雪松醇调节miR-503-5p_TCF3轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.pdf

天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 9雪松醇调节miR-503-5p/TCF3轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响*冯燕枝，牛冰，叶贝贝（郑州人民医院乳腺外科，郑州450099）摘要：目的探讨雪松醇调节miR-503-5p/T细胞因子3（TCF3）轴对乳腺癌（BC）细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测BC组织和细胞中miR-503-5p及TCF3蛋白表达水平；以不同浓度的雪松醇（0、14、28、56、112、225 mol/L）干预MCF7细胞，噻唑蓝比色法（MTT）法检测细胞增殖情况；将MCF7细胞分为：control组（正常培养）、雪松醇组（112 mol/L）、inhibitor-NC（转染inhibitor-NC）、miR-503-5p inhibitor组（转染miR-503-5p inhibitor）。qRT-PCR检测细胞中miR-503-5p的表达水平；MTT法与胸腺嘧啶核苷类似物（Edu）染色和Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移和侵袭；蛋白免疫印迹（Westernblot）方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、TCF3蛋白的表达；双荧光素酶报告基因实验验证miR-503-5p和TCF3的靶向关系；小鼠体内肿瘤形成实验验证雪松醇对BC肿瘤生长及miR-503-5p/TCF3轴的影响。结果在BC组织和细胞中，miR-503-5p表达水平降低，TCF3蛋白表达水平升高（P0.05）。雪松醇抑制MCF7细胞增殖、迁移和侵袭，降低MCF7细胞中PCNA、MMP-2、TCF3蛋白表达水平（P0.05），抑制miR-503-5p表达可逆转雪松醇对MCF7细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P0.05）；双荧光素酶报告基因实验证实miR-503-5p靶向调控MCF7的表达（P0.05）；小鼠荷瘤实验结果显示，雪松醇可降低移植瘤质量和体积，提高移植瘤中miR-503-5p水平，降低TCF3、MMP-2表达水平（P0.05）。结论雪松醇能抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭，其机制可能与调控miR-503-5p/TCF3轴有关，miR-503-5p/TCF3轴可能成为治疗BC的一种新靶点。关键词：雪松醇；miR-503-5p/TCF3轴；乳腺癌；增殖；迁移；侵袭中图分类号：R737.9文献标志码：A文章编号：1672-1519（2023）09-1183-07DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2023.09.16*基金项目：2022年河南省医学科技攻关计划联合共建项目（LHGJ20220784）。作者简介：冯燕枝（1981-），女，副主任医师，主要从事乳腺外科研究。引用格式：冯燕枝，牛冰，叶贝贝.雪松醇调节miR-503-5p/TCF3轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响J.天津中医药，2023，40(9)：1183-1189.乳腺癌（BC）是最常见的恶性肿瘤之一，也是全球女性癌症死亡的主要原因1。尽管通过手术、化疗和放疗、内分泌治疗等对BC进行系统治疗有一定的效果，但因存在着不良反应、高成本和耐药性等局限性，因此仍需要开发更有效、毒性更低的新型药物，优化现有的治疗方法，以改善BC的预后，提高BC患者的生活质量2-4。雪松醇是一种天然倍半萜烯醇，已被证明具有广泛的生物活性，如抗菌、抗炎、镇痛、抗焦虑和抗癌作用5。研究发现，雪松醇可抑制胶质母细胞瘤6、肺癌7、结直肠癌8的发生发展。微小RNA（miRNA）表达失调与BC增殖、迁移和侵袭密切相关，多项报道显示，多种miRNA已成为BC药物干预的新靶点9-10。miR-503-5p作为重要的miRNA之一，在胃癌、结肠癌中下调表达，促进其表达可抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化11-12。miR-503-5p在BC中的作用尚不清楚。T细胞因子3（TCF3/TCF7L1）在BC中高表达，并能促进三阴性BC细胞的增殖、迁移和侵袭13。经生物信息学分析显示，miR-503-5p与TCF3之间存在结合位点，推测miR-503-5p可能通过调节TCF3影响BC的增殖、迁移和侵袭。但雪松醇通过调节miR-503-5p/TCF3轴对BC细胞增殖、迁移和侵袭的影响还不甚清楚，因此本实验旨在探讨雪松醇对BC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制，以期为临床治疗BC提供一定的参考价值。