支气管哮喘患儿气道微生态与血清免疫因子相关.pdf

年 月第 卷 第 期基础医学与临床 收稿日期：修回日期：基金项目：年成都市医学科研课题基金（）通信作者（）：文章编号：（）临床研究支气管哮喘患儿气道微生态与血清免疫因子相关贺 雷，颜 凯，邓迎霞成都市双流区妇幼保健院 儿科，四川 成都 摘要：目的 探究支气管哮喘不同时期患儿气道微生态与血清免疫因子的相关性。方法 选取 年 月至 年 月进入成都市双流区妇幼保健院进行治疗的 例支气管哮喘患儿，其中包括 例缓解期和 例急性发作期，另选取同期进行体检的 名健康小儿作为健康组。对 组小儿采用 高通量测序平台进行诱导痰 基因高通量测序，采用酶联免疫吸附法检测 组小儿的、和 水平。结果 支气管哮喘患儿 指数与、呈负相关（），指数与、呈正相关（）；支气管哮喘患儿 指数与、呈正相关（），指数与、呈负相关（）。结论 支气管哮喘患儿气道微生态存在明显失调，指数、指数与、及 密切相关。关键词：支气管哮喘；指数；指数中图分类号：；文献标志码：，：，（），（）；（）（）基础医学与临床 （）：；支气管哮喘是临床比较常见的疾病，是由多种细胞及细胞组分参与的以气道慢性炎性反应为主要特征的一种异质性疾病，发病人群以儿童为主，临床表现为气急、喘息、咳嗽或胸闷。支气管哮喘急性发作是支气管哮喘患者病情恶化的常见原因，可导致患者残疾或死亡，哮喘急性发作主要是由天气变化、运动、食物药物、运动、呼吸道细菌及病毒感染等诱发，患者常需入院治疗或急诊治疗，有时可能需要使用糖皮质激素来缓解症状。中国目前支气管哮喘患儿的总体控制水平不是很理想，一方面是由于临床医生管理不够规范和家长对支气管哮喘认识不足，另一方面支气管哮喘属于一种异质性疾病，发病机制依然还未明确。随着 基因高通量测序的发展，人们逐渐发现气道微生态在疾病发展中的作用，气道菌群与机体免疫有一定关系。目前临床上有关支气管哮喘患儿诱导痰 基因高通量测序的研究较少，支气管哮喘患儿诱导痰 基因高通量测序与血清免疫因子关系的研究未见报道。本研究主要探讨支气管哮喘不同时期患儿诱导痰 基因高通量测序与血清免疫因子的相关性，以期可以为气管哮喘患儿的管理与治疗提供参考。材料与方法 材料 病例：选取 年 月至 年 月进入成都市双流区妇幼保健院进行治疗的 例支气管哮喘患儿，其中包括 例缓解期和 例急性发作期，另选取同期进行体检的 名健康小儿作为健康组。纳入标准：缓解组和急性发作组符合支气管哮喘的相关诊断标准；年龄 岁；支气管哮喘患儿就诊前 周内未进行激素类、支气管扩张剂或免疫调节剂治疗；家属知情同意本研究并已签字。排除标准：心肝肾等脏器功能障碍；肺、支气管发育异常；自身免疫性疾病；过敏性疾病。本研究已经过成都市双流区妇幼保健院伦理委员会审核批准成医伦审（）年第（）号。试剂：无菌拭子（深圳市华瑞康生物科技邮箱公司）；扩增试剂盒（上海一研生物科技有限公司）；白介素（，）检测试剂盒、白 介 素（，）检 测 试 剂盒、白介素（，）检测试剂盒和 干 扰 素（，）检 测 试 剂 盒（公司）。方法 痰诱导标本的收集：诱导痰标本：）痰液诱导：雾化吸入 的高渗 溶液，雾化吸入间隔，次，共 。在塑料清洁容器内咳吐痰并收集痰液标本。）评估痰液标本：将痰液进行涂片染色，置于 倍光学显微镜下进行观察，细胞计数 个有核细胞，鳞状上皮细胞的为合格痰，不合格的痰液标本丢弃。）处理痰液标本：将痰液标本放入离心管内，将 的二硫代苏糖醇浓缩溶液从小瓶中用无菌针头及注射器取出，等容积加入离心管后，用吸管混匀，在 的水浴下进行标本孵育，共 ，后离心，痰液标本在离心后分层，通过两个单层无菌纱布过滤后，收集上清液于塑料管中，放置于 冷藏备用。采用 高通量测序平台进行痰样本 基因高通量测序：检测 指数和 指数，操作步骤：）根据 操作手册采用 （）进行诱导痰样本 的提取。）应用相应引物：按照细菌 基因 区进行合成特异的：引 物（：，：）对 基因 区 扩增。）电泳，使用 的琼脂糖凝胶筛选 产物片段。）采用 软件定量分析电泳的结果。）定量后，按照比例 进行混样，混样后通过文库构建和基因测序进行生物信息学分析。酶联免疫吸附法检测血清样本免疫因子：取所有入组对象清晨空腹肘静脉血 ，低速离心后，将上层血清吸取（避免混入红细胞）后装入试管贺雷 支气管哮喘患儿气道微生态与血清免疫因子相关中，等待进一步检测。