，都具有引起肿瘤组织出血、坏死和杀伤作用，都可引起抗感染的炎症反应效应，并对免疫细胞具有调节诱生作用。3.IFN-：具有抗病毒、抗肿瘤、控制细胞增殖和免疫调节作用，增高见于SLE、急性病毒感染、非活动性类风湿性关节炎；减低见于乙肝及携带者、活动性类风湿性关节炎。41第三节 感染免疫检测 病原体（细菌、病毒、立克次体、寄生虫病原体（细菌、病毒、立克次体、寄生虫等）及其代谢产物刺激人体免疫系统，产生相等）及其代谢产物刺激人体免疫系统，产生相应的免疫产物，后者进入血液或其他体液当中，应的免疫产物，后者进入血液或其他体液当中，这些产物可利用凝集试验、补体结合试验、这些产物可利用凝集试验、补体结合试验、ELISAELISA、免疫荧光和放射免疫法等免疫学手段、免疫荧光和放射免疫法等免疫学手段进行检测，从而辅助疾病的诊断和判断机体的进行检测，从而辅助疾病的诊断和判断机体的免疫状态。免疫状态。42一、肝炎标志物的检测：1 1甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒标标志物的志物的检测检测 （1 1）甲型肝炎病毒抗原和）甲型肝炎病毒抗原和RNARNA测测定：定：ELISAELISA和和RT-PCRRT-PCR法法 （2 2）甲型肝炎病毒抗体）甲型肝炎病毒抗体测测定：定：ELISAELISA （3 3）甲型肝炎病毒抗体）甲型肝炎病毒抗体IgMIgM阳性表明机体阳性表明机体 正在感染甲肝，它是早期正在感染甲肝，它是早期诊诊断甲肝的断甲肝的 特异性指特异性指标标。而。而IgGIgG阳性提示既望感阳性提示既望感 染，可作染，可作为为流行病学流行病学调查调查的指的指标标。432乙型肝炎病毒标志物的检测（1 1）乙肝两）乙肝两对对半的半的检查检查：ELISAELISA （2 2）乙肝病毒）乙肝病毒DNADNA的的测测定：定：PCRPCR法和斑法和斑 点点杂杂交交试验试验 （3 3）临临床意床意义义：乙肝两：乙肝两对对半的半的检测检测反反应应 机体机体对对乙肝病毒的免疫乙肝病毒的免疫 状状态态，而乙肝病毒，而乙肝病毒DNADNA 是是诊诊断乙型肝炎的佐断乙型肝炎的佐证证。44 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 1 1 +-+-携携带带者者 2 2 +-+-+-+-急性感染早期急性感染早期,HBV,HBV复制活复制活跃跃 3 3 +-+-+-+-+急性或慢性感染急性或慢性感染,复制活复制活跃跃 4 4 +-+-+急性或慢性感染急性或慢性感染,复制减弱或停止复制减弱或停止 5 5 -+-+既往感染既往感染,未出未出现现表抗表抗,窗口期窗口期 6 6 -+-+既往感染既往感染,未出未出现现表抗表抗,窗口期窗口期 7 7 -+-+-+-+恢复期恢复期 8 8 -+-+-+-+恢复期恢复期 9 9 -+-+-病后或接种疫苗后病后或接种疫苗后获获得性免疫得性免疫 10 10 +-+-+不同不同亚亚型的感染型的感染453丙型肝炎病毒标志物的检测 （1 1）丙型肝炎病毒）丙型肝炎病毒RNARNA测测定：斑点定：斑点杂杂交法和交法和 RT-PCR RT-PCR法法 （2 2）丙型肝炎病毒抗体）丙型肝炎病毒抗体测测定：定：ELISAELISA和和RIARIA法法 （3 3）急性丙肝患者，）急性丙肝患者，发发病后病后1-41-4周丙型肝炎病周丙型肝炎病 毒抗体毒抗体IgMIgM即可阳性，可持即可阳性，可持续续1-41-4周。周。