1183天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 91材料与方法1.1材料1.1.1标本收集、细胞来源和实验动物2021年3月2022年12月期间收集在本院首次确诊为BC患者的癌组织以及距离癌组织3 cm处的癌旁组织，共36对。所有患者均未接受化疗或放疗等形式的治疗，且签署了知情同意书，本研究获得本院伦理委员会的批准（批件号20210018）。人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及人BC细胞MCF7、MDA-MB-231、SKBR3购于美国ATCC。4周龄SPF级BALB/c裸鼠购自郑州大学（河南省实验动物中心），许可证号：SCXK（豫）2022-0001，体质量1520 g。1.1.2主要试剂与仪器雪松醇（货号J14535），上海金穗生物科技有限公司；噻唑蓝比色法（MTT）试剂盒（货号：MH1001），江苏麦格生物科技有限公司；细胞转染试剂盒（货号：SY0944），北京伊塔生物科技有限公司；DMEM培养基（货号：M0108B），上海盈湾生物科技有限公司；细胞蛋白提取试剂盒（货号：SH-2473），北京凯诗源生物科技有限公司；RNA提取试剂盒（货号：R1200-100）、反转录试剂盒（货号：RP1105）、胸腺嘧啶核苷类似物（Edu）apollo 488 in vitro试剂盒（货号：CA1172），北京索莱宝科技有限公司；实时荧光定量PCR试剂盒（货号：IBIO-C583），江西艾博因生物科技有限公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒（货号：RG029S），上海碧云天生物技术有限公司；兔源一抗增殖细胞核抗原（PCNA，货号：ab15498-PCNA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2，货 号：ab37150）、TCF3（货 号：ab229605）、3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH，货号：ab9485）一抗抗体，美国Abcam公司；辣根酶标记羊抗兔二抗（货号：XY0650），上海信裕生物科技有限公司；miR-503-5p引物购自广州RiboBio；miR-503-5p抑制剂（miR-503-5p inhibitor）及对照（inhibitor-NC）、miR-503-5p模拟物（miR-503-5pmimic）及其对照（mimic-NC）购自上海吉玛生物公司；多功能酶标仪（型号：LD-96A），山东莱恩德智能科技有限公司；离心机（型号：5424），艾本德中国有限公司；实时荧光定量PCR仪（型号：CFX96Touch），上海艾研生物科技有限公司；光学显微镜（型号：CX31），日本奥林巴斯公司。1.2实验方法1.2.1细胞培养将人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及人BC细胞MCF7、MDA-MB-231、SKBR3置入DMEM的培养基中，在恒温培养箱中常规培养。定期观察，及时更换新的培养基。用0.25%胰蛋白酶消化传代，收集对数生长期的细胞进行实验。1.2.2实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测miR-503-5p表达组织和细胞的总RNA用TRIzol试剂提取。以RNA为模板合成cDNA后，再以cDNA为模板配置qRT-PCR反应体系。miR-503-5p上游引物：5-CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA-3和下游引物：5-GTAATACGGTTATCCACGCG-3；U6上游引物：5-CTCGCTTCGGCAGCACA-3和下游引物：5-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3；以2-CT法计算组织和细胞中miR-503-5p的相对表达量。1.2.3MTT实验检测细胞增殖将对数生长期细胞以1104/孔，接种到96孔板中常规培养，设6个复孔，培养24 h后吸去原培养液，加入含0、14、28、56、112、225 mol/L雪松醇5的培养液48 h后加入MTT溶液20 L/孔，再培养4 h后，加入二甲基亚砜150 L/孔，充分震荡后，在酶标仪上于490 nm波长处检测各孔的吸光度（A490）值，细胞增殖抑制率（%）=（A对照-A实验）/（A对照-A空白）100%。1.2.4细胞转染及干预将细胞分为control组（正常培养）、雪松醇组（112 mol/L干预）、inhibitor-NC（转染inhibitor-NC）、miR-503-5p inhibitor组（转染miR-503-5p inhibitor），对各组转染组细胞进行转染24 h，除control组外，再用雪松醇进行干预48 h，随后按照1.2.2中qRT-PCR法方法检测各组miR-503-5p的表达。1.2.5细胞增殖实验各组MCF7细胞在96孔板上接种，浓度为1104/孔，设6个复孔。随后进行常规培养24、48、72 h后每孔加入20 L MTT溶液。继续培养4 h每孔再加入150 L的二甲基亚砜，在酶标仪上于490 nm波长处检测各孔的OD值。