生物碱类药物的分析电子教案.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物碱类药物的分析,二、生物碱类药物的通性,1.碱性,季铵碱脂肪胺、脂环胺芳胺、N芳杂环酰胺,小檗碱麻黄碱、阿托品罂粟碱咖啡因,吗啡具酸碱两性,2.溶解性,游离生物碱不溶或难溶于水，能溶或易溶于有机溶剂，在稀酸中成盐而溶解,生物碱盐类易溶于水，不溶于有机溶剂,3.旋光性,一般多为左旋体有效。,第二节 鉴别试验,一、特征鉴别反应,（一）双缩脲反应,侧链具有氨基醇结构,（二）Vitali反应,托烷生物碱,（三）绿奎宁反应,硫酸奎宁、硫酸奎尼丁,（四）Marquis反应,吗啡生物碱,（五）Frohde反应,吗啡生物碱,（六）官能团反应,吲哚生物碱,1.,利血平+新制香草醛玫瑰红色,2.,（七）紫脲酸胺反应,黄嘌啉类生物碱,（八）还原反应,吗啡与磷酸可待因的区分反应,二、一般鉴别反应,（一）熔点测定法,（二）沉淀反应,常用的生物碱沉淀试剂为：,1.重金属盐类，如K,2,HgI,4,、KBiI,4,、I,2,KI、二氯化汞等；,2.大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。,（三）显色反应,常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛硫酸等,（四）UV,（五）IR,（六）色谱法,1.HPLC,2.TLC,硅胶为吸附剂：游离生物碱能顺利迁移，生物碱盐类吸附太牢，造成严重拖尾。,解决方法：,（1）在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂烃胺类；,（2）硅胶板用碱处理,第三节 特殊杂质检查,特殊杂质检查主要根据药物与杂质的理化性质差异来进行。,利用药物和杂质在颜色、溶解行为、旋光性质、对光吸收选择性等物理性质上的差异，检查杂质是否符合限量规定,一、物理法,利用药物与杂质在挥发性、臭味等方面的差异进行检查。,（一）臭味及挥发性的差异,ChP（2000）,麻醉乙醚中异臭的检查,取本品 10ml，置瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。,（二）颜色的差异,ChP（2000）,盐酸阿扑吗啡,检查,分解产物,取本品 0.10g，加无水氧化物的乙醚 5ml，振摇后，乙醚液只许显极淡的红色。,（三）溶解行为的差异,利用药物与杂质在溶解性方面的差异进行检查。如葡萄糖中糊精的检查。,（四）旋光性质的差异,ChP（2000）,硫酸阿托品,检查,莨菪碱,取本品，按干燥品计算，加水制成每 1ml 中含 50mg 的溶液，依法测定（附录 E），旋光度不得过 0.40。,（五）对光吸收性质的差异分光光度法,利用药物与杂质在紫外吸收光谱方面的差异进行检查。,1.紫外分光光度法,例1.中国药典（2000年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸溶液（92000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波长处测定，吸收度不得超过0.05，已知肾上腺素酮在310nm波长处的为453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量应为（D）,A.0.1 B.0.5 C.0.04,D.0.06%E.0.0002,2.IR,用于药物中无效或低效晶型的检查。利用药物与杂质有特征峰差异进行检查。如甲苯咪唑中A晶型的检查、无味氯霉素混悬剂中A晶型的检查。,X射线粉末衍射法,3.原子吸收分光光度法,主要用于金属元素的检查，具有灵敏度高、选择性好等优点。如肝素钠中钾盐的检查。,（六）吸附或分配性质的差异色谱法,1.TLC,（1）杂质对照品法,（2）高低浓度对比法,（3）参比杂质对照品法 选用可能存在的某种物质作为杂质对照品。,（4）选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为杂质对照品。,2纸色谱,用于极性较大药物中杂质的检查或放射性药物注射液（或溶液）中放射化学杂质的检查。如地高辛中洋地黄毒苷的检查。,缺点：展开时间长，斑点扩散，不能用强酸等腐蚀性显色剂,3HPLC,（1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量,准确测定杂质含量,方法,内标物+杂质对照品对照溶液，进样，测定，计算校正因子,供试品+内标供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质含量,（2）外标法测定供试品中某个杂质的含量,供试品供试品溶液,杂质对照品对照品溶液,进样，测定，计算杂质的含量,缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样,（3）加校正因子的主成分自身对照法,方法,待测成分对照品+杂质对照品溶液，进样，记录色谱图，计算杂质的校正因子,分别进样，供试品溶液的记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。,（4）不加校正因子的主成分自身对照法,无杂质对照品，且杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。