6 6个个 月痊愈者，抗月痊愈者，抗-HCVIgM-HCVIgM转转阴，反之将阴，反之将转转 为为慢性丙型肝炎；慢性丙型肝炎；而而IgGIgG阳性表明已有阳性表明已有 HCV HCV感染，感染，输输血后肝炎有血后肝炎有80%-90%80%-90%患者患者 抗抗-HCVIgG-HCVIgG阳性。阳性。464丁型肝炎病毒标志物的检测(缺陷RNA病毒）（1）丁型肝炎病毒抗原和RNA测定：ELISA和RT-PCR法 （2）丁型肝炎病毒抗体测定：ELISA （3）抗-HDVIgG只能在HBsAg阳性的血清中检测 到，是诊断丁型肝炎的可靠指标，抗-HDV IgM出现较早，可用于早期诊断。5戊型肝炎病毒标志物的检测：ELISA检测抗体6庚型肝炎病毒标志物的检测：ELISA检测抗体，也多见于输血后感染47小结肝炎病毒的检测方法:1.1.抗原的检测:ELISA法或免疫荧光法2.2.抗体的检测:ELISA法或免疫荧光法3.3.基因的检测:DNA病毒用PCR法 RNA病毒用RT-PCR法48二、细菌感染的免疫检测 （一）血清抗链球菌溶血素（一）血清抗链球菌溶血素“O”O”试验试验 溶血素溶血素“O”O”是一种是一种A A群溶血性链球菌的毒群溶血性链球菌的毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和血素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和血小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素“O”O”，也叫抗，也叫抗OO或或 ASO ASO。一般。一般当机体受到当机体受到A A群溶血性链球菌感染群溶血性链球菌感染2-32-3周，周，血清血清中出现抗中出现抗OO，这种抗体滴度直至病愈后数月到半，这种抗体滴度直至病愈后数月到半年才下降至正常水平。年才下降至正常水平。检测方法：检测方法：胶乳凝集法和胶乳凝集法和ELISAELISA49 临临床意床意义义：1.1.抗抗O O升高（滴度大于升高（滴度大于1 1：400400）表示近期内有）表示近期内有A A群溶血性群溶血性链链球菌感染，球菌感染，常常见见于活于活动动性性风风湿湿热热、风风湿性心湿性心脏脏病、病、风风湿性关湿性关节节炎炎、急性、急性肾肾小球小球肾肾炎、急性上感、皮肤和炎、急性上感、皮肤和软组织软组织感染等。感染等。2.2.抗体有高滴度逐抗体有高滴度逐渐渐下降下降时时，可，可认为认为疾疾 病病缓缓解，解，抗体恒定在高水平抗体恒定在高水平时时，多，多为为活活动动期。期。50（二）伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定 人体被伤寒沙门菌感染后，该菌体人体被伤寒沙门菌感染后，该菌体“O”O”抗原抗原和鞭毛和鞭毛“H”H”抗原，刺激人体产生相应抗体。抗原，刺激人体产生相应抗体。副伤寒分为甲（副伤寒分为甲（A A）乙（）乙（B B）丙（）丙（C C）三型，它）三型，它们均有各自的菌体抗原和鞭毛抗原，这些抗原们均有各自的菌体抗原和鞭毛抗原，这些抗原也可在人体内刺激机体产生各自相应的抗体。也可在人体内刺激机体产生各自相应的抗体。511 1肥达氏反肥达氏反应应（Widal reactionWidal reaction，WRWR）WR WR是利用是利用伤伤寒和副寒和副伤伤寒沙寒沙门门菌液菌液为为抗原，抗原，检测检测病人血病人血清中有无相清中有无相应应抗体的一种凝集抗体的一种凝集试验试验。参考参考值值 :直接凝集法直接凝集法 伤伤寒寒WR“H”WR“H”低于低于1 1：160160；“O”O”低低 于于1 1：8080。副。副伤伤寒寒WR WR 甲（甲（A A）乙）乙 （B B）丙（）丙（C C）都低于）都低于1 1：8080。