另取MCF7细胞接种至96孔板中，培养24 h后，每孔加入50 M Edu孵育2 h，弃去培养液，加入50 L的4%多聚甲醛固定30 min，洗去固定液，每个孔加入100 L的1Apollo染色反应液，避光孵育30 min后，细胞核用DAPI溶液复染，荧光显微镜下观察，计算Edu阳性细胞比例。1.2.6Transwell小室检测细胞迁移与侵袭将各组MCF7细胞使用无血清培养基稀释，接种至不含有Matrigel基质胶（迁移实验）或含有Matrigel基质胶（侵袭实验）的Transwell上室，下室加入完全培养1184天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 9表 1miR-503-5p 与 TCF3 在细胞中的表达（xs）Tab.1Expression of miR-503-5p and TCF3 in cells（xs）分组nmiR-503-5pTCF3/GAPDHMCF-10A61.000.000.270.02MCF760.160.01#1.790.14#MDA-MB-23160.380.04#1.530.12#SKBR360.420.05#1.450.10#注：与MCF-10A细胞比较，#P0.05。基，24 h后，用4%多聚甲醛固定30 min，并用0.5%结晶紫染色20 min，显微镜下随机选择6个视野细胞计算迁移与侵袭细胞数。1.2.7蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PCNA、MMP-2、TCF3蛋白表达采用试剂盒提取组织和细胞总蛋白，对蛋白进行定量、电泳分离。转PVDF膜后室温封闭2 h，最后再分别加入PCNA（11000）、MMP-2（12 000）、TCF3（12 000）、GAPDH（11 000）一抗在4条件下孵育过夜，加入二抗（12 000）在37 条件下孵育90 min。Image J软件分析蛋白条带的灰度值，计算蛋白的相对表达水平。1.2.8双荧光素酶报告基因实验构建TCF3野生型质粒和突变型质粒（TCF3-WT，TCF3-MUT），将TCF3-WT和TCF3-MUT分别与mimic-NC或miR-503-5p mimic共转染于MCF7细胞，48 h后用荧光酶标仪检测荧光素酶活性，并计算萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值。1.2.9体内肿瘤形成实验4周龄BALB/c裸鼠适应性饲养1周后，皮下注射200 L（5106）MCF7细胞悬液，每天观察肿瘤生长情况，待肿瘤体积达到50 mm3后，将裸鼠分成两组（10只/组）：对照组、雪松醇组，雪松醇组皮下注射150 mg/kg雪松醇，2 d/1次，共给药10次。给药结束后测量小鼠质量，颈椎脱臼处死小鼠并分离肿瘤，测量肿瘤质量与体积，qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-503-5p表达，免疫组化法检测TCF3、MMP-2蛋白表达。1.3统计学方法Graphpad Prism 7.0软件用于分析数据。数据采用均数标准差（xs）表示。两组间比较采用独立样本t检验。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。P0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1miR-503-5p与TCF3在组织和细胞中的表达与癌旁组织比较，BC组织中miR-503-5p表达水平降低（1.000.02 vs.0.250.02），TCF3蛋白表达水平（0.310.04 vs.1.570.11）升高（P0.05），见图1。与MCF-10A细胞比较，MCF7、MDA-MB-231、SKBR3细胞中miR-503-5p表达水平降低，TCF3蛋白表达水平升高，且MCF7细胞中miR-503-5p表达水平最低，TCF3蛋白表达水平最高，因此，选择MCF7细胞进行转染实验，见图2和表1。2.2雪松醇对MCF7细胞的增殖抑制情况与0 mol/L比较，MCF7细胞增殖抑制率在14、28、56、112、225 mol/L雪松醇处理下以剂量依赖性的方式（6.14 1.15）%、（12.78 2.10）%、（25.58 2.47）%、（43.643.12）%、（56.843.28）%显著增加（P0.05），本研究选取112 mol/L雪松醇进行后续实验。2.3雪松醇对MCF7细胞中miR-503-5p表达的影响与control组（1.000.01）比较，雪松醇组MCF7细胞中miR-503-5p表达水平（1.870.15）显著升高（P0.05）；与雪松醇组、inhibitor-NC（1.850.12）比较，miR-503-5p inhibitor组MCF7细胞中miR-503-5p表达水平（0.150.01）显著降低（n=6，P0.05）。2.4雪松醇对各组MCF7细胞增殖的影响与control组比较，雪松醇组MCF7细胞在24、48、72 h的OD490值和Edu阳性细胞率显著降低（P0.05）；与雪松醇组、inhibitor-NC比较，miR-503-5p inhibitor组MCF7细胞在24、48、72 h的OD490值和Edu阳性细胞率显著升高（P0.05），见图3和表2。