采用酶联免疫吸附法检测 组小儿的、和，检测时严格按照操作说明书进行检测。统计学分析采用 软件分析数据。以均值标准差（）表示符合正态分布的计量资料并采用方差分析 比 较，采 用检 验 比 较 计 数 资 料。应 用 相关性分析探讨支气管哮喘患儿诱导痰 基因高通量测序与血清免疫因子的相关性。结果 组的生物多样性比较缓解组及急性发作组的 指数皆低于健康组，急性发作组的 指数低于缓解组（）；缓解组及急性发作组的 指数皆高于健康组，急性发作组的 指数高于缓解组（）（表）。表 组患儿的生物多样性比较 （）（）（）（）；组、和 水平比较缓解组及急性发作组的、皆高于健康组，急 性 发 作 组 的、皆 高 于 缓 解 组（）；缓解组及急性发作组的、皆低于健康组，急性发作组的、皆低于缓解组（）（表）。支气管哮喘患儿诱导痰 基因高通量测序与血清免疫因子的相关性支气管哮喘患儿 指数与、呈负相关（；），指数与、呈正相关（）；支气管哮喘患儿 指数与、呈正相关（），指数与、呈正相关（）。表 组、和 水平比较 ，（，）（）（）（）；讨论 指数是用于估算样本中微生物多样性的一种指数，指数越高代表群落多样性越高。指数是利用稀有物种估算物种多样性的指数，指数越高代表群里丰富度越高。本研究结果显示，缓解组及急性发作组的 指数皆低于健康组，急性发作组的 指数低于缓解组；缓解组及急性发作组的 指数皆高于健康组，急性发作组的 指数高于缓解组，与相关研究有相似之处。这一结果说明，气道菌群紊乱是儿童支气管哮喘的发病机制之一。是由活化 细胞分泌的，能够诱导人 细胞分化，与机体炎性反应及免疫反应激活有关。是由 细胞分泌的一种抗炎性细胞因子，具有诱导机体免疫耐受和抑制细胞炎性反应的作用。是一种由 分泌的炎性介质，能够参与中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在呼吸道聚集的过程，使得呼吸道发生炎性反应。属于干扰素的家族成员之一，可通过对嗜酸性粒细胞或肥大细胞的活性进行调控而减轻气道炎性细胞浸润和组织损伤，使得炎性细胞的募集程度趋于稳定。本研究发现，缓解组及急性发作组的、皆高于健康组，急性发作组的、皆高于缓解组；缓解组及急性发作组的、皆低于健康组，急性发作组的、皆低于缓解组，与相关研究结果基本符合。这一结果提示，炎性反应参与了支气管哮喘的发生过程，支气管哮喘急性发作 期 炎 性 反 应 进 一 步 加 剧，这 可 能 与、和 水平表达异常有关。基础医学与临床 （）一项支气管哮喘小鼠的研究中发现，支气管哮喘小鼠的肠道菌群失调，生物丰富度发生改变，生态多样性可能与炎性反应有关。相关研究发现，支气管哮喘患者的诱导痰气道菌群在多样性及丰富度等方面与健康人群有一定差异，且可能与气道炎性反应有一定关系。本研究结果发现，支气管哮喘患儿 指数与、呈负相关，指数与、呈正相关；支气管哮喘患儿 指数与、呈正相关，指数与、呈正相关。这一结果表明，儿童支气管哮喘诱导痰气道菌群在多样性及丰富度有着紧密联系。综上所述，支气管哮喘患者的诱导痰气道菌群在多样性及丰富度发生改变，指数、指数与、及 等水平的改变有关。参考文献：，：邬奇翰，邱蕾，吴杰 孟鲁司特钠联合布地奈德福莫特罗粉吸入治疗支气管哮喘急性发作的疗效及对炎症的影响 广东医学，：张小宁，张向峰，张志英 儿童支气管哮喘诱导痰 和 水平及临床意义 医学研究杂志，：，吕欣，莫碧文哮喘气道平滑肌细胞表观遗传学调控的研究进展基础医学与临床，（）：，：陈菊梅，王红霞，朱青雅，等 哮喘儿童中痰细胞学与临床表现的相关性 宁夏医科大学学报，：中华医学会儿科学分会呼吸学组，中华儿科杂志编辑委员会 儿童支气管哮喘诊断与防治指南（年版）中华儿科杂志，：鲍燕敏，谢淦，冯志冠，等 轻度支气管哮喘儿童的诱导痰菌群特征 中国微生态学杂志，：马媛媛，钟斌，黄冬平，等 哮喘患儿血清 与外周血、细胞失衡的相关性研究 河北医药，：，赵宏芳，刘娟 支气管哮喘患儿外周血单核细胞培养上清液中肿瘤坏死因子、白细胞介素 和免疫球蛋白 水平与 样受体 表达的相关性 新乡医学院学报，：陈思敏，吴秀艳，彭桂英，等 基于 测序研究芍药甘草汤对支气管哮喘小鼠肠道菌群的影响北京中医药大学学报，：，：