RNAfixer 无液氮RNA样品储存液操作方法及步骤说明书.doc

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◆ TRIpure Reagent 抽提指南
◆ 目录号 RP02
◆ 使用手册
◆ 实验室使用，仅用于体外
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RNAfixer 无液氮RNA样品储存液

目录号：RN15
目录编号
包装单位
RN1501
50ml
RN1502
100ml

v 产品储存和稳定性：
透明液体， 室温(18-25℃)保存期限为12 个月，如果使用时发现有沉淀或者析出，可以在37℃加热重新溶解后使用，不影响产品质量。
v 如何使用RNAfixer：
RNAfixer只用于新鲜组织，浸泡入RNAfixer前禁止冷冻组织。只需要迅速将新鲜组织剪成长，宽，高任意一边厚度<0.5厘米浸泡入RNAfixer即可（只要有一边厚度不超过0.5厘米，RNAfixer可以迅速渗透，其它两边的尺寸并不重要）。将新鲜组织浸泡在5倍体积的RNAfixer中，按照指示存放在适当的温度。
1. 动物组织
RNAfixer并不破坏或者溶解组织结构，因此浸泡在RNAfixer中达到渗透平衡的组织可以从RNAfixer中取出，然后切成更小的块，然后放回到RNAfixer中下次继续使用。小器官如小鼠肝，肾，和脾不需要剪切，可以完整的存放在RNAfixer中。
2. 植物组织
很多植物组织直接浸泡入RNAfixer即可，有的植物有天然渗透屏障如腊质保护层，需要先破坏掉腊质层，便于RNAfixer渗透。
3. 组织培养细胞
细胞吹打下来后，离心收集细胞,弃上清，用冰浴的PBS缓冲液洗一次去除残留培养液。将细胞悬浮在少量PBS缓冲液中。加入五到十倍体积RNAfixer, 混均。
4. 血和血浆
和红细胞和血清分离的白细胞可以和组织培养细胞一样的保存。RNAfixer也可以保存抗凝全血，血清和血浆。对于全血加入3倍体积RNAfixer，混匀。
5. 酵母
离心收集3X108的细胞（>12，000g离心两分钟），立刻将细胞团重悬在0.5–1 ml 的RNAfixer中。酵母细胞可以保存在RNAfixer中25℃8小时或者4℃一个星期。如果要保存存更长时间，将酵母细胞在RNAfixer中放置一个小时后， 再次于>12,000g离心5分钟，将酵母细胞团放入液氮瞬时冷冻后放置于–80℃储存。
6. 细菌
细菌并不能在RNAfixer 中生长，但是RNAfixer并不破坏细菌，E. coli在4℃ 保存一个月仍旧可以提出完整的RNA。
v RNAfixer中样本的存放：
1. 存放在–80℃
文档样品长期保存用。将RNAfixer中样本放置于4℃过夜，然后将样本捞出，尽量去除干净RNAfixer液体，然后放置于–80℃. 对于组织培养细胞，则不需要去除RNAfixer，直接冷冻于–80℃，并不会裂解细胞。样品使用时可以在室温融化，并且还可以再次冷冻而不影响RNA的完整性和产量。
2. 存放在–20℃
将RNAfixer中样本放置于4℃过夜，然后转移到–20℃。在–20℃样品并不会被冰冻，但是可能会形成一些结晶，这并不会影响将来的RNA提取。样品使用时可以在室温融化，并且还可以再次冷冻而不影响RNA的完整性和产量。
3. 存放在4℃
样本可以在4℃存放一个月。
4. 存放于25℃
存放于25℃样本的RNA在一周内保持完整，保存两周的样品RNA有轻微降解，勉强能用于northern analysis, 但是质量足够用于nuclease protection assay or RT-PCR analysis。
5. 存放于37℃
存放于37℃样本的RNA在24小时内保持完整，3天的时候有部分降解。
v RNAfixer保存样本的RNA提取：
将样本从RNAfixer中取出，RNAfixer可以直接倒入水池，用自来水冲即可，不需特殊处理。
1. 组织
用干净镊子将样本从RNAfixer中捞出，用吸水纸稍稍吸去残留的RNAfixer后，可以和新鲜组织一样按照液氮研磨，然后匀浆处理的标准程序进行提取RNA。
2. 细胞
对于储存在RNAfixer中的细胞有两种选择。一是去除RNAfixer后提取RNA, 另一个是直接从细胞和RNAfixer的混合物提取。
1) 去除RNAfixer后提取RNA
存放于RNAfixer中的细胞变得不那么脆弱，可以承受较高的离心速度而不被裂解。我们有在5000g离心成功收集细胞的经验， 由于每种细胞的强度不一样， 可以先用不重要的细胞做个预试验，以保证在使用的速度下离心不会破坏细胞。另一个选择是在离心前加等体积的PBS稀释RNAfixer和细胞的混合物，以减少溶液的密度，使细胞溶液可以沉淀下来。
2) 不去除RNAfixer，直接提取RNA
也可以直接加10倍体积的一步法提取试剂（如TRIpure，TRI reagent）到细胞和RNAfixer的混合物，然后按照正常步骤操作。
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