化学发光免疫检测资料.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,化学发光免疫检测,1,学习目标,化学发光检测的分类及原理,了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理,酶促化学发光,01,辣根过氧化物酶（,HRP）,碱性磷酸酶（,ALP）,吖啶酯发光,异鲁米诺发光,电化学发光,直接化学发光,02,化学发光免疫检测分类,1.,酶促化学发光,HRP,辣根过氧化物酶,常用的底物为鲁米诺或其衍生物,碱性磷酸酶,常用的底物为,AMPPD,和,4-MUP,ALP,酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光,常用的酶,HRP,和,ALP,鲁米诺在碱性缓冲液中被,HRP,催化发生氧化反应,鲁米诺,H,2,O,2,/OH,HRP,+N,2,+H,2,O,+,光,1.,酶促化学发光,AMPPD,在碱性条件下，被,ALP,酶解生成相当稳定的,AMP-D,阴离子，其有,2,30min,的分解半衰期，发出波长为,470nm,的持续性光，在,15min,时其强度达到高峰，,15,60min,内光强度保持相对稳定,光,ALP,/OH,HPO4,2,AMPPD,1.,酶促化学发光,利用酶对发光底物催化作用而直接发光，,通过光强度的测定而直接进行定量。,1.,酶促化学发光,反应原理图,1.,酶促化学发光,特点：,激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。,代表仪器：,美国贝克曼公司的,ACCESS 2,、,DXI800,1.,酶促化学发光,代表仪器：,迈瑞,CL-2000i,、安图,Autolumo A2000,2.,直接化学发光,不需催化剂，只需改变溶液的,pH,等条件就能发光的物质,反应迅速,1,背景低,2,信比高,3,吖啶酯在含,H,2,O,2,的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见，,特点,发光过程在,5,秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。,吖啶酯,+CO,2,+,光,吖啶酯化学发光,吖啶酯发光,代表仪器：,拜耳公司的,ACS180,西门子的,ADVIA Centaur,雅培的,ARCHITECT,+NaOH +H,2,O,2,发光,激发底物,1,激发底物,2,delay 2.5s,delay 0.1s,异鲁米诺发光,原理：,发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在,3,秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点,异鲁米诺发光,代表仪器：,瑞典,索灵,公司的,LIAISON,、新产业,MAGLUMI 2000/4000,是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质,特点：,反应在电极进行；,电子供体为：三丙胺（,TPA,）,化学发光剂：三联毗啶钌,三联毗啶钌,分子结构图,电化学发光,电化学发光反应原理,底物：三联吡啶钌,Ru(bpy),2+,3,、三丙胺,(TPA),这一过程可在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号增强,电化学发光,代表仪器：,罗氏,e601,、,e411,进口全自动化学发光仪,仪器型号,cobas e601,ARCHITECT,i 2000 SR,Unicel DxI800,LIAISON,ADVIA Centaur,生产厂家,罗氏,雅培,贝克曼,索灵,西门子,反应原理,电化学发光,化学发光微粒子,微粒子酶促化学发光,磁性微粒子化学发光,固相磁粉化学发光,标记物,三联吡啶钌,直接发光,吖啶酯衍生物,直接发光,金刚烷,AMPPD,AKP,，酶促发光,异鲁米诺衍生物,ABEI,直接发光,吖啶酯,直接发光,包被方式,链霉亲和素生物素间接包被,磁珠包被,常规单克隆,Ag/Ab,包被,磁性微粒子包被技术,磁性微粒子包被技术,测试速度,170T/H,200T/H,400T/H,180T/H,240T/H,国产全自动化学发光仪,企业,仪器型号,发光机制,测试速度,测试项目数,迈瑞,CL-2000i,ALP+AMPPD,240T/H,20,安图,Autolumo A2000,HRP,200T/H,65,新产业,MAGLUMI 4000,ABEI+NaOH,、,H,2,O,2,240T/H,95,迈克,IS 1200,HRP,120T/H,17,威高,AutolumiS 2000,ABEI+NaOH,、,H,2,O,2,220T/H,42,长光华医,EVERESYS,A1800,吖啶酯,180T/H,34,博奥塞斯,Axceed 260,鲁米诺衍生物,180T/H,35,测试题与讨论,酶促化学发光是发光底物经,的降解作用而发出光,常用的酶有：,和,。,雅培,ARCHITET i2000,采用,标记的标记分子，专利的,衍生物，具有更高的发光效率以及稳定性。,谢谢大家！,