2.5雪松醇对各组MCF7细胞迁移与侵袭的影响与control组比较，雪松醇组MCF7细胞迁移与侵袭数显著降低（P0.05）；与雪松醇组、inhibitor-NC图 1Western blot 检测组织中 TCF3 蛋白表达Fig.1Western blot detection of TCF3 protein expression intissues图 2 Western blot 检测细胞中 TCF3 蛋白表达Fig.2Western blot analysis of TCF3 protein expression incells1185天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 9表 2各组 MCF7 细胞 OD490值及 Edu 阳性率比较（xs）Tab.2Comparison of OD490value and Edu positive rate ofMCF7 cells in each group（xs）分组nOD490值Edu阳性率（%）24 h48 h72 hcontrol组61.170.121.280.121.390.1439.562.45雪松醇组60.520.04#0.780.08#0.870.09#15.371.16#inhibitor-NC组60.530.050.760.060.880.0714.701.13miR-503-5p inhibitor组60.850.08*0.980.11*1.250.13*28.432.09*注：与control组比较，#P0.05；与雪松醇组比较，*P0.05；与inhibitor-NC比较，P0.05。图 3Edu 染色观察各组细胞增殖（比例尺=50 m）Fig.3Observation of cell proliferation by Edu staining in each group（bar=50 m）比较，miR-503-5p inhibitor组MCF7细胞迁移与侵袭数显著升高（P0.05），见图4和表3。2.6雪松醇对各组MCF7细胞PCNA、MMP-2、TCF3蛋白表达的影响与control组比较，雪松醇组MCF7细胞中PCNA、MMP-2、TCF3蛋白表达水平显著降低（P0.05）；与雪松醇组、inhibitor-NC比较，miR-503-5p inhibitor组MCF7细胞中PCNA、MMP-2、TCF3蛋白表达水平显著升高（P0.05），见图5和表4。2.7双荧光素酶报告实验检测miR-503-5p和TCF3的靶向关系经starbase在线预测显示，miR-503-5p与TCF3基因有靶向结合位点，见图6。与mimic-NC和TCF3-WT共转染组比较，miR-503-5pmimic和TCF3-WT共转染组的荧光素酶活性降低（P0.05）；与mimic-NC和TCF3-MUT共转染组比较，miR-503-5p mimic和TCF3-MUT共转染组荧光素酶活性变化无统计学意义（P0.05），见表5。2.8雪松醇对裸鼠移植瘤生长的影响小鼠荷瘤实验结果表明，与对照组比较，雪松醇组小鼠移植瘤质量与体积明显下降（P0.05）；qRT-PCR结果显示，雪松醇组移植瘤中miR-503-5p水平升高（P0.05）；免疫组化检测结果显示，雪松醇组移植瘤中，TCF3、MMP-2蛋白表达水平显著降低（P0.05），见图7、8和表6。3讨论BC因其高病死率和发病率而成为女性的主要健康问题，即使使用辅助化疗，转移性BC的30年生存率也低于1%14。因此，揭示BC发生的关键分1186天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 9表 5各组荧光素酶活性比较（xs）Tab.5Comparison of luciferase activity in each group（xs）分组n荧光素酶活性mimic-NCTCF3-WT组61.020.07miR-503-5p mimicTCF3-WT组60.480.04#mimic-NCTCF3-MUT组61.040.11miR-503-5p mimicTCF3-MUT组61.030.08注：与mimic-NCTCF3-WT组比较，#P0.05。表 4各组 MCF7 细胞中 PCNA、MMP-2、TCF3 蛋白表达比较（xs）Tab.4Comparison of the PCNA，MMP-2 and TCF3protein expression in MCF7 cells in each group（xs）分组nPCNA/GAPDHMMP-2/GAPDHTCF3/GAPDHcontrol组61.740.131.560.151.580.13雪松醇组60.480.04#0.360.03#0.530.05#inhibitor-NC组60.510.050.390.040.510.04miR-503-5p inhibitor组60.960.10*0.840.07*0.970.09*注：与control组比较，#P0.05；与雪松醇组比较，*P0.05；与inhibitor-NC比较，P0.05。注：A.control组；B.雪松醇组；C.inhibitor-NC组；D.miR-503-5pinhibitor组。