Ion-Torrent基因测序仪.ppt

TheworldleaderinservingscienceProprietary&ConfidentialSemiconductorSequencingforLifeIon Torrent Ion Torrent 离子半导体测序平台为医学与离子半导体测序平台为医学与离子半导体测序平台为医学与离子半导体测序平台为医学与转化医学研究带来新的机遇转化医学研究带来新的机遇转化医学研究带来新的机遇转化医学研究带来新的机遇新一代半导体高通量Ion测序平台介绍Iontorrent平台在医学及临床诊断领域应用1）肿瘤2）妇婴生育保健领域3）HLA分型4）病院微生物领域IonTorrent部分用户名单内容内容23新一代半导体高通量新一代半导体高通量新一代半导体高通量新一代半导体高通量IonIon测序平台介绍测序平台介绍测序平台介绍测序平台介绍Ion Semiconductor Sequencing:Ion Semiconductor Sequencing:Scalability,Simplicity,Speed,Benchtop Sequencing for All Scalability,Simplicity,Speed,Benchtop Sequencing for All PGM for Genes.Proton for Genomes.Sequencing for All.2011 Q12012 Q3IonPGMTMSequencerIonProtonTMSequencerIon Ion 测序技术平台测序技术平台测序技术平台测序技术平台First First Post Light Post Light sequencing technology sequencing technology Founded2007byJonathan RothbergPioneerednextgenesequencingFounded 454,CuraGen,RaindancePartofLifeTechnologieswithofficesinConnecticut,Massachusetts,andCaliforniaGlobalmanufacturingsitesAnnouncein2010AGBTLaunchedDecember 2010快速完成检测快速完成检测快速完成检测快速完成检测PGMChips:l314Chip:1.2Mwellsl316Chip:6.1Mwellsl318Chip:11MwellsRothberg J.M.et al Nature doi:10.1038/nature10242 SensorPlateSiliconSubstrateDrainSourceBulkdNTPpHQVSensingLayerH+64种dNTP依次流过Ion芯片DNA聚合反应产生的氢离子的直接检测每个碱基的检测只需要几秒扩展性高CMOS(互补金属氧化物半导体)技术40年的摩尔定律简单天然dNTP无激光光源非光学检测无拍照系统非荧光检测非酶级联放大检测速度快快速完成测序反应7芯片就是测序仪芯片就是测序仪芯片就是测序仪芯片就是测序仪Small GenomeTranscriptome100M1G10GSequenceOutputperRun100GExomeSmall to Large Gene Panels10MUnprecedented Scalability Unprecedented Scalability 10,000-Fold From Ion 314 to Ion PIII Chip10,000-Fold From Ion 314 to Ion PIII ChipIon 316Ion 314Ion 318Ion PIIHuman GenomeIon PI Ion PIIIFrom 1.2 Million Sensors to 1.2 Billion SensorsThe content provided herein may relate to products that have not been officially released and is subject to change without notice10Ion技术平台在各研究领域应用技术平台在各研究领域应用病源微生物领域：病源微生物领域：v 细菌、病毒等denovo全基因组测序v菌群宏基因组测序（16SrRNA）v耐药菌株筛选妇婴生育保健领域：妇婴生育保健领域：v新生儿遗传病筛查v无创产前诊断v胚胎移植前染色体/遗传病检测（试管婴儿）v线粒体DNA突变筛查肿瘤领域：早期诊断、个性化治疗、预后监督肿瘤领域：早期诊断、个性化治疗、预后监督Ion 