,方法,分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，控制供试品中杂质的量。,缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差,优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度,（5）面积归一化法,取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。,优点：不需杂质对照品，简便易行。,缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差。,4GC 用于药物中挥发性杂质的检查。如药物中有机溶剂残留量测定。检查方法同HPLC。,二、化学法,利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查。如阿司匹林中水杨酸的检查。,98：77乙醇中检查杂醇油是利用（C）,A.颜色的差异,B.旋光的差异,C.臭味及挥发性的差异,D.对光选择吸收的差异,E.溶解行为的差异,例.药物中特殊杂质的检查方,法有（ABCDE）,A沉淀法与颜色法,B滴定法,C旋光法,D分光光度法,E色谱法,例.HPLC检查药物中杂质的具体方法有（ABCDE）,A峰面积归一化法,B主成分自身对照法,C内标法,D外标法,E内标法加校正因,例.最常用于药物中特殊杂质检查的方法是(A),A.TLC,B.IR,C.UV,D.MS,E.NMR,例.红外分光光度法在杂质检查中主要用于（A）,A.药物中无效或低效晶型的检查,B.杂质特征峰的确定,C.杂质相关峰的确定,D.杂质官能团的确定,E.药物和杂质的鉴别,一、非水溶液滴定法（非水碱量法）,原料药,（一）原理,水溶液中滴定突跃不明显，在非水介质中，碱性增强，使滴定顺利进行,第四节 含量测定,1.溶剂,酸性溶剂：,冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐,惰性溶剂：,苯、氯仿、四氯化碳,能影响溶质的解离情况和能影响酸碱强度很大的溶剂：,硝基甲烷、丙酮、二氧六环,2.,滴定剂,：,高氯酸的冰醋酸溶液,或高氯酸的二氧六环溶液,3.,指示终点的方法,电位法,：玻璃甘汞电极系统,指示剂法,：结晶紫、喹哪啶红等,有机碱及其盐类及有机酸碱金属盐类,8p,K,b,10 冰醋酸作溶剂,10p,K,b,12 冰醋酸+醋酐,p,K,b,12 醋酐,（二）适用范围,一般采用半微量法,。中国药典（2000年版）的测定方法为：取经适当方法干燥的供试品适量,约,消耗高氯酸滴定液（0.1 mol/L）8 ml,，加冰醋酸10,30 ml使溶解。若供试品为氢卤酸盐，应再加5醋酸汞的冰醋酸溶液3,5 m1，加各药品项下规定的指示液1,2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。,（三）一般测定方法,取本品约 0.15g，精密称定，加醋酐冰醋酸（51）的混合液 25ml，微热使溶解，放冷，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显,黄色,，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 19.42mg 的C,8,H,10,N,4,O,2,。,咖啡因,ChP(2000),（四）生物碱盐类的滴定,置换滴定：,无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：,高氯酸氢溴酸盐酸硫酸,硝酸其它弱酸（磷酸、有机酸）,由于有机酸系弱酸，被高氯酸置换出的HA，对滴定无干扰，能准确滴定。,1.有机酸盐的测定,取本品约 60mg，精密称定，加冰醋酸 20ml 溶解后，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.05mo1/L）滴定，至溶液显,蓝绿色,，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.05mol/L）相当于,22.07mg 的C,19,H,23,N,3,O,2,C,4,H,4,O,4,。,马来酸麦角新碱,ChP(2000),若被置换出的有机酸不溶于冰醋酸，应先将样品碱化，有机溶剂提取游离碱后，再非水碱量法测定。,一般均预先在溶液中加入Hg(Ac),2,的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。,理论量1,3倍,2.氢卤酸盐的测定,取本品约 0.15g，精密称定，加冰醋酸 10ml，加热溶解后，加,醋酸汞试液 4ml,与结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定至溶液显,翠绿色,，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 20.17mg 的C,10,H,15,NO HCl。,盐酸麻黄碱,ChP(2000),生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。,（1）直接滴定,3.硫酸盐的测定,A.硫酸阿托品,HClO,4,直接滴定时，反应摩尔比为11,B.