病理生理学-第七章---细菌感染的检查与防治.ppt

,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,第七章,细菌感染的检查与,防治,病原生物学,学习目标,掌握,：,细菌感染防治的主要原则。,熟悉,：,细菌学诊断的主要方法。,第一节,细菌,感染的检查方法,一、,细菌学诊断,（一）,标本,的采集与运送,标本,的采集与送检的质量好坏直接关系到检测结果的准确性。采集标本进行病原学和血清学检验，应注意以下原则：,1,早期采集,2,无菌,采集,3,根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒患者在病程,1,2,周内取血液，,2,3,周时取粪便,。,第一节,细菌,感染的检查方法,一、,细菌学诊断,（一）,标本,的采集与运送,标本,的采集与送检的质量好坏直接关系到检测结果的准确性。采集标本进行病原学和血清学检验，应注意以下原则：,4,采集的标本必须尽快送检，大多数细菌标本可冷藏送检，但对不耐寒冷的某些细菌，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌送检中要注意保温。粪便标本中含杂菌多，常置于甘油缓冲盐水保存液中。,5,标本作好标记，详细填写化验单，以保证各环节准确无误。,第一节,细菌,感染的检查方法,（二）细菌的分离培养与鉴定,原则上,所有标本均应作分离培养，以获得纯培养后进一步鉴定,。,根据,不同疾病采取不同标本如血、尿、粪便、咽拭子以及脑脊液等进行细菌的分离和鉴定，是确诊细菌性感染最可靠的方法。,第一节,细菌,感染的检查方法,1,细菌培养,分离,培养原则上所有标本均应作分离培养，以获得纯培养物后进一步鉴定,。,根据,菌落形态、气味、色素及培养基的特性，结合标本类型和患者的信息，可为进一步的鉴定提供线索或给出报告。,第一节,细菌,感染的检查方法,2,显微镜检查,主要,包括不染色标本和染色标本的检查,。,通过,观察细菌的有无、主要细菌群体和动力，可了解是否为细菌性感染，有无特殊动力，并可为下一步检查选择适宜的方法和途径,。,凡,在形态和染色性上具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检，还有助于初步诊断。,第一节,细菌,感染的检查方法,3,生化试验,细菌,的代谢活动依靠系列酶的催化作用，不同致病菌具有不同的酶系，故其代谢产物不尽相同，籍此可对一些致病菌进行鉴别,。,现,已有多种微量、快速、半自动或自动的细菌生化反应试剂条（板）和检测仪器研制成功，并有商品供应。,第一节,细菌,感染的检查方法,4,血清学鉴定,利用,已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌，以确定细菌的种、型，如用志贺菌属、沙门菌属等的特异性多价、单价诊断血清，与分离的待检菌做玻片凝集试验，鉴定菌种和确定菌型，是细菌学检验的常规方法。,第一节,细菌,感染的检查方法,5,动物试验,主要,用于分离、鉴定致病菌等,。,常用,实验动物有小鼠、豚鼠和家兔等,。,应,按实验要求，选用一定的体重和年龄，具有高度易感性的健康动物,。,接种,途径有皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内和灌胃等,。,第一节,细菌,感染的检查方法,5,动物试验,接种,后应仔细观察动物的食量、精神状态和局部变化，有时尚要测定体重、体温和血液等指标,。,若,动物死亡，应立即解剖，检查病变，或进一步作分离培养，证实由何病菌所致,。,含,杂菌多的标本，也可通过接种易感动物获得纯培养，达到分离致病菌的目的。,第一节,细菌,感染的检查方法,6,药物敏感试验,药,敏试验对指导临床选择用药，及时控制感染有重要意义,。,方法,有纸碟法、小杯法、凹孔法和试管法等，以单片纸碟法和试管稀释法常用,。,纸,碟法是根据抑菌圈有无、大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感,。,试管,法是以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长管为终点，该管含药浓度即为试验菌株的敏感度。,第一节,细菌,感染的检查方法,（三）病原菌抗原的检测,从,患者标本中分离并鉴定出病原菌，虽然是诊断某种细菌性感染的最可靠依据，但往往患者在发病早期使用了抗生素，标本中的病原菌已被抑制或被杀死，不可能分离出病原菌，因此我们可以通过检出病原菌的抗原成分达到这一目的,。,用,特异性抗体可检出极微量的细菌抗原成分。,第一节,细菌,感染的检查方法,常用于细菌学诊断的免疫学技术有：,1,酶免疫技术（,EIA,）,目前,常用的方法有酶联免疫吸附法和酶标免疫组化法,。,主要,用于淋病奈瑟菌、沙门菌、大肠埃希菌等检测。,2,协同凝集试验,以分泌,SPA,的金黄色葡萄球菌作为特异性抗体的载体，与待检抗原做协同凝集试验。常用于可溶性抗原的检测,。