细菌鉴定流程.ppt

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members:,环境微生物的检测,受试菌初步鉴定报告,1,.,CONTENTS,分离环境,形态及理化特征,16sRNA,基因,PCR,结果及网上比对结果,参考文献,结论与讨论,2,.,分离环境,时间,采集地,分离基物,2015,年,手指表面,生科院,2019,室,受试菌的采集步骤：,在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。,3,.,形态及理化特征,菌落形态,在培养基上呈黄色菌落。菌落圆形，凸起，光滑且有光泽，边缘整齐。,形态特征：菌落特征,4,.,形态及理化特征,显微特征,圆球状，无鞭毛且不可运动,形态特征,鞭毛染色,1,、步骤,制片：滴菌液倾斜玻片室温干燥,染色：,A,液,3-5min,水洗,B,液冲残水，覆盖染色出现明显褐色时轻轻水洗晾干,2,、结果,受试菌无鞭毛不可运动,5,.,形态及理化特征,革兰氏染色,形态特征,1,、步骤,制片：载玻片：火烧去脂水滴：小菌：少,(,薄而均匀,),染色：滴加结晶紫染液初染,2min,水洗冲残水后滴加卢戈氏碘液媒染,1min,水洗吸残水后滴加,95%,乙醇脱色约,30s,滴加沙黄染液复染,1-2min,水洗吸干水，镜检,2,、结果,受试菌为革兰氏染色,阳性,菌,G+,（金黄色葡萄球菌）,受试菌,G-,（大肠杆菌）,6,.,形态及理化特征,TITLE TITEXT,枯草芽孢杆菌,淀粉水解实验,大肠杆菌,1,、步骤：,固体淀粉培养基划线接种,37,培养,24h,滴加碘液（均匀铺满平板）观察,2,、结果：,受试菌周围未出现无色透明圈,说明不能分泌胞外淀粉酶,受试菌,理化特征,7,.,形态及理化特征,变形杆菌,糖发酵实验,大肠杆菌,1,、步骤,葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）穿刺接种,37,培养,2448h,观察培养基颜色和是否产生气泡,乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴甲酚紫）穿刺接种,37,培养,2448h,观察培养基颜色和是否产生气泡,2,、结果,受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发酵均,不产酸不产气,受试菌,理化特征,变形杆菌,大肠杆菌,受试菌,葡萄糖,乳 糖,8,.,形态及理化特征,氨苄青霉素抗性实验,1,、步骤,氨苄青霉素滤纸条垂直接种培养观察、测量滤纸条距菌起始位置的距离,2,、结果,受试菌对青霉素敏感,理化特征,受试菌,大肠杆菌,芽孢杆菌,葡萄球菌,平板编号,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,受试菌,1,1.80,3.70（？）,3.78,2.70,2,2.10,2.90,2.60,抑菌长度,（,cm,）,9,.,形态及理化特征,API20NE,试剂条检测,1.,试剂条接种和培养,a),选择菌落（先确定是否为单一纯菌株）,b),向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度）,c),挑取单菌落至,2mL0.85%NaCl(aq),（已灭菌）中，使菌浓度达到,0.5,个麦氏单位标准浊度。用同一枪头分别接种盐水菌悬液从,NO3,到,PNPG,试剂管（,120L/,管）。,d),将剩余的,200L,生理盐水菌悬液加至,APIAUX,培养基，仔细混匀，注满由,GLU,至,PAC,管（,250L/,管）。,e)GLU,ADH,URE,三个管用矿物油覆盖,f),将,API 20E STRIP,放入盒中，盖上盒盖，在,30,培养,24h,。,理化特征,2.,试剂条的结果观察,a),培养后，将一滴,NIT 1,和,NIT 2,试剂进入到,NO3,中，,5min,后，红色表示阳性反应；阴性反应的，为排除,N2,的影响，加入锌粉,5min,，无色表示阳性反应。,b),将,JAMES,试剂加入,TRP,，立即显现粉红色为阳性反应,c),其他见实验结果判定表,10,.,形态及理化特征,API20NE,试剂条检测,理化特征,（,24h,，,30,）,（,48h,，,30,）,11,.,形态及理化特征,API20NE,试剂条检测,理化特征,结果,API20NE 硝酸盐还原,API 20NE 产生吲哚,API 20NE 酸化葡萄糖,API 20NE 精氨酸双水介酶活,API 20NE 脲酶活,API 20NE,-葡萄糖甙酶活,API 20NE 明胶蛋白酶活,API 20NE,-半乳糖苷酶活,API 20NE 可以同化的碳源,阴性,阴性,阴性,阴性,阴性,阴性,阳性,阴性,葡萄糖，麦芽糖，苯乙酸,12,.,形态及理化特征,API20NE,试剂条检测,理化特征,“,0050202,”,13,.,16sRNA,基因,PCR,结果及网上比对结果,16sRNA,基因,PCR,结果,GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACGGTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG,14,.,16sRNA,基因,PCR,结果及网上比对结果,网上比对结果,最相似菌种名,Micrococcus luteus,最高相似度,99.00%,15,.,结果与分析,由,16sRNA,基因检测结果与数据库对比与,Micrococcus luteus,最高相似度,99.00%,从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为：,球菌，直径为,1.0-2.0,微生，细胞单生，对生和向几个方向分裂而形成四联体、不规则的堆团或规则的立方堆形。不运动。生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑、凸起并具有整齐边缘的菌落。形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽。菌落黄色、黄绿色或橙色，有些菌株形成一种能扩散到培养基内的紫色素。在液体培养基中浑浊均匀，随之变清，产生一些细的像颗粒状或粘液状的沉淀。,通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸，在葡萄糖培养液中最终,PH,值在,6.4-8.2.,含碳化合物包括乙酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麦芽糖、蔗糖，都可氧化为水和二氧化碳。对甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是可变的，不能氧化卫矛醇。,藤黄微球菌,Micrococcus luteus,16,.,结果与分析,藤黄微球菌,Micrococcus luteus,可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基酸更复杂的培养基。,专性好氧，最适生长温度约为,35,。大多数菌株可在,10,生长，有些在,45,生长。能在,5%NaCl,生长，但不常在,10%,或,15%NaCl,中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。,对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。,建议新的模式菌株：,CCM 169;ATCC 44698;NCTC 2665,.,17,.,结果与分析,分析,比较项目,菌形态,革兰氏染色,葡萄糖分解,运动性,菌落特征,有无鞭毛,藤黄微球菌,球状,阳性,不分解,不运动,金黄色,无,受试菌,球状,阳性,不产酸不产气,不运动,金黄色,无,由于,API,的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果，根据,16sRNA,的查询结果，对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征，发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌。,18,.,参考文献,NCBI Blast,百度百科,Wikipedia,中国科技资源共享网,伯杰氏系统细菌学手册,沈萍 陈向东主编,微生物学实验（第,4,版）,Peter Ka mpfer,Holger C.Scholz,Birgit Huber,Enevold Falsen and,Hans-Ju rgen Busse.,Ochrobactrum haematophilum sp.nov.and Ochrobactrum pseudogrignonense sp.nov.,isolated from human clinical specimens,.International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology(2007),57,25132518,19,.,THANKS,Group 2,14,生基一班 第二小组,20,.,