硫酸奎宁,HClO,4,直接滴定时，反应摩尔比为13,（2）加入高氯酸钡消除硫酸的干扰后滴定,硫酸奎宁 反应摩尔比为12,硫酸阿托品 一元碱不能滴定,因HNO,3,具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点。如硝酸士的宁、硝酸毛果芸香碱,4.硝酸盐的测定,取本品约 0.3g，精密称定，加冰醋酸 20ml，振摇使溶解，照电位滴定法（附录 A），用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于39.74mg的C,21,H,22,N,2,O,2,HNO,3,。,硝酸士的宁,ChP(2000),按常法测定，,如磷酸氯喹、磷酸可待因,5.磷酸盐的测定,简便、快速、准确、精密、取样量小，测定的是生理活性部分。,如有酸性或碱性成分存在时会影响，选择性差，不能直接用于制剂分析，只能用于原料药测定。,（五）特点,（1）一般是取一定量样品在水浴上蒸干，在一定温度下干燥后按原料药物项下的方法进行。,主药对热稳定,（六）制剂分析,1.注射剂,精密量取本品 10ml，置水浴上蒸干，在 105 干燥 1h,，放冷，加冰醋酸 10ml，与,醋酸汞试液 6ml,使溶解，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显,绿色,，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于37.58mg 的C,20,H,21,NO,4,HCl。,盐酸罂粟碱注射液,ChP（2000）,（2）碱化，经有机溶剂反复提取完全，蒸去溶剂后，再按原料药方法进行。,主药对热不稳定,二盐酸奎宁注射液,ChP（2000）,精密量取本品适量（约相当于二盐酸奎宁 0.15g），置分液漏斗中，加水使成20ml，加氨试液使成碱性，用氯仿分次振摇提取，第一次 25ml，以后每次各 10ml，,至奎宁提尽为止，,每次得到的氯仿液均用同一份水洗涤 2 次，每次 5 ml，洗液用氯仿 10ml 振摇提取，合并氯仿液，,置水浴上蒸去氯仿，加无水乙醇 2ml再蒸干，在 105 干燥 1h,，放冷，加醋酐 5ml 与冰醋酸 10ml，溶解后，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显,蓝色,，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于19.87mg 的C,20,H,24,N,2,O,2,2HCl。,片剂中许多赋形剂如硬脂酸盐、苯甲酸盐、羧甲基纤维素钠等都消耗高氯酸，因此片剂的测定一般需提取分离并经干燥后才可进行。,2.片剂,：,如硫酸奎宁片、硫酸奎尼丁片,碱化、有机溶剂提取后，HClO,4,滴定时，反应摩尔比为14,硫酸奎宁片,ChP（2000）,取本品 10 片，除去糖衣后，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸奎宁 0.3g），,置分液漏斗中，加氯化钠0.5g 与 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 10ml，混,匀，精密加氯仿50ml，振摇10min，静置，分取氯仿液，用干燥滤纸滤过。,精密量取续滤液25ml，,加醋酐5ml 与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显玫瑰红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml 高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于19.57mg的（C,20,H,24,N,2,O,2,）,2,H,2,SO,4,2H,2,O。,二、提取中和法（,提取酸碱滴定法、提取容量法）,（一）原理与方法,1.碱化,2.有机溶剂提取,3.中和法测定,（1）,直接滴定法,用于碱性较强的生物碱,（2）,剩余滴定法,用于碱性较弱的生物碱,（3）,酸滴定液返提后剩余滴定法,用于对热不稳定的生物碱,1.,碱化试剂,最常用氨水,2.,提取溶剂,（1）提取溶剂选择的原则,（2）常用的提取溶剂 最常用氯仿,（二）测定条件的选择,（3）提取溶剂的用量及提取次数,通常应提取4次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次应各为第一次的一半,3.,提取终点的确定,用合适的沉淀反应确定,4.指示剂的选择,5.,乳化的预防和消除,仪器简单、试剂常用，但操作繁琐、费时、精密度差、准确度差，主要用于制剂分析,（三）特点,阿片粉中吗啡的含量测定石灰法,ChP（1995）,固相萃取离子对-反相高效液相色谱法 ChP（2000）,（四）应用,（五）提取重量法,（一）基本原理,在适当的pH介质中,三、酸性染料比色法,制剂,1.水相中反应,离子对BH,+,In,-,被有机溶剂提取，使有机相呈色。剩余的酸性染料留于水相,3.比色法测定,2.有机溶剂提取,（1）定量分离出有机提取液，脱水后，测定A，求出有机碱含量,（2）定量分离出有机提取液，脱水后，碱化，则水相呈色，测定水相中In,-,的吸收度，间接求出有机碱的含量,BH,+,In,-,+OH,-,B+H,2,O+In,-,（3）定量分离出有机提取液，脱水后，酸化，则水相呈色，测定水相中HIn的吸收度，间接求出有机碱的含量,BH,+,In,-,+H,+,BH,+,+HIn,1.