测序平台应用于临床诊断及医学研究测序平台应用于临床诊断及医学研究HLA分型：分型：器官移植、个性化药物治疗1.Ion Ampliseq技术应用于肿瘤诊断及个性化治疗技术应用于肿瘤诊断及个性化治疗Ion Ampliseq技术技术v多重多重PCR靶向捕获技术靶向捕获技术，在一个反应管内可同时进行几千重甚至上万重PCRv起始DNA量最低仅需10ng，适合FFPE标本及其他微量标本v适合降解样本降解样本，采用150bp引物扩增设计vReadsontarget效率高（96%以上），覆盖均一性好+Construct LibraryPrepare TemplateRun SequenceAnalyze DataIon Ampliseq Panels-固定或定制试剂盒固定或定制试剂盒v DNA-基因突变筛查基因突变筛查：Cancer Hotspot Panel v2:50个肿瘤相关基因，个肿瘤相关基因，207个扩增子个扩增子 Comprehensive Cancer Panel:409个肿瘤相关基因，个肿瘤相关基因，16000个扩增子个扩增子 Ion Ampliseq Exome：全外显子组：全外显子组 Custom Panels：定制客户感兴趣的肿瘤基因：定制客户感兴趣的肿瘤基因 Community Panels：结肠癌：结肠癌/肺癌、乳腺癌肺癌、乳腺癌/卵巢癌，白血病，心血管病等卵巢癌，白血病，心血管病等v RNA-基因表达量筛查：基因表达量筛查：RNA Cancer Panel：50个肿瘤相关基因个肿瘤相关基因 RNA Apoptosis Panel：267个凋亡相关基因个凋亡相关基因 Custom RNA Panels：定制客户感兴趣的肿瘤基因：定制客户感兴趣的肿瘤基因（1 1 1 1）肿瘤热点突变试剂盒）肿瘤热点突变试剂盒）肿瘤热点突变试剂盒）肿瘤热点突变试剂盒：Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v2v250 个肿瘤基因，个肿瘤基因，207 扩增子，扩增子，2855 个热点突变（个热点突变（COSMIC数据库）数据库）,一天完成检测一天完成检测KRASBRAFEGFRTP53PIK3CACSF1RJAK2NRASPTPN11ERBB2SRCFGFR3NPM1CDKN2ARETHNF1ASMAD4GNASPDGFRAMPLABL1PTENFLT3STK11SMARCB1KITMETNOTCH1FGFR2RB1JAK3VHLKDRSMOEZH2HRASAKT1ALKMLH1FBXW7ERBB4GNA11,GNAQATMCDH1IDH1CTNNB1APCFGFR1IDH2 晚晚期直肠癌患者的石蜡切片样本期直肠癌患者的石蜡切片样本，在，在配套服务器上分析时间约配套服务器上分析时间约10分分钟钟 PGM检测到的突变，经毛细管电泳测序验证，结果一致检测到的突变，经毛细管电泳测序验证，结果一致 黄黄色标注的是在色标注的是在COSMIC Database里找到的和肿瘤相关的突变信里找到的和肿瘤相关的突变信息：息：KRAS：直：直肠肠癌常见突癌常见突变，如果患变，如果患者发生此突变一般需要进行放射性化疗，单者发生此突变一般需要进行放射性化疗，单抗药抗药物治疗效果不佳；物治疗效果不佳；TP53：此突变预：此突变预示该患者的预后效果会较示该患者的预后效果会较差；差；APC：此高：此高频突变频突变常出常出现现在晚期癌症患者，在晚期癌症患者，具有诊断意义。具有诊断意义。金域医学检验中心利用金域医学检验中心利用Cancer Hotspot Panel进行肿瘤基因突变筛查进行肿瘤基因突变筛查（2）综合肿瘤试剂盒：）综合肿瘤试剂盒：Ion AmpliSeq Comprehensive Cancer Panel*P 个肿瘤基因个肿瘤基因,16,000 扩增子，一张扩增子，一张318芯片检测一芯片检测一个标本个标本（3 3）针对客户感兴趣基因定制）针对客户感兴趣基因定制）针对客户感兴趣基因定制）针对客户感兴趣基因定制AmpliseqAmpliseq试剂盒：试剂盒：试剂盒：试剂盒：Ion AmpliSeq Ion AmpliSeq Custom PanelsCustom Panels 适用于包括肿瘤等各种疾病研究及诊断适用于包括肿瘤等各种疾病研究及诊断适用于包括肿瘤等各种疾病研究及诊断适用于包括肿瘤等各种疾病研究及诊断Chip Type Genome