临临床意床意义义：WRWR阳性一般出阳性一般出现现在在伤伤寒寒发发病后一周，阳性病后一周，阳性率率10%10%；第二周上升；第二周上升为为60-70%60-70%；第四周可达；第四周可达90%90%以上。以上。单单份血清抗体效价份血清抗体效价“O”O”大于大于1 1：8080及及“H”H”大于大于1 1：160160者有者有诊诊断意断意义义；若；若动态观动态观察，察，WRWR持持续续超超过过参考参考值值或或较较原效原效价升高价升高4 4倍以上者更有价倍以上者更有价值值。522 2伤伤寒和副寒和副伤伤寒沙寒沙门门菌抗体菌抗体IgMIgM测测定定 参考参考值值:ELISAELISA法正常人法正常人为为阴性或滴度阴性或滴度1 1：2020 临临床意床意义义：发发病后一周即可出病后一周即可出现现升高，有早期升高，有早期诊诊断价断价 值值若其滴度若其滴度1 1：2020对诊对诊断断伤伤寒寒带带菌者也菌者也 有意有意义义。本。本测测定的敏感性和特异性均定的敏感性和特异性均优优于于 肥达氏反肥达氏反应应。3 3伤伤寒和副寒和副伤伤寒沙寒沙门门菌可溶性抗原菌可溶性抗原测测定定 伤伤寒沙寒沙门门菌在体菌在体 内繁殖、破裂，内繁殖、破裂，患者血及尿液内出患者血及尿液内出现伤现伤寒沙寒沙门门菌抗菌抗 原。用相原。用相应应的抗血清致敏胶乳，与患者血及尿液中的抗血清致敏胶乳，与患者血及尿液中伤伤 寒沙寒沙门门菌可溶性抗原反菌可溶性抗原反应应，可，可产产生凝集。生凝集。参考参考值值 ：胶乳凝集法胶乳凝集法为为阴性阴性 临临床意床意义义：阳性：阳性对对确确诊诊沙沙门门菌感染更有重要意菌感染更有重要意义义53三、其他病毒感染免疫检测（一）巨（一）巨细细胞病毒的胞病毒的检测检测：巨：巨细细胞病毒是一种疱疹病毒，胞病毒是一种疱疹病毒，核酸呈双核酸呈双链链DNADNA，由于它能使感染的，由于它能使感染的细细胞胞变变大，故称大，故称巨巨细细胞病毒。胞病毒。1 1检测检测方法方法 抗体：抗体：IFAIFA（免疫（免疫荧荧光法）和光法）和ELISAELISA DNA DNA：分子：分子杂杂交或交或PCRPCR法法2 2临临床意床意义义 IgMIgM阳性提示阳性提示现现症感染或症感染或处处于病毒活于病毒活动动期；期；IgGIgG阳性阳性则则提示既往感染或潜伏感染，人群中有提示既往感染或潜伏感染，人群中有90%90%以以上可呈阳性反上可呈阳性反应应；若双份血清效价有；若双份血清效价有4 4倍以上增倍以上增长则长则提提示近期有感染活示近期有感染活动动，DNADNA阳性提示阳性提示现现症感染。先天性症感染。先天性感染一般由母感染一般由母婴婴通通过过胎胎盘盘或或产产道感染，后天性道感染，后天性则则主要主要通通过过接触接触传传播。巨播。巨细细胞病毒的胞病毒的检测检测一般一般对对孕孕妇妇或新生或新生儿比儿比较较有意有意义义。因。因为为巨巨细细胞病毒感染易胞病毒感染易导导致流致流产产、畸、畸胎和死胎，胎和死胎，对婴对婴幼儿来幼儿来说说易易导导致致发发育不良或弱智。育不良或弱智。54（二）柯萨奇病毒的检测：柯柯萨萨奇病毒是一种奇病毒是一种单链单链的小的小RNARNA病毒，可分病毒，可分为为A A、B B两两群，群，A A群又有群又有2424个血清型，个血清型，B B群群则则有有6 6个血清型。个血清型。1 1检测检测方法方法 抗体：抗体：间间接血凝法、接血凝法、IFAIFA法或法或ELISAELISA法法 RNA RNA：用：用RT-PCRRT-PCR法法 2 2临临床意床意义义 IgMIgM阳性提示阳性提示现现症感染，症感染，IgGIgG则为则为既往感既往感染，染，RNARNA阳性阳性对对柯柯萨萨奇病毒感染的奇病毒感染的诊诊断更有意断更有意义义，也提，也提示示现现症感染。症感染。A A群主要引起无菌性群主要引起无菌性脑脑膜炎、新生儿肺炎、膜炎、新生儿肺炎、皮疹和普通的感冒；皮疹和普通的感冒；B B群群则则主要引起心肌炎、无菌性主要引起心肌炎、无菌性脑脑膜膜炎、上感和成人的肺炎。炎、上感和成人的肺炎。55（三）轮状病毒的检测：轮状病毒属胃肠病毒科，是双链RNA病毒，是引起人病毒性胃肠炎最常见的病原体，婴幼儿腹泻50%是由轮状病毒所致。检测的方法基本和柯萨奇病毒相似，这里就不再祥述了。56四、寄生虫感染免疫的检测 弓形虫的检测：弓形虫感染为人畜共患疾病，可引起中枢神经系统、眼的疾病，也可以引起流产、先天畸形等。1检测方法 抗体：间接血凝法、IFA法或 ELISA法 DNA：用PCR法 2临床意义 IgM阳性是近期感染的指标，IgG则提示既往感染，双份血清抗体滴度4倍以上增高或单份抗体滴度大于1：512时，提示近期感染可能性大。DNA阳性对弓形虫病的诊断有重要意义。57五、性传播疾病免疫检测五、性传播疾病免疫检测 （）人（）人类获类获得性免疫缺陷病毒抗体及得性免疫缺陷病毒抗体及RNARNA测测定定 人人类类获获得性免疫缺陷病毒是得性免疫缺陷病毒是爱爱滋病（滋病（AIDSAIDS）的病原体，它）的病原体，它是一种逆是一种逆转录转录病毒，是一种病毒，是一种单链单链RNARNA病毒，可分病毒，可分为为HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2型，当机体感染型，当机体感染HIVHIV数周到半年后数周到半年后绝绝大多大多数患者体内可出数患者体内可出现现抗抗HIVHIV抗体。抗体。参考参考值值：（1 1）筛选试验筛选试验：ELISAELISA法和快速蛋白印迹法法和快速蛋白印迹法 均均为为阴性阴性 （2 2）确）确认试验认试验：蛋白印迹：蛋白印迹试验试验和和RT-PCRRT-PCR检检 HIV-RNA HIV-RNA均均为为阴性阴性 临临床意床意义义：筛选试验筛选试验敏感性高，但特异性不高，故有敏感性高，但特异性不高，故有假阳性，所以假阳性，所以筛选试验筛选试验阳性阳性时时需用确需用确诊试验证实诊试验证实。确。确诊诊试验试验阳性，特阳性，特别别是是RT-PCRRT-PCR法法检测检测HIV-RNAHIV-RNA阳性，阳性，对对肯肯定定诊诊断和早期断和早期诊诊断断颇颇有价有价值值。58（二）梅毒螺旋体抗体检测 人体感染梅毒螺旋体后，血清中可出人体感染梅毒螺旋体后，血清中可出现现特异性抗体特异性抗体（针对针对密螺旋体抗原），密螺旋体抗原），还还出出现现非特异性抗体（反非特异性抗体（反应应素）（素）（针对类针对类脂抗原）脂抗原）1 1初初筛试验筛试验 即即检测检测非特异性抗体（反非特异性抗体（反应应素）的素）的试验试验 （1 1）检测检测方法：快速血方法：快速血浆浆反反应应素素试验试验（RPRRPR）不加不加热热血清反血清反应应素素试验试验（USRUSR）美国性病研究美国性病研究实验实验室室实验实验（VDRLVDRL）（2 2）临临床意床意义义 初初筛试验筛试验适用于梅毒的适用于梅毒的筛选筛选。这这些些试验试验一般在感染梅毒螺旋体后一般在感染梅毒螺旋体后1-21-2周周为为7676，二期梅毒，二期梅毒为为95-95-100%100%，晚期梅毒，晚期梅毒为为70-95%70-95%，隐隐性感染期性感染期为为70-80%70-80%，但，但定性定性试验试验易出易出现现假阳性反假阳性反应应，见见于于SLESLE、疟疟疾、疾、结结核、核、瘤型麻瘤型麻风风病等。初病等。初筛实验筛实验可可定量，用于定量，用于疗疗效效观观察察。