,该,方法简便、快速，并且提高了敏感性,。,临床,上用于流行性脑脊髓膜炎、伤寒、霍乱、淋病的早期诊断,。,第一节,细菌,感染的检查方法,常用于细菌学诊断的免疫学技术有：,3,免疫荧光技术（,IF,）,如用荧光菌球法检测抗原，当有可疑细菌在含荧光抗体的液体培养基中培养,4,6,小时后，即可在荧光显微镜下观察到荧光菌球,。,该,法省时、特异性和敏感性均较高,。,此,法还可直接从阳性标本中取出荧光菌球，进行分离培养获得纯种细菌,。,第一节,细菌,感染的检查方法,常用于细菌学诊断的免疫学技术有：,4,对流免疫电泳（,CIE,）,常用于检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌或流感嗜血杆菌特异性抗原,。,因,脑膜炎奈瑟菌易自溶，患者脑脊液中有可溶性抗原，采用,CIE,方法，,1,小时内即可得结果。,5,免疫印迹技术,由十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、转印与标记技术相结合完成对标本中细菌蛋白的检测。,第一节,细菌,感染的检查方法,（四）病原菌核酸的检测,1,核酸杂交技术,是,应用放射性核素或生物素、地高辛、辣根过氧化物酶等非放射性物质标记的已知序列核酸单链作为探针，在一定条件下，按照碱基互补原则与待测标本的核酸单链退火形成双链杂交体,。,然后,，通过杂交信号的检测，鉴定血清、尿、粪或活检组织等中有无相应的病原体基因及其分子大小。,第一节,细菌,感染的检查方法,（四）病原菌核酸的检测,1,核酸杂交技术,核酸,杂交技术有液相与固相之分,。,固相,核酸杂交较常用，有原位杂交、斑点杂交、,Southern,印迹、,Northern,印迹等,。,核酸,杂交可从标本中直接检出病原体，不受标本中的杂质干扰，对尚不能或难分离培养的病原体尤为适用,。,用,核酸杂交技术来检测细菌感染中的致病菌，有结核分枝杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希菌等。,第一节,细菌,感染的检查方法,2,PCR,技术,是,一种无细胞的分子克隆技术，能在体外经数小时的处理即可扩增成上百万个同一基因分子,。,PCR,技术的,基本步骤,为从标本中提取,DNA,作为扩增模板；选用一对特异寡核苷酸作为引物，经不同温度的变性、退火、延伸等使之扩增；扩增产物作溴乙锭染色的凝胶电泳，紫外线灯下观察特定碱基对数的,DNA,片段；出现橙红色电泳条带者为阳性。,若需进一步鉴定，可将凝胶中分离的,PCR,产物回收，再用特异探针确定。,第一节,细菌,感染的检查方法,2,PCR,技术,PCR,技术具有快速、灵敏和特异性强等特点,现已用于生物医学中的多个领域,。,在,细菌学方面，可用,PCR,技术检测标本中的结核分枝杆菌、淋病奈瑟菌、肠产毒素型大肠埃希菌、军团菌等中的特异性,DNA,片段。,第一节,细菌,感染的检查方法,3,基因芯片技术,基因,芯片技术是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效快速的核酸序列分析手段。,第一节,细菌,感染的检查方法,二、,血清学,诊断,用已知的细菌或其特异性抗原检测患者血清或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以作为感染性疾病的辅助诊断。由于多采取患者血清检测抗体，故常称为血清学诊断,。,血清学,诊断主要适用于抗原性较强的致病菌，以及病程较长的感染性疾病,。,也,可用于调查人群对某病原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的预防效果,。,第一节,细菌,感染的检查方法,二、,血清学,诊断,机体,血清中出现某种抗体，除患与该抗体相应的疾病外，亦可因曾受该菌隐性感染或近期预防接种所致。因此必须有抗体效价明显高于正常人的水平或随病程递增才有诊断价值,。,血清学,诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高,4,倍者方有意义,。,若,患者在疾病早期即用抗菌药物，病菌在体内繁殖不多，抗体增长可以不明显,。,所以,，细菌学检查和血清学诊断两者在细菌感染的确立方面是互为辅助的。,第一节,细菌,感染的检查方法,二、,血清学,诊断,常用,于细菌性感染的血清学诊断种类,有,：,直接,凝集试验（伤寒、副伤寒的肥达试验，立克次体的外斐试验等，钩端螺旋体病的显微镜凝集试验等）,；,乳胶凝集试验,（检测脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等抗体）；沉淀试验（梅毒的,VDRL,、,RPR,试验等）,；,补体结合试验,（检测,Q,热柯克斯体等抗体）,；,中和试验,（风湿病的抗,O,试验等）和,ELISA,等,。,第二节,细菌,感染的防治原则,一、细菌感染的特异性预防,特异性,预防是应用获得性免疫的原理，给机体注射或服用某种病原微生物（包括类毒素），或注射特异性抗体，以达到防治感染性疾病的目的，这种方法为人工免疫，根据其免疫产生的方式进一步又分为人工主动免疫和人工被动免疫,。,用,人工主动免疫方法通常称为预防接种或疫苗接种。,第二节,细菌,感染的防治原则,（一）,人工,主动免疫,人工主动免疫是将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于特异性预防。,1,疫苗,2,类毒素,第二节,细菌,感染的防治原则,1,疫苗,（,1,）死疫苗,死,疫苗是选用免疫原性强的细菌，经人工大量培养后，用理化方法杀死而成,。,死,疫苗易于保存，一般,4,可保存,1,年左右,。,但,接种剂量大，需接种多次，注射的局部和全身性副反应较大，且只产生体液免疫应答。,第二节,细菌,感染的防治原则,（,2,）活疫苗,亦,称减毒活疫苗，是用减毒或无毒力的活病原体制成,。,活疫苗,的菌株可以从自然界发现，或通过人工培育筛选,。,减,毒或无毒菌仍可在宿主体内有一定的生长和繁殖，犹如轻型或隐性感染，一般只需接种一次，剂量较小，副反应轻微或无，且免疫效果优于死疫苗，免疫较持久，能同时产生细胞免疫和体液免疫；活疫苗若以自然感染途径接种，尚有,sIgA,抗体的局部黏膜免疫形成,。,活疫苗,的缺点是需冷藏保存，保存期短。,第二节,细菌,感染的防治原则,（,3,）亚单位疫苗,根据,细菌抗原分析，查明不同致病菌的主要保护性免疫原存在的组分，然后将之制成的疫苗称为亚单位疫苗，如肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等的荚膜多糖疫苗。,第二节,细菌,感染的防治原则,（,4,）基因工程疫苗,利用,基因工程技术把编码病原体保护性抗原表位的目的基因，导入原核或真核表达系统后，用表达的保护性抗原所制成疫苗,。,实际上,也是一种亚单位疫苗。例如带有宋内志贺菌表面抗原质粒的伤害沙门菌,Ty21a,重组疫苗等,。,优点,是安全、经济、可批量生产，但技术要求高，对表达的保护性抗原蛋白质的回收和纯化较困难。,第二节,细菌,感染的防治原则,（,5,）核酸疫苗,也,称,DNA,疫苗,。,是,将能编码引起保护性免疫应答的病原体基因片段和可以在真核细胞表达的质粒重组，直接注射人宿主体内以表达目的免疫原，进而诱导出保护性体液和细胞免疫的新型疫苗,。,目前,，对核酸疫苗的保护效果、作用机制以及安全性等问题正在继续研究之中。,第二节,细菌,感染的防治原则,2,类毒素,细菌,外毒素经,0.3%,0.4%,甲醛液作用,3,4,周后可制成类毒素，其毒性消失但仍保持免疫原性。,第二节,细菌,感染的防治原则,（二）人工被动免疫,人工被动免疫是注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程，可用于某些急性传染病的紧急预防和治疗,。,但,因这些免疫物质不是患者自体产生，故维持时间短。,第二节,细菌,感染的防治原则,1,抗毒素,将,类毒素或外毒素给马进行多次免疫后，待马匹产生高效价抗毒素后采血，分离血清，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制剂,。,抗毒素,能中和相应外毒素，主要用于外毒素所致疾病的治疗和应急预防,。,临床,常用的有破伤风、白喉精制抗毒素、肉毒抗毒素以及气性坏疽多价抗毒素等,。,使用,这种异种抗毒素时应注意,I,型超敏反应问题。,第二节,细菌,感染的防治原则,2,血清丙种球蛋白,血清,丙种球蛋白是从正常人血浆中提取的丙种球蛋白制剂,。,胎盘,丙种球蛋白是从健康产妇的胎盘或婴儿脐带血液中提制而成，主要含有丙种球蛋白,。,因为,大多数成人患过多种疾病、经历过隐性感染或疫苗接种，故血清中含有多种微生物的特异性抗体,。,主要,用于对某些疾病的应急预防及烧伤患者预防细菌感染。也可用于丙种球蛋白缺乏症患者，以及长期化疗或放疗的肿瘤患者。,第二节,细菌,感染的防治原则,3,抗菌血清,由于,抗生素等抗菌药物的广泛应用，细菌性感染基本上能得到控制,。,因,细菌的菌型多，且抗菌血清的制备技术较繁杂并可能会引起超敏反应等，故采用抗菌血清的治疗技术已基本被淘汰,。,对于,由铜绿假单胞菌多重耐药菌株引起的严重烧伤疾病感染的治疗，尚可以考虑试用。,第二节,细菌,感染的防治原则,4,其他免疫制剂,目前,临床常用的有干扰素（,IFN,）、白细胞介素（,IL,）、集落刺激因子（,CSF,）以及淋巴因子激活的杀伤细胞（,LAK,细胞）等。,第二节,细菌,感染的防治原则,第二节,细菌,感染的防治原则,二、细菌感染的治疗,主要,是采用抗菌药物来治疗细菌感染,。,抗菌,药物是指天然或人工合成的化学制剂，包括人工合成的磺胺、喹诺酮类化学药物以及由微生物合成的抗生素类药物,。,在,抗感染的过程中，值得注意的是细菌还可以通过不同的方式对抗菌药物产生耐药性乃至多重耐药性，严重影响着临床治疗的效果,。,Thank 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