DNA重组技术的基本工具PPT课件.ppt

热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练11DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练课程标准课程标准列举列举DNADNA重组技术的基本工具。重组技术的基本工具。课标解读课标解读1.1.简简述述DNADNA重组技术所需三种基本工具的作用。重组技术所需三种基本工具的作用。2.2.说明基因工程载体应具备的条件。说明基因工程载体应具备的条件。3.3.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练1 1基因工程的概念基因工程的概念基基因因工工程程是是指指按按照照人人们们的的愿愿望望，进进行行严严格格的的设设计计，并并通通过过 和和 等等技技术术，赋赋予予生生物物以以新新的的遗遗传传特特性性，从从而而创创造造出出更更符符合合人人们们需需 要要 的的 新新 的的 生生 物物 类类 型型 和和 生生 物物 产产 品品。由由 于于 基基 因因 工工 程程 是是 在在 水平上进行设计和施工的，因此又叫做水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNADNA重组技术。重组技术。基因工程的概念和理论基础基因工程的概念和理论基础 体外体外DNADNA重组重组转基因转基因DNADNA分子分子热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练2 2基因工程的理论基础和技术支持基因工程的理论基础和技术支持理理论论基基础础 是是遗传遗传物物质质DNA双螺旋双螺旋结结构和构和 的确立的确立 的破的破译译技技术术支持支持基因基因转转移移载载体体 的的发现发现多种多种 和和 ，以及，以及 酶酶(工具工具酶酶)的的发现发现DNA合成和合成和 技技术术的的发发明明 的的实现实现、的成功的成功第一例第一例转转基因基因动动物物问问世、世、技技术术的的发发明明DNADNA中心法则中心法则遗传密码遗传密码质粒质粒限制酶限制酶连接酶连接酶逆转录逆转录测序测序DNADNA体外重组体外重组重组重组DNADNA表达实验表达实验PCRPCR热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练 思思维维激激活活1 1 与与其其他他生生物物变变异异相相比比，基基因因工工程程所所导导致致的的变变异异有有何何特点？特点？提提示示变变异异一一般般是是不不定定向向的的，但但基基因因工工程程使使生生物物产产生生新新的的性性状状变异却是定向的，是按照人们的实际需要进行的有目的的改造。变异却是定向的，是按照人们的实际需要进行的有目的的改造。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练基因工程概念的理解基因工程概念的理解 基因工程的基因工程的别别名名基因拼接技基因拼接技术术或或DNA重重组组技技术术操作操作环环境境生物体外生物体外操作操作对对象象基因基因操作水平操作水平DNA分子水平分子水平基本基本过过程程剪切剪切拼接拼接导导入入表达表达结结果果人人类类需要的生物需要的生物类类型和生物型和生物产产品品热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练特别提醒基因工程具有以下五个方面的特点：特别提醒基因工程具有以下五个方面的特点：(1)(1)它是一种按照人们的意愿，定向地改造生物遗传特性的技术。它是一种按照人们的意愿，定向地改造生物遗传特性的技术。(2)(2)在在DNADNA分子水平进行操作。分子水平进行操作。(3)(3)是在体外进行的人为的基因重组。是在体外进行的人为的基因重组。(4)(4)一旦成功，便可遗传。一旦成功，便可遗传。(5)(5)主要技术为体外主要技术为体外DNADNA重组技术和转基因技术。重组技术和转基因技术。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练【巩巩固固1 1】科科学学家家们们经经过过多多年年的的努努力力，创创立立了了一一种种新新兴兴生生物物技技术术基因工程，实施该工程的最终目的是基因工程，实施该工程的最终目的是()。A A定向提取生物体内的定向提取生物体内的DNADNA分子分子B B定向地对定向地对DNADNA分子进行人工分子进行人工“剪切剪切”C C在生物体外对在生物体外对DNADNA分子进行改造分子进行改造D D定向地改造生物的遗传性状定向地改造生物的遗传性状热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练解解析析基基因因工工程程的的定定义义就就是是在在生生物物体体外外，通通过过对对DNADNA分分子子进进行行人人工工“剪剪切切”和和“拼拼接接”，对对生生物物的的基基因因进进行行改改造造和和重重新新组组合合，然然后后导导入入受受体体细细胞胞内内进进行行无无性性繁繁殖殖，使使重重组组基基因因在在受受体体细细胞胞内内表表达达，产生出人类所需的基因产物，也就定向地改造了生物的遗传性状。产生出人类所需的基因产物，也就定向地改造了生物的遗传性状。答案答案D D热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练1 1限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶“分子手术刀分子手术刀”(1)(1)来源来源主要来自于主要来自于 。