图 5Western blot 检测 MCF7 细胞中 PCNA、MMP-2、TCF3 蛋白表达Fig.5Expression of the PCNA，MMP-2 and TCF3 inMCF7 cells detected by Western blot表 3各组 MCF7 细胞迁移与侵袭细胞数比较（xs）Tab.3Comparison of the migration and invasion of MCF7cells in each group（xs）分组n迁移细胞数侵袭细胞数control组6157.266.42128.395.76雪松醇组663.284.21#52.633.28#inhibitor-NC组665.804.6354.703.61miR-503-5p inhibitor组6125.925.37*106.384.93*注：与control组比较，#P0.05；与雪松醇组比较，*P0.05；与inhibitor-NC比较，P0.05。图 4Transwell 检测各组 MCF7 细胞迁移与侵袭（比例尺=100 m）Fig.4Migration and invasion of MCF7 cells detected by Transwell in each group（bar=100 m）子机制，对于提高BC患者的诊断和治疗水平具有重要意义。雪松醇因具有良好的抗肿瘤活性而备受关注。雪松醇通过诱导细胞周期停滞和细胞凋亡抑制体内体外结直肠癌、肺癌的生长，被认为是治疗结直肠癌、肺癌的有效药物5，7。Chang等6研究发现，雪松醇通过诱导细胞内活性氧（ROS）生成、触发DNA损伤和阻断雄激素受体的核易位，有效抑制胶质母细胞瘤细胞生长。此外研究发现，雪松醇通过阻断丝苏氨酸蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）途径降低胶质母细胞瘤对替莫唑胺的耐药性，通过质膜脂质筏的失稳增强癌细胞化疗的敏图 6miR-503-5p 与 TCF3 的结合位点与突变位点Fig.6Binding sites and mutation sites of miR-503-5pand TCF3个1187天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 9表 6各组裸鼠移植瘤生长、miR-503-5p 和 TCF3、MMP-2 蛋白表达比较（xs）Tab.6Comparison of xenograft tumor growth，miR-503-5p and TCF3，MMP-2 protein expression in nude mice ineach group（xs）分组动物数小鼠体质量（g）移植瘤体积（mm3）移植瘤质量（g）miR-503-5pTCF3阳性率（%）MMP-2阳性率（%）对照组1026.141.751 438.46195.721.160.131.030.1036.762.4143.653.12雪松醇组1025.831.48562.79 96.14#0.470.05#1.920.15#15.921.72#17.381.58#注：与对照组比较，#P0.05。图 8免疫组化检测移植瘤组织中 TCF3、MMP-2 蛋白表达（比例尺=100 m）Fig.8Immunohistochemical detection of TCF3 andMMP-2 protein expression in transplanted tumor tissues（bar=100 m）感性6，15。本研究发现，雪松醇降低MCF-7细胞OD490值、Edu阳性细胞率、迁移与侵袭数、PCNA、MMP-2蛋白表达水平和移植瘤质量。提示，雪松醇可抑制MCF7细胞增殖、迁移和侵袭，具有抗BC的作用。越来越多的证据表明miRNAs可作为癌症的诊断标志物和治疗靶点16。miR-503-5p在多数肿瘤中呈低表达，发挥抗癌基因的作用，如在胃癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌中低表达，过表达miR-503-5p后可抑制肿瘤细胞的生长、迁移和侵袭等恶性行为。本研究发现，miR-503-5p在BC组织和细胞中低表达，雪松醇可促进miR-503-5p在MCF7细胞和移植瘤中的表达，并且抑制miR-503-5p表达后，可逆转抑制雪松醇对MCF7细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。推测雪松醇可能通过上调miR-503-5p表达，从而抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭。miRNA通过与靶mRNA内的互补序列进行碱基配对，在基因表达的转录后调控中发挥作用。经生物信息学分析显示，miR-503-5p与TCF3之间存在结合位点，双荧光素酶报告基因实验证实了miR-503-5p与TCF3之间存在靶向关系。TCF3是Wnt通路相关T细胞特异性转录因子/淋巴增强因子（TCF/LEF）转录因子家族的成员。研究表明，TCF3在包括BC在内的多种肿瘤中发挥促癌作用13。然而，致癌驱动因素TCF3如何影响BC进展的分子机制尚未完全阐明。本研究发现，TCF3蛋白在BC组织中和细胞中高表达，雪松醇可下调TCF3在MCF7细胞和移植瘤中的表达，而抑制miR-503-5p表达后，TCF3蛋白表达水平升高，减弱了雪松醇对TCF3蛋白表达的抑制作用，证实了雪松醇可能通过上调miR-503-5p表达来下调TCF3蛋白表达，进而抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭。综上所述，雪松醇能抑制BC细胞增殖、迁移和侵袭，其机制可能与调控miR-503-5p/TCF3轴有关，miR-503-5p/TCF3轴可能成为治疗BC的新靶点，然而本研究尚存在不足之处，仅验证了雪松醇调控miR-503-5p/TCF3轴对BC细胞增殖、迁移和侵袭的作用，而未对其他靶点和通路进行验证，后续需要进一步开展研究。参考文献：1THORAT M A，BALASUBRAMANIAN R.Breast cancer preventioninhigh鄄riskwomenJ.BestPractice&ResearchClinicalObstetrics&Gynaecology，2020，65：18-31.2TABOR S，SZOSTAKOWSKA鄄RODZOS M，FABISIEWICZ A，et al.How to predict metastasis in luminal breast cancer?current solu鄄tions and future prospectsJ.International Journal of Molecular Sci鄄ences，2020，21(21)：8415.3ABOTALEB M，KUBATKA P，CAPRNDA M，et al.Chemothera鄄peuticagentsforthetreatmentofmetastaticbreastcancer：anupdateJ.Biomedicine&Pharmacotherapy，2018，101：458-477.4GARC魱A鄄ARANDA M，REDONDO M.Immunotherapy：a challengeof breast cancer treatmentJ.Cancers，2019，11(12)：1822.5CHIEN J H，CHANG K F，LEE S C，et al.Cedrol restricts the growthof colorectal cancer in vitro and in vivo by inducing cell cycle arrestand caspase鄄dependent apoptotic cell deathJ.International Journalof Medical Sciences，2022，19(13)：1953-1964.6CHANG K F，HUANG X F，CHANG J T，et al.Cedrol suppresses图 7各组小鼠剥离的移植瘤Fig.7Transplanted tumors of mice in each group1188天 津 中 医 药 23年9月第40卷第9期Sep.23,40 9Effect of cedarol on proliferation，migration and invasion of breast cancer cells by regulating miR鄄503鄄5p/TCF3 axisFENG Yanzhi，NIU Bing，YE Beibei（Department of Breast Surgery，Peoples Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450099，China）Abstract：Objective To investigate the effect of cedarol on the proliferation，migration and invasion of breast cancer（BC）cells byregulating miR鄄503鄄5p/T cell factor 3（TCF3）axis.Methods The expression levels of miR鄄503鄄5p and TCF3 protein in BC tissues andcells were detected by real鄄time fluorescent quantitative PCR（qRT鄄PCR）and Western blot respectively；MCF7 cells were treated withdifferent concentrations of cedarol（0，14，28，56，112，225 mol/L）.Cell proliferation was detected by MTT method；MCF7 cells weregrouped into control group（normal culture），cedarol group（112 mol/L），inhibitor鄄NC（transfected with inhibitor鄄NC），miR鄄503鄄5pinhibitor group（transfected with miR鄄503鄄5p inhibitor）.The expression level of miR鄄503鄄5p in cells was detected by qRT鄄PCR；cellproliferation，migration and invasion were detected by MTT method，Edu staining and Transwell cell，respectively；Western