金黄色葡萄球菌检验课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,闽北职业技术学院食品与生物工程系,一、生物学特性,菌体形态及培养特征,革兰氏阳性球菌，直径为,0.5-1.0,微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,大多数菌株最适生长温度,30-37,，最适,pH,为,7.0-7.5,；,兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；,可在,15%,氯化钠和,40%,胆汁中生长。,一般用含,10%,氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或,7.5%,氯化钠肉汤增菌。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。,金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸。在,BP,平板产生磷脂环。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,生物学特性,致 病 性,金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：,a.,溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。,b.,杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；,c.,血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。,d.,脱氧核糖核酸酶（,DNA,酶）,e.,肠毒素：引起急性胃肠炎。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,葡萄球菌皮肤感染,闽北职业技术学院食品与生物工程系,葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。,当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经,8-10,小时即可相当数量的肠毒素。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,二、检验程序与操作方法,根据中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准：,食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验,GB 4789.10-94,金 黄 色 葡 萄 球 菌 检 验,闽北职业技术学院食品与生物工程系,检样,25g(ml)+225ml,灭菌生理盐水,国标：金黄色葡萄球菌检验程序,直接计数方法,增菌培养方法,Baird-parker,（贝尔德,-,帕克）,0.3ml,、,0.3ml,、,0.4ml,7,5,氯化钠肉汤或,胰酪胨大豆肉汤,血平板,血平板，,Baird-parker,涂片染色,观察溶血,血浆凝固酶试验,报 告,36,1 24hr,36,1 24hr,36,1 24hr,闽北职业技术学院食品与生物工程系,检验程序,增菌培养,利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受,15%,的氯化钠），用含,10%,氯化钠的胰酪胨大豆肉汤或,7.5%,氯化钠肉汤增菌。,置,37,摄氏度培养箱培养,24,小时。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,检验程序,分离培养,血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。,典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环,闽北职业技术学院食品与生物工程系,血平板制作,成分：豆粉琼脂（或营养琼脂）,100mL,，脱纤维羊血（或兔血）,5-10mL,。,制法：加热融化琼脂，冷至,50,，以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装灭菌试管，摆成斜面。,BP,（贝尔德,-,帕克）平板：,胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和矿物元素,丙酮酸钠是一种生长促进剂,亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色,卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环,甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,检验程序,分离培养,闽北职业技术学院食品与生物工程系,在,BP,平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光滑突起，湿润，直径,2-3mm,，边缘常为淡色（米黄色或灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。,长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其黑色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地较干燥。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,B-P,平板,闽北职业技术学院食品与生物工程系,革兰氏阳性，球形，组成葡萄状,检验程序,鉴定之革兰氏染色镜检,闽北职业技术学院食品与生物工程系,检验程序,鉴定之凝固酶试验,金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别的主要试验是测定其凝固酶。,方法一：试管法,吸取,1:4,新鲜兔血浆,0.5mL,，放入小试管中，再加入培养,24h,的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物,0.5mL,，振荡摇匀，放,36,1,恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察,6h,，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,试管法,闽北职业技术学院食品与生物工程系,阳性反应,阴性反应,不凝固,少量、零散凝固,明显的块状凝固,巨大块凝固,完全凝固，倒置不流动,闽北职业技术学院食品与生物工程系,有凝块,血浆,均匀混浊,生理盐水,方法二：玻片法,在一张洁净玻片中央加,1,滴生理盐水，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经,1020s,内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆,1,环（不用稀释），与菌悬液混合，观察结果。,兔血浆制备,成分：柠檬酸钠,0.106 mol/L,（,31.3g Na,3,C,6,H,5,O,7,2H,2,O,溶于,1L,蒸馏水中）,制法：一份加兔血,9,份混合后离心,2000rpm,，,10min,吸取上清液即为兔血浆。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,闽北职业技术学院食品与生物工程系,葡萄糖肉浸液肉汤的制备,成分：绞碎牛肉,500g,，氯化钠,5g,，蛋白胨,10g,，磷酸氢二钾,2g,，葡萄糖,10g,，蒸馏水,1000mL,，,pH7.4,7.6,。,制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉,500g,，与蒸馏水混合后放冰箱,24h,，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化钠和磷酸盐，溶解后校正,pH,，煮沸并过滤、分装，,12130min,高压灭菌。,闽北职业技术学院食品与生物工程系,25g,样品,+225ml,生理盐水,5mL,样品匀液（,1:10,）,+50mL,胰酪胨大豆肉汤,血平板,36,1 24hr,镜 检 与,肉浸液肉汤培养,血浆凝固酶,试验,报告结果,定性,检测,36,1 24hr,36,1 24hr,36,1 6hr,BP,平板,闽北职业技术学院食品与生物工程系,25g,样品,+225ml,生理盐水,选三个连续梯度，每个梯度分别取,1mL,接种之至表面干燥的,BP,平板（如,0.4mL,，,0.3mL,，,0.3mL,）,平板计数（分别记录每种类型的菌落数）,36,1 48hr,血平板、镜 检与,肉浸液肉汤培养,血浆凝固酶试验,报告结果,金葡菌数,/g(mL),定量,检测,（平板法）,每种类型选取一个菌落,36,1 24hr,36,1 6hr,适用于检测金黄色葡萄球菌数不小于,10/g,（,mL,）的食品,计算办法：（三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加）,血浆凝固酶阳性数,5,稀释倍数,梯度稀释,上午：准备的器材,第一天下午,规格名称,数量,1,、样品处理：鱼干、腊肉,2,、增菌培养,3,、,BP,平板制备及分离接种,4,、采集兔血的准备：抗凝剂制备、灭过菌的容器和玻璃珠,250ml,三角瓶,1,个,10100mm,试管,6,支,1ml,移液管,2,支,10ml,移液管,2,支,直径为,90mm,平皿,8,套,250ml,量筒,1,支,闽北职业技术学院食品与生物工程系,第一天 器材准备、样品处理、增菌培养和,BP,平板分离接种,闽北职业技术学院食品与生物工程系,第二天 接种选择性平板进行分离培养和玻片法血浆凝固酶试验,1,、血平板制备及兔血浆制备,2,、接种选择性平板,取增菌液,1,环，划线接种于血平板或,B,P,平板。,3,、培养,放于,36,1,培养,24h,。,4,、玻片法血浆凝固酶试验,第三天 观察分离结果、镜检和葡萄糖肉浸液肉汤制备及接种,第四天 血浆凝固酶试验（试管法）、实验报告,后面内容直接删除就行,资料可以编辑修改使用,资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等,公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、,PPT,设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field,