(2)(2)特点特点识识别别双双链链DNADNA分分子子的的某某种种 序列；序列；使使每每一一条条链链中中特特定定部部位位的的两两个个核核苷苷酸酸之之间间的的 断裂。断裂。(3)(3)作用结果作用结果黏黏性性末末端端：在在所所识识别别序序列列的的 将将DNADNA的两条链分别切开时形成的末端。的两条链分别切开时形成的末端。平平末末端端：在在所所识识别别序序列列的的 处处切切开开时时形形成成的末端。的末端。基因工程的工具酶基因工程的工具酶原核生物原核生物特定核苷酸特定核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键中心轴线两侧中心轴线两侧中心轴线中心轴线热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练2 2DNADNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”(1)(1)种类种类(2)(2)作作用用结结果果：恢恢复复被被 切切开开的的两两个个核核苷苷酸酸之之间间的的 ，拼拼接接成新的成新的DNADNA分子。分子。种种类类比比较项较项目目Ecoli DNA连连接接酶酶T4DNA连连接接酶酶来源来源 .特点特点只能只能“缝缝合合”具有具有 的的双双链链DNA片段片段 既可以既可以“缝缝合合”双双链链DNA片片段互段互补补的的 又可又可以以“缝缝合合”双双链链DNA片段的片段的 .大肠杆菌大肠杆菌T T4 4噬菌体噬菌体互补的黏性末端互补的黏性末端黏性末端黏性末端平末端平末端限制酶限制酶磷酸二酯键磷酸二酯键热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练 思思维维激激活活22 限限制制酶酶的的存存在在对对细细菌菌的的生生存存有有何何重重要要意意义义？它它为为何何不切割自身的不切割自身的DNA?DNA?提提示示限限制制酶酶是是细细菌菌的的一一种种防防御御性性工工具具，当当外外源源DNADNA侵侵入入时时，会会利利用用限限制制酶酶将将外外源源DNADNA切切割割掉掉，以以保保证证自自身身的的安安全全。所所以以，限限制制酶酶在在原原核核生生物物中中主主要要起起到到切切割割外外源源DNADNA，使使之之失失效效，从从而而达达到到保保护护自自身身的的目目的的。细细菌菌中中限限制制酶酶之之所所以以不不剪剪切切自自身身DNADNA，是是因因为为微微生生物物在在长长期期的的进进化化过过程程中中形形成成了了一一套套完完善善的的防防御御机机制制，对于外源入侵的对于外源入侵的DNADNA可以降解掉。可以降解掉。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练1 1限制酶与限制酶与DNADNA连接酶比较连接酶比较(1)(1)区别区别作用作用应应用用限制限制酶酶使特定部位的磷酸二使特定部位的磷酸二酯键酯键断裂断裂用于提取目的基因和用于提取目的基因和切割切割载载体体DNA连连接接酶酶在在DNA片段之片段之间间重新重新形成磷酸二形成磷酸二酯键酯键用于基因表达用于基因表达载载体的体的构建构建热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练(2)(2)两者的关系可表示为两者的关系可表示为热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练2 2DNADNA连接酶与连接酶与DNADNA聚合酶的比较聚合酶的比较DNA连连接接酶酶DNA聚合聚合酶酶相同点相同点催化两个脱氧核苷酸之催化两个脱氧核苷酸之间间形成磷酸二形成磷酸二酯键酯键不不同同点点模板模板不需要模板不需要模板需要需要DNA的一条的一条链为链为模板模板作用作用对对象象游离的游离的DNA片段片段单单个的脱氧核苷酸个的脱氧核苷酸作用作用结结果果形成完整的形成完整的DNA分子分子形成形成DNA的一条的一条链链用途用途基因工程基因工程DNA复制复制热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练特特别别提提醒醒(1)(1)由由于于氢氢键键是是分分子子间间作作用用力力，其其断断裂裂与与重重新新形形成成均均与限制酶和与限制酶和DNADNA连接酶无关。连接酶无关。(2)(2)限限制制酶酶与与DNADNA连连接接酶酶的的化化学学本本质质均均是是蛋蛋白白质质，其其组组成成的的基基本本单单位是氨基酸。位是氨基酸。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练THANK YOUSUCCESS2024/3/12 周二周二18可编辑可编辑热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练【巩固巩固2 2】下列关于限制酶和下列关于限制酶和DNADNA连接酶的说法中，正确的是连接酶的说法中，正确的是()。A A其化学本质都是蛋白质其化学本质都是蛋白质B BDNADNA连接酶可恢复连接酶可恢复DNADNA分子中的氢键分子中的氢键C C在基因工程中在基因工程中DNADNA聚合酶可以替代聚合酶可以替代DNADNA连接酶连接酶D D限制酶切割后一定能产生黏性末端限制酶切割后一定能产生黏性末端解析限制酶和解析限制酶和DNADNA连接酶的化学本质都是蛋白质。连接酶的化学本质都是蛋白质。答案答案A A热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练1 1载体的种类有载体的种类有 、的衍生物、的衍生物、等。等。2 2常用载体常用载体质粒质粒(1)(1)质质粒粒是是一一种种裸裸露露的的、结结构构简简单单、独独立立于于细细菌菌拟拟核核DNADNA之之外外，并并 具具 有有 能能 力力 的的 分子。分子。(2)(2)质质粒粒DNADNA分分子子上上有有一一至至多多个个 位位点，供点，供 DNADNA片段插入其中。片段插入其中。(3)(3)质质 粒粒 上上 有有 特特 殊殊 的的 ，供供 重重 组组 DNADNA的的 。(4)(4)在在基基因因工工程程操操作作中中，真真正正被被用用作作载载体体的的质质粒粒，都都是是在在天天然然质粒的基础上经过质粒的基础上经过 的。的。基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体“分子运输车分子运输车”质粒质粒噬菌体噬菌体动植物病毒动植物病毒自我复制自我复制双链环状双链环状DNADNA限制酶切割限制酶切割外源外源标记基因标记基因鉴定和选择鉴定和选择人工改造人工改造热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练3 3重组重组DNADNA分子的模拟操作分子的模拟操作(1)(1)所所用用材材料料用用具具中中，剪剪刀刀代代表表 ，透明胶条代表，透明胶条代表 。(2)(2)用用剪剪刀刀切切割割时时，应应找找出出 序列，并在序列，并在 之间作切口进行之间作切口进行“切割切割”。(3)(3)若若操操作作正正确确，不不同同颜颜色色的的黏黏性性末末端端应应能能 。EcoEcoR R DNADNA连接酶连接酶G GA AA AT TT TC CG GA A互补配对互补配对热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练 思思维维激激活活3 3 在在重重组组DNADNA分分子子的的模模拟拟操操作作中中，剪剪刀刀所所剪剪位位置置应应属属何种部位？何种部位？提示剪刀所剪位置应为提示剪刀所剪位置应为3,53,5 磷酸二酯键。磷酸二酯键。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练1 1载体的作用载体的作用(1)(1)用它作为运载工具，将目的基因送入受体细胞中去。用它作为运载工具，将目的基因送入受体细胞中去。(2)(2)利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。2 2作为载体的必备条件作为载体的必备条件(1)(1)有一个或多个限制酶切割位点，供外源有一个或多个限制酶切割位点，供外源DNADNA片段插入。片段插入。(2)(2)具备自我复制能力，且能在受体细胞中复制并稳定保存。具备自我复制能力，且能在受体细胞中复制并稳定保存。(3)(3)带有标记基因，供重组带有标记基因，供重组DNADNA的鉴定和选择。的鉴定和选择。(4)(4)必须是安全的，不会对受体细胞有害。必须是安全的，不会对受体细胞有害。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练3 3载体的种类载体的种类(1)(1)细细菌菌质质粒粒，它它是是细细菌菌拟拟核核DNADNA以以外外的的小小型型双双链链环环状状DNADNA，有有的细菌只有一个，有的细菌有多个。的细菌只有一个，有的细菌有多个。(2)(2)噬菌体的衍生物和某些动植物病毒的噬菌体的衍生物和某些动植物病毒的DNADNA。一一般般来来说说，天天然然载载体体往往往往不不能能满满足足人人类类的的所所有有要要求求，因因此此人人们根据不同的目的和需求，对某些天然的载体进行人工改造。们根据不同的目的和需求，对某些天然的载体进行人工改造。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练特特别别提提醒醒(1)(1)质质粒粒是是基基因因工工程程中中最最常常用用的的载载体体，它它并并非非只只存存在在于于原原核核细细胞胞中中，某某些些真真核核细细胞胞(如如酵酵母母菌菌)中中也也存存在在质质粒粒，质质粒粒上上的的基基因因属属于于细细胞胞质质基基因因。它它能能自自我我复复制制，既既可可在在自自身身细细胞胞、受受体体细胞复制，也可在体外复制。细胞复制，也可在体外复制。(2)(2)供供目目的的基基因因插插入入的的酶酶切切位位点点所所处处的的位位置置必必须须是是在在载载体体本本身身需需要的基因之外，这样才不至于因目的基因的插入而使其失活。要的基因之外，这样才不至于因目的基因的插入而使其失活。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练【巩固巩固3 3】质粒是基因工程中最常用的载体，质粒是基因工程中最常用的载体，它存在于许多细菌体内，某细菌质粒上它存在于许多细菌体内，某细菌质粒上的标记基因如图所示，通过标记基因可的标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因以推知外源基因(目的基因目的基因)是否转移成功。是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，如图所示，外源基因在质粒中可插入上的生长情况也不同，如图所示，外源基因在质粒中可插入的位置有的位置有a a、b b、c c点。某同学根据实验现象对其插入的位点进点。某同学根据实验现象对其插入的位点进行分析，其中分析正确的是行分析，其中分析正确的是()。