Coverage500X(Somatic)20X(Germline)Ion3141kb10kbIon31650kb100kbIon318500kb1,000kblEnteryourcustomtargetregionsupto1Mwithmajorityofdesignscompletedinaslittleas2.5hourslUpto6,144ampliconsperpool,withthespecificityanduniformityofPCRlDNAtoannotatedvariantcallsinaslittleas10hoursTotal#of amplicons/poolOligos per pool486,14496-12,288（4）合作开发肿瘤试剂盒：）合作开发肿瘤试剂盒：Ion AmpliSeq Community Panels 与顶尖的研究人员共同设计与顶尖的研究人员共同设计Ion AmpliSeq Exomel294,000primerpairsacross12primerpools24,500-plexPCR!2.4MPCRsperplateof8exomes!lTotalDNAinputaslowas50nglCovers97%ofCCDS(Release12)19,000codinggenes,198,000codingexons,noUTRs,miRNAs,orncRNAs85%ofhumandisease-causingvariantsfoundincodingregionsorsplicejunctions1lAmpliconsizerange225-275bpAverageinsertsizeis202bplIonAmpliSeqExomeKitsincludeIonPIChipsv2二、二、Ion 测序平台在妇婴生育保健领域中的应用测序平台在妇婴生育保健领域中的应用育龄夫妇遗传病携带信息筛查新生儿遗传病筛查新生儿疑难杂症研究线粒体DNA突变筛查 无创产前诊断染色体异倍性胚胎移植前染色体异倍性检测胚胎移植前单基因遗传病检测 应用应用 1-无创产前诊断无创产前诊断无创产前诊断无创产前诊断 检测母亲血浆游离胎儿检测母亲血浆游离胎儿DNA 华大基因37台Proton，爱建生物32台Proton实验流程实验流程需要时间需要时间母体血浆游离母体血浆游离DNA抽提抽提1h文库构建（文库构建（low input method)4hePCR（One Touch Kit）4h OT+15min 手动手动PGM sequencing1.5-2.5h数据分析数据分析0.5-1hIon Torrent使用芯片使用芯片每张芯片支持样本数每张芯片支持样本数PGM318 chip1-2个个ProtonP I chip10-20个个P II chip50-100个个无创产前诊断实验流程无创产前诊断实验流程华大利用华大利用PGM测序平台进行无创产筛发表的测序平台进行无创产筛发表的SCI论文论文正常正常T13T18T21 13例血浆标本：例血浆标本：4例正常、例正常、6例例T21、2例例T18、1例例T13 每张每张318芯片检测一个标本，芯片检测一个标本，24小时完成实验小时完成实验 染色体异倍体检测准确性染色体异倍体检测准确性100%Proton I可同时检测可同时检测16个标本个标本Trisomy13Trisomy18试管婴儿胚胎植入前单细胞检测染色体多倍性试管婴儿胚胎植入前单细胞检测染色体多倍性单细胞扩增基因组DNA，利用PGM测序平台检测染色体多倍性只需要约只需要约0.5M reads即可分析染色体多倍性即可分析染色体多倍性316芯片可同时检测芯片可同时检测6-8个样本，个样本，318芯片可同时芯片可同时检测检测12-15个标本个标本1-2天可出检测报告天可出检测报告应用应用2-胚胎移植前染色体多倍性检测胚胎移植前染色体多倍性检测应用应用 3-胚胎移植前单基因遗传病检测胚胎移植前单基因遗传病检测Evaluationoftargetednext-generationsequencingbasedpreimplantationgeneticdiagnosisofmonogenicdisease.Fertility and Sterility.2012 本文中作者对本文中作者对PGM平台用于平台用于PGD单基因病检测进行评估单基因病检测进行评估 选了选了6对有遗传病的夫妇，其后代得病风险高对有遗传病的夫妇，其后代得病风险高 样本为体外受精后囊胚的滋养外胚层细胞样本为体外受精后囊胚的滋养外胚层细胞 针对遗传病相关的突变位点及针对遗传病相关的突变位点及indels，分别用，分别用PGM测序法测序法及传统的及传统的qPCR法进行检测，结果法进行检测，结果100%一致一致 使用使用PGM平台进行平台进行PGD单基因病检测，准确性高、速度单基因病检测，准确性高、速度快、成本低快、成本低检测方法检测方法-ION AMPLISEQ 技术：靶向捕获遗传病相关基因进行测序技术：靶向捕获遗传病相关基因进行测序+应用应用4-育龄夫妇遗传病携带信息筛查育龄夫妇遗传病携带信息筛查Construct LibraryPrepare TemplateRun SequenceAnalyze Datav多重PCR靶向捕获技术，最多在一个反应管内可同时进行6144重PCRv起始DNA量仅需10ng，适合各种微量标本vReadsontarget效率高，覆盖均一性好（相比探针杂交靶向捕获技术）中国患有遗传疾病的人群达几千万，携带遗传病相关基因的人数中国患有遗传疾病的人群达几千万，携带遗传病相关基因的人数就更多。这些基因很可能遗传给下一代，因此非常有必要对育龄就更多。这些基因很可能遗传给下一代，因此非常有必要对育龄夫妇进行遗传病相关基因检测！夫妇进行遗传病相关基因检测！ION AMPLISEQ 遗传病检测试剂盒遗传病检测试剂盒328 个基因个基因,10,000 扩增子扩增子,700 种遗传病种遗传病（OMIM数据库）数据库）,一天内完成检测一天内完成检测利用利用ION AMPLISEQ 技术靶向捕获新生儿遗传病相关基因技术靶向捕获新生儿遗传病相关基因使患病的新生儿得以早期诊断、早期治疗使患病的新生儿得以早期诊断、早期治疗GeneDiseaseAmpliconsregionPAHPhenylketonuria(PKU)151359bpCOL11A2InheritedDeafness735470bpGJB2InheritedDeafness5681bpGJB3InheritedDeafness6813bpGJB6InheritedDeafness6786bpKCNQ4InheritedDeafness242088bpSLC26A4SyndromicDeafness302246bp应用应用5-新生儿遗传病筛查新生儿遗传病筛查苯丙酮尿症、先天性耳聋相关基因纽约州卫生署利用纽约州卫生署利用PGM测序平台进行新生儿筛查发表的测序平台进行新生儿筛查发表的SCI论文论文 研发出一套研发出一套CASM方法，可以从新生儿干血方法，可以从新生儿干血斑中提取基因组斑中提取基因组DNA 通过通过PCR靶向获取遗传病相关基因：靶向获取遗传病相关基因：GALC（Krabbe症，脑白质营养不良症）症，脑白质营养不良症）PAH（苯丙酮尿症）（苯丙酮尿症）GALT（半乳糖血症）（半乳糖血症）ACADM（中链脂肪酸去氢酵素缺乏症）（中链脂肪酸去氢酵素缺乏症）ACADVL（极长链酰基辅酶（极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症）脱氢酶缺乏症）利用利用Ion PGM测序仪及一代测序仪及一代Sanger法测序仪法测序仪对对5个遗传病基因进行检测，结果一致性个遗传病基因进行检测，结果一致性 99%(6)利用全外显子组测序技术研究疑难杂症利用全外显子组测序技术研究疑难杂症美国一位叫HarrisonHarkins的婴儿，出生9个月之后出现了奇特的症状：独特的面部特征、身体偏小、进食困难、发育停滞、智力缺陷等。贝勒医学院贝勒医学院的科学家对这种未知的罕见疾病利用全外显子组测序全外显子组测序的方法，找到了一个功能未知基因ASXL3发生了突变发生了突变，并且婴儿的双亲都没有这种突变。为了进一步证实突变与疾病的相关性，科学家们在全球找到了3名类似症状的小孩，都有这种突变。利用ASXL3突变信息可以用于诊断新生儿刚出生时是否患有这种罕见疾病，尽早采取治疗措施。全外显子组测序技术非常适合于寻找疑难杂症的分子病因。全外显子组测序技术非常适合于寻找疑难杂症的分子病因。Mitochondrialgenesofdeafness：A1555GDeepsequenceforheteroplasmydetection(1000 xcoverageonIon314)Abilitytodo16samplesperrunwithbarcodingAccuratevariantcalling,especiallyinhypervariableregionsofmitochondriaHUMAN MITOCHONDRIAL SEQUENCINGMutation detected on position 15450Prof/.Stefan Schuster Penn.State UniversityRapid resequencing of mitochondrial genomes for disease research,biodiversity assessment线粒体疾病线粒体疾病-13个编码多肽的基因个编码多肽的基因编码产物编码产物基因分析基因分析基因变异对应的常见线粒体病种类基因变异对应的常见线粒体病种类NADHdehydrogenase(complexI)MT-ND1Leber遗传性视神经病MT-ND2心肌线粒体病，Leber遗传性视神经病MT-ND3进肌阵挛，癫痫，视神经萎缩MT-ND4Leber遗传性视神经病，线粒体肌病，Leber遗传性视神经病，张力障碍MT-ND4LLeber遗传性视神经病MT-ND5Leigh综合征，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症MT-ND6Leber遗传性视神经病，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症，糖尿病，肌张力障碍coenzymeQ-cytochromecreductase/Cytochromeb(complexIII)MT-Cytb慢性游走性红斑，Leber遗传性视神经病，线粒体肌病，心肌线粒体病，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症，帕金森病cytochromecoxidase(complexIV)MT-COX1肌红蛋白尿运动神经元疾病，铁粒幼细胞贫血MT-COX2线粒体肌病，线粒体多系统疾病，线粒体脑肌病MT-COX3Leigh综合征，慢性游走性红斑，骨骼肌溶解症ATPsynthaseMT-ATP6共济失调并发色素性视网膜炎，母系遗传Leigh综合征，家族性双侧纹状体坏死MT-ATP8共济失调并发色素性视网膜炎，母系遗传Leigh综合征，家族性双侧纹状体坏死 线粒体疾病线粒体疾病-22个编码个编码TRNA的基因的基因 AlanineMT-TA进行性眼外肌麻痹ArginineMT-TRAsparagineMT-TN线粒体肌病，进行性眼外肌麻痹AsparticacidMT-TD心肌线粒体病，肌阵挛CysteineMT-TC慢性游走性红斑GlutamicacidMT-TE心肌线粒体病，慢性游走性红斑GlutamineMT-TQ线粒体肌病，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症GlycineMT-TG心肌线粒体，婴儿猝死综合征，慢性游走性红斑HistidineMT-THIsoleucineMT-TI线粒体肌病，心肌线粒体病，进行性眼外肌麻痹LeucineMT-TL1慢性进行性眼外肌麻痹，Leer遗传性视神经病，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症，线粒体肌病，心肌线粒体病，糖尿病和线粒体耳聋MT-TL2心肌线粒体病，慢性游走性红斑，慢性进行性眼外肌麻痹，线粒体肌病，铁粒幼红细胞性贫血LysineMT-TK心肌线粒体病，慢性进行性眼外肌麻痹，肌阵挛性癫痫发作伴破碎红纤维，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症，线粒体耳聋MethionineMT-TM线粒体肌病，淋巴瘤PhenylalanineMT-TF线粒体脑肌病、乳酸中毒以及卒中样发作，骨骼肌溶解症ProlineMT-TP线粒体肌病，进行性眼外肌麻痹SerineMT-TS1掌跖角化症，线粒体耳聋，肌阵挛性癫痫发作伴破碎红纤维-线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症MT-TS2糖尿病和线粒体耳聋ThreonineMT-TT心肌线粒体病，慢性游走性红斑TryptophanMT-TWLeigh综合征，共济失调舞蹈病，线粒体肌病TyrosineMT-TY慢性进行性眼外肌麻痹ValineMT-TVLeigh综合征，线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合症，线粒体多系统疾病12SribosomalRNAMT-RNR1帕金森病，氨基糖甙类抗生素致聋16SribosomalRNAMT-RNR2心肌线粒体病1.8 long-range PCR:enhancer-promoter to 3 UTR2.Roche 454 Junior平台：平台：10个标本，每次运行检测一个标本，成个标本，每次运行检测一个标本，成本约本约$1500 per sample。每个标本平均。每个标本平均100K reads，41Mb碱基，碱基，14.5Mb有效匹配碱基，有效匹配碱基，387.9X测序深度测序深度3.Ion Torrent平台：一张平台：一张316芯片同时检测芯片同时检测4个标本，成本约个标本，成本约$70 per locus per sample。每个标本平均。每个标本平均650K reads，130Mb碱基，碱基，45Mb有效匹配碱基。所以一张有效匹配碱基。所以一张316芯片可同时检测更多的标本，芯片可同时检测更多的标本，成本更低。若用成本更低。若用318芯片，可同时检测芯片，可同时检测32个标本，成本可低于个标本，成本可低于$17 per locus per sample。三、三、三、三、IonIon测序技术应用于测序技术应用于测序技术应用于测序技术应用于HLAHLA分型分型分型分型l微生物全基因组denovo测序l菌群宏基因组测序（16SrRNA）l病毒分型l耐药菌株筛选四四、IonIon测序技术在微生物领域的应用测序技术在微生物领域的应用测序技术在微生物领域的应用测序技术在微生物领域的应用病源微生物领域病源微生物领域 1-细菌全基因组测序细菌全基因组测序大肠杆菌：德国毒黄瓜大肠杆菌：德国毒黄瓜炭疽杆菌炭疽杆菌葡萄球菌：韩国豆瓣酱葡萄球菌：韩国豆瓣酱脑膜炎双球菌脑膜炎双球菌阿尔莱特葡萄球菌阿尔莱特葡萄球菌,来源于心血管病人来源于心血管病人葡萄球菌：引起自体瓣膜心内膜炎葡萄球菌：引起自体瓣膜心内膜炎PGM初登场，初登场，3天破译肠道致病菌天破译肠道致病菌第一天第一天 5月月30日日文库制备文库制备0104:H4和HUSC41样品（对照）菌株文库制备第二天第二天 5月月31日日完成第一轮测序完成第一轮测序0104:H4扩增和测序，22测序（Ion314芯片）第三天第三天 6月月1日日完成第二轮测序完成第二轮测序0104:H4测序，32测序（Ion314芯片）第四天第四天 6月月2日日序列拼接，提交数据序列拼接，提交数据基因组数据确认，拼接，并从NCBI提交和发布第五天第五天 6月月3日日设计检测方法，检测试剂盒发布设计检测方法，检测试剂盒发布TaqMan实时荧光定量检测试剂盒“作为一个公共卫生官员，就我个人的观点，作为一个公共卫生官员，就我个人的观点，Ion PGM最大的优点是快速，而快速是此刻所需要的。最大的优点是快速，而快速是此刻所需要的。”-Prof.Dr.Med Dag Harmen明斯特大学医院明斯特大学医院“Ion PGM使用了最短的时间生成基因组数据。使用了最短的时间生成基因组数据。”-Jun Qin 华大基因华大基因Life Technologies公司提供整体解决方案：公司提供整体解决方案：5天之内完成从菌株鉴定到检测试剂盒研发天之内完成从菌株鉴定到检测试剂盒研发德国明斯特大学和中国华大基因两家机构，同时选择了德国明斯特大学和中国华大基因两家机构，同时选择了Ion PGM,以最短的时间，于以最短的时间，于3天之内破译致病菌天之内破译致病菌 2011年年5月至月至6月，德国暴发了由产志贺毒素大肠杆月，德国暴发了由产志贺毒素大肠杆O104:H4引发的引发的疫情，疫情，3,000多人受到感染，最终导致多人受到感染，最终导致40多人死亡多人死亡.最新一代半导体测序平台最新一代半导体测序平台Ion PGM,最快速的测序平台，仅最快速的测序平台，仅2小时内小时内就完成全基因组测序，就完成全基因组测序，3天之内鉴定其为一种新的耐药性的混合型菌株天之内鉴定其为一种新的耐药性的混合型菌株.Bluetongue VirusInfluenza VirusBacteriophage病源微生物领域病源微生物领域 2-病毒、噬菌体全基因组测序病毒、噬菌体全基因组测序病源微生物领域病源微生物领域 3-细菌宏基因组测序（细菌宏基因组测序（16S rRNA）牙周炎牙周炎囊性纤维化囊性纤维化器官移植细菌感染器官移植细菌感染厌氧池厌氧池水质水质病源微生物领域病源微生物领域 4-病毒分型病毒分型 腺病毒腺病毒流感病毒流感病毒病源微生物领域病源微生物领域 5-筛查耐药性菌株筛查耐药性菌株金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌结核杆菌结核杆菌沙门氏菌沙门氏菌AllproductsmentionedinthispresentationareForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.2013LifeTechnologiesCorporation.Allrightsreserved.ThetrademarksmentionedhereinarethepropertyofLifeTechnologiesCorporationand/oritsaffiliate(s)ortheirrespectiveowners.