农药残留快速检测仪.docx

蔬果中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量测定

摘 要
农药残留快速检测仪的原理是酶抑制法，本文借助广州瑞森生物科技有限公司的RS-PR-18农药残留快速检测仪为基础，依据国家标准GB/T 5009.199-2003，能快速检出蔬菜、水果、粮食、茶叶、水及土壤中有机磷和氨基甲酸脂类农药残留，适用于各级农业检测中心、工商部门、生产基地、农贸市场、超市、卫生、环保、学校等领域。

【关键词】蔬菜、有机磷、氨基甲酸酯类、农药残留、农药残留快速检测仪

一.前言
十八届三中、四中全会，中央农村工作会议的召开，注重讲述有关农产品的质量安全，2015年就已经发生了西瓜、茶叶等农药残留事件，人们对舌尖上的安全问题愈发重视。
本文使用广州瑞森生物科技有限公司的PS-PR-18农药残留快速检测仪，遵照中华人民共和国国家标准《GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》提供的方法，检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量。
二.试剂及仪器设备
1 材料：油麦菜
2 试剂：缓冲液、底物、显色剂、胆碱酯酶、甲胺磷标准液
3 仪器设备：PS-PR-18农药残留快速检测仪、5ml可调移液枪、100μl 6通道移液枪（检测仪配备）、200ml单通道可调移液枪、电子天平、剪刀、锥形瓶、镊子。
三.实验方法
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用农药残留快速检测仪在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药存在。
实验步骤

检测结果
样品检测
对照实验
样品预处理
仪器预热

1. 样品预处理
选取有代表性的蔬菜样品（本实验用白菜作为样品），洗去白菜样品表面的泥土，剪成1～2cm左右的放碎片。每个样品称取2g于烧杯或提取瓶中（共六个样品），各加入5ml缓冲溶液，振荡1～2min，倒出提取液，静止3～5min，待用。
2. 对照溶液测试
于对照通道放入比色皿，加入2.5ml缓冲液，再加入100µL酶液，100µL显色剂，用专用移液器吸打3-5次混匀，并按对照按钮（让其在37℃环境下放置15min）；加入100µL底物喷打均匀，盖上盖子，按反应计时按钮让其反应3min，并记录吸光度变化值ΔA0。
3. 样品溶液测试
往样品槽中放入6个比色皿，于干净无水滴的比色皿中加入2.5ml样品提取液，再加入100µL酶液，100µL显色剂，用专用移液器吸打3-5次混匀，并按样品检测按钮（让其在37℃环境下放置15min）；加入100µL底物喷打均匀，盖上盖子，点击对应的比色槽进行检测，让其反应3min，并记录吸光度变化值ΔA。
反应计时完成后会在7.0寸大屏幕全中文液晶显示检测结果，如表1所示。
表1
通道
透射比
ΔA
抑制率
ΔAc
1

2

3

4

5

6

得出样品的抑制率，抑制率＜50%时，样品合格；抑制率≥50%时，为可疑农药残留超标样品，须复检。点击“打印”，打印出本次检测结果。

四.实验结果及比较分析
1.农药残留快速检测仪各通道的一致性：
考察了RS-PR-18农药残留快速检测仪甲胺磷标准品在不同抑制率条件下各通道的一致性，结果如表2所示。
表2
标准品
槽
通道1
通道2
通道3
通道4
通道5
通道6
A
1
3.3%
4.9%
3.2%
5.0%
5.2%
3.8%
B
2
53.2%
54.6%
53.8%
56.1%
54.5%
52.9%
C
3
69.5%
68.8%
71.2%
71.5%
69.6%
72.4%
由表2可知，仪器各通道之间具有良好的一致性。
2.考察农药残留快速检测仪的重复性
以甲胺磷标准溶液为待测样品，考察其抑制率在70%时测量的重复性，计算14次的平均值为70.8%，相对标准偏差为1.6。
3.相同反应时间内有设定恒温跟没有设定恒温的两种结果比较
使用6通道移液枪对甲胺磷标准品在20℃的室内环境中分别于预设仪器反应温度（37℃）和不设定仪器温度两种情况做检测试验，结果如表3、表4所示：
表3 反应温度为37℃
通道
透射比
ΔA
抑制率
ΔAc
C.V
1