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练实验现实验现象象实验实验推推论论在含青霉素培养基在含青霉素培养基上生上生长长情况情况在含四在含四环环素培养基素培养基上生上生长长情况情况目的基因目的基因插入位置插入位置A能生能生长长能生能生长长aB不能生不能生长长能生能生长长bC能生能生长长不能生不能生长长cD不能生不能生长长不能生不能生长长c热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练解解析析若若外外源源基基因因插插入入a a或或b b点点，则则会会破破坏坏抗抗四四环环素素基基因因或或抗抗青青霉霉素素基基因因，则则在在含含有有四四环环素素或或青青霉霉素素的的培培养养基基上上不不能能生生长长，若若质质粒粒插插入入c c点点，两两种种基基因因保保持持完完整整，在在分分别别含含有有每每种种抗抗生生素素的的培培养养基基上都能生长。上都能生长。答案答案B B热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练【例例1 1】下列有关基因工程的叙述，正确的是下列有关基因工程的叙述，正确的是()。A A基因工程是细胞水平上的生物工程基因工程是细胞水平上的生物工程B B基因工程的产物对人类都是有益的基因工程的产物对人类都是有益的C C基因工程产生的变异属于人工诱变基因工程产生的变异属于人工诱变D D基因工程育种的优点之一是目的性强基因工程育种的优点之一是目的性强基因工程的概念及特点基因工程的概念及特点 热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练思维导图：思维导图：热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练深深度度剖剖析析本本题题考考查查基基因因工工程程的的概概念念。基基因因工工程程是是在在生生物物体体外外，通通过过对对DNADNA分分子子进进行行人人工工“剪剪切切”和和“拼拼接接”，对对生生物物的的基基因因进进行行改改造造(目目的的性性强强)和和重重新新组组合合(基基因因重重组组)，然然后后导导入入受受体体细细胞胞内内进进行行繁繁殖殖，使使重重组组基基因因在在受受体体细细胞胞内内表表达达，产产生生出出人人类类所所需需要要的的基基因因产产物物。但但并并不不是是所所有有的的基基因因产产物物对对人人类类都都有有益益。基基因因工工程程是是分子水平上的生物工程。分子水平上的生物工程。答案答案D D热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练思维深化基因工程的原理：思维深化基因工程的原理：(1)(1)不同生物不同生物DNADNA分子得以重新拼接的基础：分子得以重新拼接的基础：DNADNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸；的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸；双链双链DNADNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构；分子的空间结构都是规则的双螺旋结构；所所有有生生物物DNADNA碱碱基基对对均均遵遵循循严严格格的的“互互补补配配对对”原原则则，即即A A总总与与T T配配对对，G G总总与与C C配配对对如如此此，方方可可使使具具相相同同末末端端(黏黏性性末末端端或或平平末端末端)的不同的不同DNADNA分子得以连接在一起。分子得以连接在一起。(2)(2)外源基因在受体内表达的理论基础：外源基因在受体内表达的理论基础：基基因因是是控控制制生生物物性性状状的的遗遗传传物物质质的的结结构构和和功功能能单单位位，具具相相对对独独立性；立性；遗传信息的传递都遵循中心法则所阐述的信息流动方向；遗传信息的传递都遵循中心法则所阐述的信息流动方向；生物界共用一套遗传密码。生物界共用一套遗传密码。热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练【例例2 2】基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是G GGATCCGATCC，限制酶，限制酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GATCGATC。根。根据图示判断下列操作正确的是据图示判断下列操作正确的是()。基因工程的操作工具基因工程的操作工具 热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练A A目的基因和质粒均用限制酶目的基因和质粒均用限制酶切割切割B B目的基因和质粒均用限制酶目的基因和质粒均用限制酶切割切割C C质粒用限制酶质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割切割D D质粒用限制酶质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割切割思维导图：思维导图：热热 点点 考考 向向 示示 例例随随 堂堂 达达 标标 检检 测测课课 堂堂 互互 动动 探探 究究活活 页页 规规 范范 训训 练练THANK YOUSUCCESS2024/3/12 周二周二35可编辑可编辑