blot wasapplied to detect the expression of proliferating cell nuclear antigen（PCNA），matrix metalloproteinase鄄2（MMP鄄2）and TCF3 proteins；thetarget relationship between miR鄄503鄄5p and TCF3 was verified by double luciferase reporter gene experiment；the effect of cedarol on thegrowth of BC tumor and the miR鄄503鄄5p/TCF3 axis was verified by the tumor formation experiment in mice.Results In BC tissues andcells，the expression level of miR鄄503鄄5p decreased and the expression level of TCF3 protein increased（P0.05）.Cedarol inhibited theproliferation，migration and invasion of MCF7 cells and decreased the expression of PCNA，MMP鄄2 and TCF3 proteins in MCF7 cells（P0.05），inhibition of miR鄄503鄄5p expression could reverse the inhibitory effects of cedarol on the proliferation，migration and invasion ofMCF7 cells（P0.05）；the double luciferase reporter gene experiment confirmed that miR鄄503鄄5p targeted the expression of MCF7（P0.05）；the results of tumor鄄bearing experiment in mice showed that cedarol could reduce the weight and volume of transplanted tumors，increasethe level of miR鄄503鄄5p in transplanted tumor，and reduce the level of TCF3 and MMP鄄2 expression（P0.05）.Conclusion Cedarol caninhibit the proliferation，migration and invasion of BC cells，and its mechanism may be related to the regulation of miR鄄503鄄5p/TCF3axis，which may become a new target for the treatment of BC.Keywords：cedarol；miR鄄503鄄5p/TCF3 axis；breast cancer；proliferation；migration；cell invasionglioblastoma progression by triggering DNA damage and blockingnuclear translocation of the androgen receptorJ.Cancer Letters，2020，495：180-190.7YUN H J，JEOUNG D J，JIN S，et al.Induction of cell cycle arrest，apoptosis，and reducing the expression of MCM proteins in humanlung carcinoma A549 cells by cedrol，isolated from Juniperus chi鄄nensisJ.Journal of Microbiology and Biotechnology，2022，32(7)：918-926.8JIN S，PARK J H，YUN H J，et al.Cedrol，a sesquiterpene isolatedfrom Juniperus chinensis，inhibits human colorectal tumor growthassociated through downregulation of minichromosome maintenanceproteinsJ.Journal of Cancer Prevention，2022，27(4)：221-228.9LIU Z H，ZHOU Y，LIANG G H，et al.Circular RNA hsa_circ_001783 regulates breast cancer progression via sponging miR鄄200c鄄3pJ.Cell Death&Disease，2019，10：55.10 SHEN S J，SONG Y，ZHAO B，et al.Cancer鄄derived