0.823
3.3%
0.851
21.37%
2

0.809
4.9%
3

0.824
3.2%
4

0.808
5.0%
5

0.807
5.2%
6

0.819
3.8%

表4 反应温度为室内环境温度
通道
透射比
ΔA
抑制率
ΔAc
C.V
7

0.715
13.1%
0.823
42.20%
8

0.738
10.3%
9

0.652
20.8%
10

0.745
9.5%
11

0.595
27.7%
12

0.671
18.5%
从变异系数(C.V)可以看出在反应温度为37℃时的抑制率离散程度较室内环境温度的离散程度小。酶在非最适反应温度时的作用效果不稳定，导致相同条件下每个通道的酶活也有较大的差异，而且反应效率偏低，表现为抑制率相对增大；酶在最适反应温度时作用效果稳定且效率最高，检测结果也就越准确。
4. 反应温度为37℃下6通道移液枪跟单通道移液枪加样比较
反应温度为37℃下，对甲胺磷标准品分别用6通道移液枪跟单通道移液枪两种情况做检测试验，结果如表5、表6所示：
表5 6通道移液枪
通道
透射比
ΔA
抑制率
ΔAc
C.V
t（min）
1

0.823
3.3%
0.851
21.37%
50
2

0.809
4.9%
3

0.824
3.2%
4

0.808
5.0%
5

0.8.7
5.2%
6

0.819
3.8%

表6 单通道移液枪
通道
透射比
ΔA
抑制率
ΔAc
C.V
t（min）
7

0.822
3.3%
0.851
48.71%
65
8

0.812
4.6%
9

0.753
11.5%
10

0.761
10.6%
11

0.722
15.2%
12

0.742
12.8%
采用6通道移液枪对6个样品进行检测，总用时50min，减去反应时间和检测时间的36min，每个样品的试剂添加时间为2min；采用单通道移液枪对6个样品进行检测，总用时65min，减去反应时间和检测时间的36min，每个样品的试剂添加时间为4min,。采用6通道枪添加试剂的时间比单通道添加试剂的时间减少一半，试验时间明显缩短，更为符合快速检测。而且，从变异系数（C.V）来看，单通道移液枪组数据差异较6通道大，6通道加样的实验数据平行性好，控制差距在0.05以内。
5.对实际样品的检测
以经甲胺磷特殊处理的蔬菜进行检测，并对检出抑制率≥50%的18份样品用气相色谱-质谱联用（GC/MS）进行复检。结果表明对于这18份样品，RS-PR-18农药残留快速检测仪的检测结果与气象色谱法检测的结果符合率为89.6%。

五.农药残留快速检测仪的应用领域
农药残留快速检测仪由于操作简单、检测速度快、适用于现场等特点，广泛应用于工商局、技术监督局稽查大队、卫生疾控等执法部门。农药残留快速检测仪可以配置于食品安全检测车，将实验室转移到现场，可以在各类农贸市场、专业批发市场、超市、副食品商场、学校食堂、酒店等场所流动检测，真正实现了流通领域农药残留的动态监管。
六.总结
RS-PR-18农药残留快速检测仪准确度高，平行性好，重复性好，完全符合国家标准GB/T 5009.199-2003所规定的技术要求指标，而且该仪器由于操作简单、检测速度快、体积小等特点特别适用于现场，尤其适用于各级农业检测中心、工商部门、生产基地、农贸市场、超市、卫生、环保、学校等领域，实现流通领域的动态监管。

附录：
1、RS-PR-18农药残留快速检测仪相关特性
1）技术特点
1、多通道测试技术，可同时检测18个样品。
2、7.0寸大屏幕全中文液晶显示。
3、超高亮LED光源，具有节能、环保、省电、寿命长、响应速度快的优点；硅半导体作为信号接收系统。
4、内置热敏打印机，打印测试结果。
5、具有自动保存检测结果，能存储5000组以上数据，并能查询保存的记录。
6、带有显色时间和反应时间设定功能。
7、内置加热恒温模块，自动恒温达到最佳反应温度，无需另外配置恒温箱。
8、配置6通道专用移液器，实现通道间无差异化加样，避免加样反应时间差对实验结果带来的误差，同时能有效提高工作效率、减轻实验负担。
9、配置USB接口，可与电脑进行连接，实现数据存储，分析，上传等功能。
2）技术参数
1、光源波长：410±2nm
2、透射比准确度：±0.1﹪
3、透射比重复性：±0.2﹪　
4、抑制率测量范围：0～100％
5、各通道误差：±0.2％
6、控温范围：37℃±0.5℃
7、零点透光率漂移：≤0.2%/ 3min 光电流漂移：0.5％/3min
8、使用环境：温度：0℃~45℃；湿度：≤85%