592 2确确认试验认试验 即即检测检测梅毒螺旋体的特异性抗体的梅毒螺旋体的特异性抗体的试验试验（1 1）检测检测方法：方法：梅毒螺旋体血凝梅毒螺旋体血凝试验试验（TPHATPHA）荧荧光螺旋体抗体吸收光螺旋体抗体吸收试验试验（FTA-ABSFTA-ABS）（2 2）临临床意床意义义 筛选试验筛选试验阳性的情况下必阳性的情况下必须须做确做确认试验认试验，阳性可肯定梅毒的，阳性可肯定梅毒的诊诊断。确断。确认认试验试验灵灵敏度高，特异性敏度高，特异性强强，不受，不受药药物治物治疗疗的影响，特的影响，特异性抗体可持异性抗体可持续续数年甚至数年甚至终终身。不能用于身。不能用于疗疗效效观观察。察。60六、TORCH感染免疫检测TORCHTORCH是指一是指一组组病原微生物的英文名称病原微生物的英文名称缩缩写。写。T T即即刚刚地弓形虫或弓形虫地弓形虫或弓形虫 (toxoplasma gondii)(toxoplasma gondii)，O O即其它病原即其它病原微生物微生物 (others)(others)，R R即即风风疹病毒疹病毒(rubella virus)(rubella virus)，C C即巨即巨细细胞病毒胞病毒(cytomegalovirus)(cytomegalovirus)，H H即即单纯单纯疱疹病毒疱疹病毒 (herpes(herpes simplex virus)simplex virus)。这组这组病原体常可通病原体常可通过过胎胎盘传给盘传给胎儿，引胎儿，引起起围围生期感染，生期感染，导导致流致流产产、死胎、早、死胎、早产产、先天畸形和、先天畸形和智力障碍等各种异常智力障碍等各种异常结结果，因此受到广泛关注。果，因此受到广泛关注。TORCHTORCH感染的抗体感染的抗体检查检查在在许许多地区已作多地区已作为为孕期孕期检查检查的的常常规项规项目。目。61风疹病毒抗体测定风疹病毒(rubella virus)直径为60nm，具单股RNA。是儿童风疹的 病原体，一般症状较轻。但孕妇若在妊娠头3个月内感染风疹病 毒，易引起胎儿畸形，因此，对早孕妇女进行风疹病毒特异性 IgM、IgG抗体监测有重要意义。参考值 ELISA：阴性 RT-PCR法：阴性 临床意义 风疹病毒易感人群为1一5岁的儿童及孕妇，据统计，孕妇在怀孕 1一6周时感染风疹者约50%可致流产、死胎、早产；若胎儿存活 出生，也可能发生先天性风疹综合征，表现为先天性白内障，先 天性心脏病，神经性耳聋，小头崎形和智力障碍等。风疹病毒 IgM抗体阳性，提示有近期感染，必要时应终止妊娠。风疹病毒 IgG抗体阳性，表示机体已受过风疹病毒感染，具有免疫力。62单纯疱疹病毒抗体测定单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)为双链DNA，根据限制 性内切酶切点不同，分HSV-I和HSV-II二型。HSV原发感染后，机体最先出现IgM，随后出现IgA及IgG，抗体能防止病毒播散，但不能阻止复发。临床上常用间接血凝试验和ELISA等进行辅助 诊断。检出特异性IgM阳性或双份血清特异性IgG抗体效价上升4 倍或4倍以上，可提示HSV近期感染。参考值 间接血凝试验，ELISA：阴性 临床意义 HSV主要引起疱疹性口腔炎，疱疹性角膜结膜炎，疱 疹性脑膜炎，疱疹性外阴阴道炎，湿疹性疱疹，新生儿疱疹等。生殖器官以外部位的HSV感染多由 HSV-I型引起(占95%)，而生殖 器官的HSV感染主要由HSV-II型引起(占78%)。IgM抗体阳性提示 近期有HSV感染。孕早期感染HSV者可导致流产，妊娠中、晚期 感染者，可引起胎儿和新生儿发病。63七、其他免疫检测 C C反反应应蛋