水相的最适pH值,如果水相pH值过小，酸性染料几乎仍以分子状态存在；如果水相pH值过大，则生物碱几乎全部以游离碱的形式存在,2.有机溶剂的选择,CHCl,3,、CH,2,Cl,2,（二）影响定量分析的因素,3.酸性染料的选择,常用溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝（BTB）等,5.有色杂质的排除,4.水分的影响,严防水分的混入,有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过,6.共存物的影响,3.准确度差，不能用于原料药的测定，只能用于制剂分析,（三）特点,1.选择性高（选用适当pH缓冲液可消除干扰）,2.灵敏度高、供试品用量少,硫酸阿托品注射液 ChP（2000）,注射液 对照法,（四）应用,片剂 对照法,五、色谱法,（一）高效液相色谱法,1反相 HPLC 分析生物碱类和有机含氮药物的特点,色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期地保留在色谱柱上。,四、紫外可见分光光度法,（1）加扫尾剂法,分离依据物质的极性及溶解性。在流动相中加入扫尾剂，最常用的扫尾剂是三乙胺,（2）用硅胶作固定相法,离子交换机理：根据pKa大小进行分离,2解决方法,流动相要选择适宜的 pH 值、竞争离子的种类和浓度，同时要加入有机改性剂,适合于药物与体内代谢物的分析,（3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法,分离依据物质溶解性,不论是游离碱还是其盐类，均是以游离碱出峰,（二）气相色谱法,97：83咖啡因和茶碱的特征鉴别反应是,A.双缩脲反应,B.Vitali反应,C.Marquis反应,D.紫脲酸铵反应,E.绿奎宁反应,98：139盐酸吗啡中应检查的特殊杂质为,A.吗啡,B.阿朴吗啡,C.罂粟碱,D.莨菪碱,E.其它生物碱,96：136用非水溶液滴定法测定盐酸吗啡含量时，应使用的试剂是,A.5醋酸汞冰醋酸液,B.盐酸,C.冰醋酸,D.二甲基甲酰胺,E.高氯酸,97：130非水溶液滴定法测定硫酸奎宁含量的反应条件为,A冰醋酸一醋酐为溶剂,B.高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定,C1mol的高氯酸与mol的硫酸奎宁反应,D.仅用电位法指示终点,E溴酚蓝为指示剂,99：78.非水溶液滴定法测定硫酸奎宁原料的含量时，可以用高氯酸直接滴定冰醋酸介质中的供试品，1摩尔硫酸奎宁需要消耗高氯酸的摩尔数为,A.1 B.2,C.3,D.4 E.5,99x：116120滴定反应中,A.被测物与HClO,4,的摩尔比为11,B.被测物与HClO,4,的摩尔比为13,C.两者均是,D.两者均不是,99x：116硫酸奎宁片经氯仿提取后用HClO,4,滴定,（D）,99x：117硫酸阿托品在冰醋酸中用HClO,4,滴定,99x：118.硫酸奎宁原料药用HClO,4,滴定,99x：119.磷酸可待因用HClO,4,滴定,99x：120.硝酸士的宁用HClO,4,滴定,（A）,（B）,（A）,(A),96：129.生物碱类药物制剂的测定方法,A.直接用有机溶剂提取后，用H,2,SO,4,标准液滴定,B.碱化后用有机溶剂提取，再用NaOH水溶液滴定,C.碱化后用有机溶剂提取，蒸去有机溶剂后用中性醇溶液，再用H,2,SO,4,标准液滴定,D.碱化后用有机溶剂提取，蒸去有机溶剂，再加入定量的H,2,SO,4,，再用NaOH标准液回滴,E.酸化后，用有机溶剂提取，采用适宜方法滴定,96：77.酸件染料比色法中，水相的pH值过小，则,A.能形成离子对,B.有机溶剂提取能完全,C.酸性染料以阴离子状态存在,D.生物碱几乎全部以分子状态存在,E.酸性染料以分子状态存在,95：111115可选择的药物：,A.阿托品 B.吗啡,C.两者均可 D.两者均不可,95：111.具有酯结构,95：112.为两性化合物,95：113.显较强碱性,95：114.用提取容量法测定,95：115.用碱性染料比色法,（A）,（B）,（A）,（C）,（D）,例15,A.双缩脲反应 B.Marquis反应,C.两者皆是 D.两者皆不是,1.盐酸麻黄碱,2.某些生物碱类药物,3.盐酸吗啡,4.咖啡因,5.硫酸奎尼丁,（A）,（C）,（B）,（D）,（D）,例6.生物碱类药物的一般鉴别试验包括,A.熔点测定,B.显色反应,C.沉淀反应,D.光谱法（紫外、红外）,E.薄层色谱法,例7.能够发生Vitali反应的药物是,A.盐酸吗啡,B.硫酸奎宁,C.磷酸可待因,D.盐酸麻黄碱,E.硫酸阿托品,例8.用非水溶液滴定法测定二盐酸奎宁时，二盐酸奎宁和HClO,4,的摩尔比是,A.11,B.12,C.13,D.14,E.11.5,例9.检查硫酸阿托品中莨菪碱时，应采用,A.色谱法,B.红外分光法,C.旋光度法,D.显色法,E.直接检查法,例10.酸性染料比色法测定生物碱类药物，有机溶剂萃取测定的有色物是,A.离子对和指示剂的混合物,B.生物碱盐,C.指示剂,D.离子对,E.游离生物碱,此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢,