1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,专题二 微生物培养与应用,课题一 微生物试验室培养,第1页,1.何为培养基？不一样培养基有不一样配方，不过其基本成份都相同，都包含哪些营养成份？有何作用？请举例说明。,2.,无菌技术包含哪些方面？消毒和灭菌区分？惯用消毒方法有哪些？惯用灭菌方法有哪些？,自主学习:,培养基和无菌技术,第2页,一、培养基,人们按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质。,固体培养基,用于微生物分离、计数、判定,液体培养基,惯用于工业生产,第3页,微生物需要营养物质,不论哪
2、种培养基，普通都含有,水,、,碳源、和氮源、无机盐,等,营养物质，另外还需要满足微生物生长对,pH、特殊营养物质,(,比如,生长因子即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气、,二氧化碳,、,渗透压,等,要求。,第4页,消毒,使用较,温和物理或化学方法,仅杀死,物体表面或内部一部分,对人体有害微生物（,不包含芽孢和孢子,）。,灭菌,使用,强烈理化原因,杀死物体内,全部微生物,，,包含芽孢和孢子,。,二、无菌技术,第5页,惯用消毒方法,1、煮沸消毒法：100煮沸5-6min,2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min,3、用75
3、%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒,4、氯气消毒水源,5、紫外线消毒,二、无菌技术,第6页,1、灼烧灭菌,2、干热灭菌：,160,-170 下加热1-2h。,3、高压蒸气灭菌：,100kPa、121 下维持15-30min。,惯用灭菌方法,二、无菌技术,第7页,（一）制备培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,1.计算,2称量,3溶化,4灭菌,5倒平板,三、试验操作,第8页,倒平板技术,第9页,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,问题探讨,能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。,2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰
4、？,经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。,第10页,3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？,4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。,空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。,第11页,（二）纯化大肠杆菌,平板划线法,稀释涂布平板法,惯用微生物接种方法：,第12页,微生物接种技术,平板划线法,第13页,微生物接种技术,稀释涂布平板法,第14页,问题
5、探讨,1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？,第一步灼烧是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,第15页,2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,划线后，线条末端细菌数目比
6、线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。,第16页,问题探讨,涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？,应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,第17页,1、暂时保藏：,接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保留。,2、长久保留：,甘油冷冻管藏法,菌种保留,第18页,四、课题结果评价,（一）培养基制作是否合格,假如未接种培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基
7、制备是成功，不然需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求,假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。,（三）是否进行了及时细致观察与统计,培养12 h与24 h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。这一步要求主要是培养学生良好科学态度与习惯。,第19页,固体培养基：菌落,第20页,菌落,菌落是判定菌种主要依据,第21页,细菌菌落,有鞭毛细菌：,无鞭毛细菌：,有荚膜细菌：,无荚膜细菌：,菌落光滑,S型,菌落粗糙,R型,大而扁平，边缘波状或锯齿状。,较小较厚，边缘整齐。,第22页,
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